時(shí)間：2023-05-30 09:38:47
開篇：寫作不僅是一種記錄，更是一種創(chuàng)造，它讓我們能夠捕捉那些稍縱即逝的靈感，將它們永久地定格在紙上。下面是小編精心整理的12篇診斷試劑，希望這些內(nèi)容能成為您創(chuàng)作過程中的良師益友，陪伴您不斷探索和進(jìn)步。
作為專業(yè)名詞，“體外診斷試劑”可能有很多人都不能準(zhǔn)確說出它的定義，但是，如果說到獻(xiàn)血時(shí)需要做的各項(xiàng)檢查，包括艾滋病、乙肝檢測等，或許大家就不會陌生了。北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司（以下簡稱萬泰藥業(yè)）就是這樣一家從事體外診斷試劑和基因工程疫苗研發(fā)、生產(chǎn)和銷售的創(chuàng)新型企業(yè)。
“體外免疫診斷試劑是用于疾病診斷檢查的一類醫(yī)學(xué)試劑，這類試劑主要通過血液等作為檢查對象，檢測其中的病毒或抗體，以作為診斷疾病的一種手段”。據(jù)萬泰藥業(yè)總經(jīng)理邱子欣介紹，通過21年的不懈努力，萬泰藥業(yè)從設(shè)立之初的小規(guī)模實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)發(fā)展到年銷售額超過4億元的生物制藥高新技術(shù)企業(yè)，并成為國內(nèi)最大的輸血安全診斷產(chǎn)品提供商和亞太地區(qū)最大的艾滋病診斷試劑生產(chǎn)基地。
立足，源于把握市場需求
據(jù)統(tǒng)計(jì)，自2003年起，萬泰藥業(yè)的艾滋病診斷試劑已連續(xù)9年全國市場占有率第一，擁有超過30%的市場份額。
他們的艾滋病第三代診斷試劑在2001年獲國家科技進(jìn)步二等獎(jiǎng)，同時(shí)被列為年度國家重點(diǎn)新產(chǎn)品和北京市重大科技成果轉(zhuǎn)化項(xiàng)目；也是中國性病艾滋病防治協(xié)會唯一推薦使用產(chǎn)品，衛(wèi)生部艾滋病哨點(diǎn)監(jiān)測指定使用試劑。
如今在艾滋病診斷試劑上風(fēng)光無限的萬泰藥業(yè)，其實(shí)也是從“苦日子”里熬出來的。
上世紀(jì)90年代中期，萬泰藥業(yè)正處于起步階段，盡管在1995年，他們就做出了國內(nèi)第一個(gè)艾滋病的檢測試劑盒，但日子依然過得緊巴巴。
與此同時(shí)，我國第三代艾滋病診斷試劑依賴進(jìn)口，國產(chǎn)試劑還停留在第二代的水平。艾滋病抗體試劑研發(fā)升級的關(guān)鍵原料艾滋病重組抗原，長期以來完全依賴進(jìn)口，導(dǎo)致我國艾滋病診斷試劑在靈敏度和特異度方面始終與國際主流試劑有相當(dāng)大的差距。
伴隨著國家對艾滋病診斷愈加重視，尤其是1995年開始，國家要求獻(xiàn)血時(shí)必須對捐獻(xiàn)者做艾滋病檢測，艾滋病診斷試劑的市場需求被打開。
國內(nèi)艾滋病診斷試劑在技術(shù)上升級換代的迫切需求和應(yīng)用市場的巨大機(jī)遇都為國內(nèi)企業(yè)留下了廣闊的發(fā)展空間。誰能搶占先機(jī)，誰就有可能在激烈的市場競爭中脫穎而出。
“我們很幸運(yùn)，企業(yè)的發(fā)展正好與國家相關(guān)產(chǎn)業(yè)發(fā)展同步”，邱子欣嘴里說的“幸運(yùn)”，換句話講，就是機(jī)會只眷顧有準(zhǔn)備的人。
1999年，萬泰藥業(yè)和廈門大學(xué)科研人員共同研制出國內(nèi)唯一一個(gè)能完全滿足艾滋病毒抗體診斷試劑盒生產(chǎn)要求的艾滋病毒重組抗原，填補(bǔ)了國內(nèi)的空白。
此后，雙方研制出了國內(nèi)第一個(gè)第三代艾滋病毒抗體診斷試劑盒，質(zhì)量與國際一流產(chǎn)品水平一致，與國產(chǎn)第二代產(chǎn)品相比，在靈敏度和特異性上實(shí)現(xiàn)了質(zhì)的飛躍，結(jié)束了外國公司對國內(nèi)市場的壟斷。同時(shí)，萬泰藥業(yè)將科研成果迅速轉(zhuǎn)讓給占我國艾滋病診斷試劑市場75%以上的10余個(gè)主要診斷試劑廠商和臨床單位，使國產(chǎn)艾滋病毒診斷試劑盒在2001年實(shí)現(xiàn)全面更新?lián)Q代。
但是在征服艾滋病的道路上沒有止境，萬泰藥業(yè)于2008年推出國內(nèi)首家上市的國產(chǎn)HIV第四代診斷試劑，進(jìn)一步提升了我國的艾滋病診斷能力，使國產(chǎn)試劑達(dá)到國際領(lǐng)先水平。在2011年度全國艾滋病抗體診斷試劑臨床質(zhì)量評估工作中，萬泰藥業(yè)的艾滋病抗原抗體診斷試劑敏感性、特異性、功效率均為100%；產(chǎn)品性能均位居同類參評試劑榜首。
在艾滋病感染監(jiān)測領(lǐng)域，由于我國現(xiàn)有的各種艾滋病診斷試劑均針對血液標(biāo)本，需要進(jìn)行侵襲性采樣，難以滿足人群監(jiān)測的需求，這也是目前我國艾滋病報(bào)告感染人數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于實(shí)際感染人數(shù)的主要原因之一，而對各種高危人群以及正常人群進(jìn)行艾滋病感染的密切監(jiān)測和進(jìn)行自愿咨詢檢測已成為我國艾滋病防治的最重要工作之一。
2009年春天，全球“甲流”爆發(fā)，我國科研人員立即研發(fā)“甲流”的快速檢測試劑，當(dāng)時(shí)主要是對患者的鼻腔分泌物和咽拭子進(jìn)行快速檢測。
用相同的原理，可不可以將這一技術(shù)應(yīng)用于艾滋病的快速檢驗(yàn)？正是這份靈感，才有了2011年萬泰藥業(yè)的艾滋病唾液檢測試劑。
人體感染艾滋病后，一般需要一段時(shí)間才會產(chǎn)生抗體，1～2個(gè)月左右血液中才可檢測到，這段時(shí)間就叫窗口期，但窗口期同樣具有傳染性。艾滋病的窗口期漏檢是一個(gè)全球性難題，萬泰藥業(yè)的唾液檢測試劑的橫空出世有效縮短了窗口期的漏檢時(shí)間。
這種艾滋病唾液檢測試劑，由于采用先進(jìn)的免疫滲濾法，操作簡便、無痛，30分鐘內(nèi)即可觀察檢測結(jié)果，不會對受試者造成針刺損傷，不容易發(fā)生職業(yè)暴露，大大提高了樣品的易獲得性和使用的方便性，同時(shí)極大降低被檢測者和醫(yī)護(hù)人員受感染的風(fēng)險(xiǎn)。
2012年，萬泰又推出了國內(nèi)首個(gè)RIBA法的的艾滋病確證試劑，縮短了確證試驗(yàn)的窗口期，性能達(dá)到國外試劑的先進(jìn)水平。
過硬的產(chǎn)品質(zhì)量和優(yōu)質(zhì)的售后服務(wù)樹立了萬泰公司良好的品牌形象，贏得了客戶的廣泛認(rèn)可。目前，以艾滋病診斷試劑為龍頭，萬泰藥業(yè)的丙肝、戊肝等多種體外免疫診斷試劑都相繼占據(jù)了國內(nèi)行業(yè)的領(lǐng)先地位，公司的銷售額從1997年的不足100萬元，發(fā)展到2011年銷售額3.4億元?！?012年，我們的銷售額有望達(dá)到4.5億元，最近10余年，公司年平均復(fù)合增長率超過25%?！闭f到此處，邱子欣臉上滿是歡喜。
創(chuàng)新，就要先人一步
除了艾滋病診斷試劑的系列產(chǎn)品外，萬泰藥業(yè)在戊肝病毒診斷試劑、戊型肝炎疫苗和宮頸癌疫苗等多個(gè)國家一類創(chuàng)新藥物上取得了重大突破和豐碩的成果。
在外行看來，不論是早期的艾滋病診斷試劑，還是如今的戊肝疫苗，萬泰藥業(yè)的產(chǎn)品研發(fā)路線似乎總是劍走偏鋒，在尋找冷門。
“這可能是一種誤解，其實(shí)在國內(nèi)的免疫診斷領(lǐng)域，我們很多產(chǎn)品也屬于大眾產(chǎn)品。比如丙肝病毒診斷試劑、乙肝病毒全套診斷試劑、甲型流感、EV71型手足口病等用于血站和醫(yī)院臨床的酶免及金標(biāo)法快速診斷試劑，以及臨床生化系列診斷試劑，都是比較領(lǐng)先的。”邱子欣認(rèn)為，之所以有所謂的“冷門”，并不是他們刻意去尋求的研究突破點(diǎn)，而是萬泰人在免疫診斷領(lǐng)域多年的深入研究后，發(fā)現(xiàn)了一些與其已有研究相關(guān)但尚未開展起來的領(lǐng)域。而他們憑借深厚的研發(fā)功底，較早地在這些陌生領(lǐng)域中取得驕人成績，讓別人有了這樣的錯(cuò)覺。
“萬泰藥業(yè)一貫的發(fā)展，告訴我們，只有先在某一領(lǐng)域做‘深’，才能有日后做‘寬’產(chǎn)品線的基礎(chǔ)，才能爆冷。所以，我們并不是只做冷門，但做冷門的東西，有可能做到世界第一的?！北M管不認(rèn)同“萬泰藥業(yè)=冷門專業(yè)戶”的看法，但是在邱子欣的眼中，創(chuàng)新確實(shí)需要先人一步，在別人還沒有注意時(shí)，就要做起來。而萬泰藥業(yè)研發(fā)的全球首個(gè)戊肝疫苗恰恰印證了這個(gè)觀點(diǎn)。
2012年1月11日，由廈門大學(xué)和萬泰藥業(yè)聯(lián)合研制的“重組戊型肝炎疫苗（大腸埃希菌）”已獲得國家一類新藥證書和生產(chǎn)文號，成為世界上第一個(gè)用于預(yù)防戊型肝炎的疫苗。重組戊肝疫苗是迄今唯一使用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)研制的病毒疫苗，它的成功研制扭轉(zhuǎn)了國際醫(yī)藥界中“原核系統(tǒng)不能用于病毒疫苗研制”的傳統(tǒng)認(rèn)識。
戊肝是由戊肝病毒感染所致的急性病毒性肝炎。
一般而言，由病毒引起的肝炎目前可分為甲型、乙型、丙型、丁型和戊型5種。其中，戊肝發(fā)現(xiàn)最晚，在1989年之前，它一直被稱作非甲非乙型肝炎。
戊肝病毒是人類了解最少，也是最復(fù)雜的致病病毒之一。在目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的至少4種基因型戊肝病毒中，1型和2型主要感染人類，3型和4型則是人畜共患病毒。
“到目前為止，公眾對戊肝了解不多，事實(shí)上，戊肝流行率低于甲肝，但危害性更大，以豬作為主要宿主的戊肝病毒，與人們?nèi)粘Ｉ盥?lián)系緊密。其死亡率約為1%～3%，孕婦病死率可高達(dá)20%，目前尚無有效治療手段，而疫苗是預(yù)防戊肝的最有效手段?！睋?jù)邱子欣介紹，早在14年前，萬泰藥業(yè)就在對其他肝炎的研究中，對戊型肝炎有了初步了解，并意識到了它的危害性。
從1998年起，每年萬泰藥業(yè)把診斷產(chǎn)品的部分利潤投入戊肝疫苗的研發(fā)，經(jīng)過14年艱辛研發(fā)，累計(jì)投入資金5億元，憑著鍥而不舍的精神取得了疫苗的研發(fā)成功。
“我們的戊肝疫苗采用的是基因工程技術(shù)?！鼻褡有栏嬖V記者，與傳統(tǒng)滅活疫苗和減毒活疫苗比較，基因工程疫苗的研發(fā)不依賴于病原體的培養(yǎng)，因此對于大量尚未建立成熟體外培養(yǎng)技術(shù)的病原體也能進(jìn)行疫苗的研制。在生產(chǎn)過程中，基因工程疫苗完全不涉及病原體，消除了由于病原體滅活不徹底或減毒不完全導(dǎo)致的安全性問題。不僅如此，基因工程疫苗的研發(fā)還可通過精心設(shè)計(jì)的純化過程實(shí)現(xiàn)對生產(chǎn)過程中伴隨的各類雜質(zhì)的高效清除和殘余成分的高度可控，降低了由于雜質(zhì)導(dǎo)致的各類接種副反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，提高了疫苗的安全性和耐受性，同時(shí)還能提高不同疫苗生產(chǎn)批次間的均一性。
萬泰藥業(yè)的戊肝疫苗是國內(nèi)少有的具有原始創(chuàng)新型的新型疫苗，它的成功讓很多疫苗企業(yè)看到了自主創(chuàng)新模式的希望，無疑將會給中國疫苗市場帶來巨大震動(dòng)。
業(yè)內(nèi)人士表示，戊肝疫苗的成功上市能為中國企業(yè)擺脫現(xiàn)有仿制模式的助推器，增強(qiáng)中國市場的信心，加大自主創(chuàng)新投入，投身于更多創(chuàng)新型疫苗的研發(fā)中。這對加快我國疫苗行業(yè)轉(zhuǎn)型，促進(jìn)疫苗產(chǎn)業(yè)總體水平的提高十分有利。
近年來我國戊肝發(fā)病率逐年上升，已在成人急性肝炎中位居首位。衛(wèi)生部網(wǎng)站的數(shù)據(jù)顯示，2011年戊肝發(fā)病人數(shù)已和甲肝非常接近，但死亡人數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過甲肝。這種戊肝疫苗的成功上市必將成為人們的健康福音。
實(shí)力，來自科企長期互信
作為國家生物高技術(shù)產(chǎn)業(yè)化示范工程基地，近年來萬泰藥業(yè)的高速成長不是偶然的。
可以說，萬泰藥業(yè)對科研攻關(guān)的高度重視和對技術(shù)研發(fā)的長期投入為其持續(xù)發(fā)展不竭的能量與動(dòng)力，形成了基于基礎(chǔ)研究與產(chǎn)業(yè)化實(shí)踐的自主創(chuàng)新模式。其中，萬泰藥業(yè)和廈門大學(xué)10多年的持續(xù)合作，為萬泰藥業(yè)平添了強(qiáng)大的技術(shù)后盾。
如前述的艾滋病抗原及診斷試劑、戊肝疫苗和重組人瘤病毒疫苗（預(yù)防宮頸癌和尖銳濕疣）等重大醫(yī)藥領(lǐng)域產(chǎn)品及項(xiàng)目，都是在雙方同心協(xié)力下結(jié)出的碩果。
1993年，來北京辦事的邱子欣結(jié)識了在京進(jìn)修的廈門大學(xué)教授夏寧邵。當(dāng)時(shí)，對艾滋病診斷研究抱有同樣興趣的兩人，可能不曾想到，以后兩人的合作會一直延續(xù)至今，并從個(gè)人的志同道合轉(zhuǎn)變?yōu)閮蓚€(gè)單位的密切合作。
1997年，當(dāng)邱子欣來到萬泰藥業(yè)后，將已經(jīng)找到艾滋病抗原的夏寧邵實(shí)驗(yàn)室，推薦給公司，雙方志趣相投，一拍即合。
“都是窮出身，底子都很薄，我沒有多少錢給你，你的東西一開始也不見得多好。怎么辦呢？大家不斷磨合，越磨越好。就我們的經(jīng)驗(yàn)而言，產(chǎn)學(xué)研合作中，最好不要給對方提太多的要求，關(guān)鍵是足夠的信任，才能使合作持續(xù)下去?！鼻褡有腊腴_玩笑地道出了合作初期雙方的境遇。
萬泰藥業(yè)2001年加盟養(yǎng)生堂有限公司，成為養(yǎng)生堂涉足制藥領(lǐng)域的重要支柱。養(yǎng)生堂公司也進(jìn)一步加大了對夏寧邵實(shí)驗(yàn)室的投入，萬泰藥業(yè)與廈門大學(xué)之間就形成了一個(gè)產(chǎn)研轉(zhuǎn)化鏈條。
“自1997年到2007年，公司的銷售收入增長了71倍。廈大與萬泰合作的實(shí)驗(yàn)室也成長為國家傳染病診斷試劑與疫苗工程技術(shù)研究中心。目前，中心年科研經(jīng)費(fèi)達(dá)到3000萬元，科研人員隊(duì)伍也壯大到180多人。萬泰與廈大堪稱產(chǎn)學(xué)研成功合作的典范?！鼻褡有婪Q，現(xiàn)在的研究機(jī)構(gòu)很多，研究成果也很多，但怎樣把成果轉(zhuǎn)化為市場所接受的產(chǎn)品，萬泰有自己的獨(dú)到之處。
邱子欣說：“雙方已經(jīng)有了良性的互動(dòng)?，F(xiàn)在的合作并不是說誰給誰投資，而是互相離不開了。他的東西沒有我來做產(chǎn)業(yè)化，他不放心。沒有他的技術(shù)，我也沒有好產(chǎn)品。所以變成一種互相需求。我們所有合作，都不存在技術(shù)買斷的形式。我們都很反對買斷，因?yàn)楫a(chǎn)品的改進(jìn)是無止境的，在合作過程中誰也離不開誰。項(xiàng)目技術(shù)過來之后，在市場銷售過程中還需要改進(jìn)，這時(shí)候雙方還是離不開?！?/p>
好的產(chǎn)品贏得市場，但利益如何分配呢？這樣的問題，往往在實(shí)際操作中困擾著科企合作的穩(wěn)定關(guān)系。同樣的問題，在邱子欣看來，產(chǎn)學(xué)研合作很大的一個(gè)問題就是雙方?jīng)]有信任?！拔乙坏┙o你東西了，你就把我甩掉了，甩掉了我的好處就不夠多了，企業(yè)外的科研機(jī)構(gòu)很擔(dān)心這個(gè)。而企業(yè)擔(dān)心的是，我花一大筆錢去買，這個(gè)東西是不是足夠有價(jià)值？我們跟廈大合作為什么能夠成功呢？大家把這些拋開，一起來耐心地做產(chǎn)品?！?/p>
正如邱子欣所說，除了充分相信對方，在醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)中搞產(chǎn)學(xué)研結(jié)合，需要足夠的堅(jiān)韌。眾所周知，藥品從研發(fā)到生產(chǎn)的周期比較長，不像IT、房地產(chǎn)那么快，而且審批非常慢。夸張的說，合作雙方對項(xiàng)目的進(jìn)展可能會看不到頭，難免會互相埋怨，情緒會慢慢出來，所以倒過來講還是信任?！叭绻叮ㄙY）醫(yī)藥或生物技術(shù)項(xiàng)目，就要有足夠的耐心，否則你就去投房地產(chǎn)、投IT?！?/p>
據(jù)了解，多年的合作，萬泰藥業(yè)和廈門大學(xué)在成果轉(zhuǎn)化方面已經(jīng)有了相當(dāng)豐富的經(jīng)驗(yàn)，萬泰藥業(yè)專門配備了100多位科研人員與該實(shí)驗(yàn)室對接，專門研究成果的轉(zhuǎn)化問題?！凹幢氵@樣，人手仍然緊張。”邱子欣表示。
關(guān)鍵詞：統(tǒng)計(jì)方法；定性分析；定量分析
Study on Statistical Methods of in Vitro Diagnostic Reagents
LI Xiao-jiang
（Review and Certification Center，Guangdong food and Drug Administration，Guangzhou 510080，Guangdong，China）
Abstract：This paper just focuses on the statistical methods used in the clinical test of in vitro diagnostic reagents. It discusses of qualitative methods and quantitative methods according to the use of conditions， limits and acceptance criteria. The qualitative methods include Four grid， Kappa and Chi-square test. The quantitative methods include the linear correlation， regression analysis，bias estimate， Bland -Altman method.
Key words：Statistical methods；Qualitative methods；Qualitative methods
臨床試驗(yàn)是二三類體外診斷試劑除校準(zhǔn)質(zhì)控品外申請注冊上市必不可少的環(huán)節(jié)，通常評估考核試劑和對比試劑或金標(biāo)準(zhǔn)方法的可比性。臨床試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)方法種類繁多，每種方法有一定的使用條件和局限性，在設(shè)計(jì)臨床試驗(yàn)方案的時(shí)候，如果沒有充分考慮到試驗(yàn)的各種因素，容易造成統(tǒng)計(jì)方法的選擇不合適而得出錯(cuò)誤的試驗(yàn)結(jié)果或者是分析不全面不充分，直接影響考核試劑的評估。因此，統(tǒng)計(jì)方法的選擇至關(guān)重要。筆者作為體外診斷試劑產(chǎn)品注冊技術(shù)審評員，根據(jù)多年的技術(shù)審評經(jīng)驗(yàn)，將從定性和定量兩個(gè)方面對體外診斷試劑臨床試驗(yàn)中常用的統(tǒng)計(jì)方法的使用條件、限制和接受準(zhǔn)則進(jìn)行探討。
1 定性分析
定性分析包括與金標(biāo)準(zhǔn)比對和與對比試劑比對。通常用四格表進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
與金標(biāo)準(zhǔn)比較通常用敏感度（真陽性率）和特異度（真陰性率）來表示兩種方法的符合性：敏感度=a/（a+c）；特異度=d/（b+d）；總符合率=（a+d）/（a+b+c+d）。而與對比試劑比較通常用陰陽性符合率來表示：陰性符合率=a/（a+c）；陽性符合率=d/（b+d）； 總符合率=（a+d）/（a+b+c+d）。雖然兩種比對方法的四格表形式是一樣的，但表示的意義不同。陰性符合率不等于敏感度，陽性符合率不等于特異度，兩者不能混用，因?yàn)閷Ρ仍噭?zhǔn)確度不一定100%。
定性分析除了進(jìn)行四格表統(tǒng)計(jì)符合性之外還需進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)（可使用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件），通常使用Kappa檢驗(yàn)或配對χ2檢驗(yàn)。
Kappa是作為評價(jià)判斷的一致性程度的重要指標(biāo)，取值在0～1之間。Kappa≥0.75，表示兩者結(jié)果的一致性較好，0.4≤Kappa
2 定量分析
2.1相關(guān)性分析 在進(jìn)行相關(guān)性分析之前需進(jìn)行離群值檢驗(yàn)，離群值的個(gè)數(shù)一般不得超過2.5%，即在100個(gè)樣本的臨床試驗(yàn)中，不得出現(xiàn)3個(gè)離群值。如出現(xiàn)3個(gè)或3個(gè)以上離群值，應(yīng)尋找原因，如僅僅是樣本問題，則更換這些樣本；如找不到原因，又影響"等效"的分析時(shí)，停止試驗(yàn)并通知試驗(yàn)申請者。
相關(guān)性分析通常用散點(diǎn)圖來輔助分析。首先以考核試劑每次測定值（作Y軸）與相對應(yīng)的對比試劑每次測定值（作X軸）作散點(diǎn)圖；目測線性，找出線性范圍，刪去非線性段，如線性范圍寬還可以增加分段統(tǒng)計(jì)。如線性范圍太短，則停止評價(jià)。對線性段作相關(guān)分析，根據(jù)EP9-A2要求相關(guān)系數(shù)r>0.975[1]（或r2≥0.95），如r
2.2回歸分析 回歸分析比較常用的方法是直線回歸分析，Deming回歸和Passing-Bablok回歸。三種方程的基本形式都一致，為Y=bX+a，但回歸系數(shù)b的估計(jì)方法不同。傳統(tǒng)的直線回歸分析前提條件是正態(tài)分布；對照試劑應(yīng)是金標(biāo)準(zhǔn)或近似（較好的），無明顯的系統(tǒng)誤差和隨機(jī)誤差。若兩種試劑都存在誤差，則不能滿足最小二乘法估計(jì)的條件，可考慮Deming回歸。該法考慮了兩試劑的隨機(jī)誤差，且假定兩種試劑的標(biāo)準(zhǔn)差比值恒定。Deming法適用于兩個(gè)試劑的測量誤差有著獨(dú)立的、均數(shù)為0的正態(tài)分布，誤差的方差為成比例的（在數(shù)據(jù)范圍內(nèi)，方差并不必須恒定的）。如異常值較多，可選用Passing-Bablok法。即任取兩點(diǎn)確定直線，屢次反復(fù)，得到多條直線并計(jì)算斜率，而后對多個(gè)斜率值取中位數(shù)并調(diào)整。該法假定兩器械隨機(jī)誤差遵循同一種分布，標(biāo)準(zhǔn)差比值恒定。線性回歸斜率b一般推薦在0.9～1.1之間可接受。
2.3偏倚估計(jì) 按下列方程式計(jì)算平均偏倚B及試驗(yàn)系統(tǒng)與對照系統(tǒng)測定值差值的標(biāo)準(zhǔn)差SD。
將醫(yī)學(xué)決定水平預(yù)期偏倚的可信區(qū)間與允許誤差的限值相比較（允許誤差推薦為小于或等于1/2CLIA88或者室間質(zhì)評可接受范圍）。預(yù)期偏倚可信區(qū)間小于規(guī)定的允許誤差的限值，試驗(yàn)系統(tǒng)可被接受；預(yù)期偏倚可信區(qū)間大于規(guī)定的允許誤差的限值， 試驗(yàn)系統(tǒng)不被接受。
2.4 Bland-Altman法 Bland-Altman法是1986年Bland和Altman提出的，并發(fā)表在Lancet雜志上[2]。該方法的基本思想是利用兩組數(shù)據(jù)的均值和差值，分別以均值為橫軸，差值為縱軸做散點(diǎn)圖，計(jì)算差值的均值（d）以及差值的95%分布范圍（即為一致性界限，LoA，d±1.96Sd，其中Sd為差值的標(biāo)準(zhǔn)差），認(rèn)為95%的差值應(yīng)位于該一致性界限范圍內(nèi)。分析散點(diǎn)的分布與一致性界限的位置關(guān)系，并且與臨床上可接受的界限值相比，如果一致性界限在臨床上可接受，則認(rèn)為兩種方法之間的一致性較好，可以互換。檢測項(xiàng)目不同，方法學(xué)不同，臨床上可接受的界限值不同，界限值還與臨床預(yù)期用途有關(guān)，可參考室間質(zhì)評的相關(guān)要求。當(dāng)樣本量較小時(shí)，由于抽樣誤差的影響，有時(shí)不一定滿足95%的差值落在LoA范圍內(nèi)，這時(shí)，可以考慮LoA的可信區(qū)間（LoA CI）。計(jì)算LoA CI所對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)誤一般為1SE（d）=Sd/，一致性界限的上、下限的標(biāo)準(zhǔn)誤近似等于1.71SE（d）[3]。在臨床試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析中，除了用兩種試劑的結(jié)果的差值反映一致性外，還可以用兩種測量結(jié)果之間的比值（或差值與均值的百分比）進(jìn)行Bland-Altman分析。由于檢測結(jié)果的差值或比值都與兩種試劑的測量值都有關(guān)，因此橫坐標(biāo)應(yīng)為兩者的均值，而不是對比試劑的測量值。
在應(yīng)用Bland-Altman分析時(shí)，需要注意一定的應(yīng)用條件[4]，均值和差值應(yīng)相互獨(dú)立，即兩種試劑的測量結(jié)果應(yīng)具有方差齊性，差值應(yīng)服從正態(tài)分布，在測量范圍內(nèi)的差值不隨著測量結(jié)果變化的擴(kuò)大而變化。假如不滿足條件，如Bland-Altman圖呈喇叭狀，建議通過對數(shù)轉(zhuǎn)換達(dá)到要求，也可以通過對用比值來進(jìn)行分析。
一致性分析時(shí)，一般不建議用配對t檢驗(yàn)來評估兩個(gè)試劑的檢測結(jié)果的一致性。配對t檢驗(yàn)的本質(zhì)是對"差異"的檢驗(yàn)，而非對"一致"的檢驗(yàn)[4]。因?yàn)榕鋵檢驗(yàn)主要是比較均數(shù)的差異，只能反映總體均數(shù)可能相同，卻不能反映數(shù)據(jù)的一致性，即對系統(tǒng)誤差敏感，卻無法檢出隨機(jī)誤差。
3 結(jié)語
體外診斷試劑臨床試驗(yàn)應(yīng)根據(jù)預(yù)期用途來選擇是用定量還是定量的分析方法。但在實(shí)際的臨床試驗(yàn)過程中，由于很多因素的影響，會出現(xiàn)一些不符的結(jié)果，需要查找原因，在定量分析的時(shí)候可以輔助定性分析，在定性分析的時(shí)候也可以輔助定量分析。不管是定性還是定量，統(tǒng)計(jì)分析方法有多種，一定要清楚每種方法使用的前提條件，否則不滿足使用條件得出的結(jié)果可能沒有實(shí)際意義。由于每種分析方法都有一定的局限性，可以多種分析方法聯(lián)合分析，往往更全面更可靠。如在定量分析的時(shí)候，可以線性相關(guān)分析、回歸分析與Bland-Altman法結(jié)合起來分析。
參考文獻(xiàn)：
[1]NCCLS.Method comparison and bias estimation using patient samples[S].EP9-A2.Wayne，Pennsylvania：2002.
[2]薩建，定量測量結(jié)果的一致性評價(jià)及Bland_Altman法的應(yīng)用[J].中國衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)，2011，28（4）：409-411.
關(guān)鍵詞：ELISA法檢測抗體；第四代HIV診斷試劑；靈敏性；特異性
中圖分類號：R818.052 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：C 文章編號：1005-0515（2013）10-056-01
引言
目前國內(nèi)有很多HIV 抗體診斷試劑種類，大部分臨床科室都采用第三代診斷試劑，即目前國內(nèi)流行的ELISA法檢測抗體。迄今已開發(fā)研制的第四代HIV診斷試劑，它采用抗原抗體聯(lián)合檢測。本血站使用第三代診斷試劑盒和第四代診斷試劑盒對獻(xiàn)血者的血液進(jìn)行檢測， 并對兩種試劑盒的診斷效果進(jìn)行對比。
1材料的選取
材料全部取自于本血站2013年1月1日到2013年4月30日的獻(xiàn)血者，共5800份，由衛(wèi)生部臨檢中心給出5份HIV室間質(zhì)評獻(xiàn)血者的血清以及由康徹思坦有限公司提供的室內(nèi)質(zhì)控血清。
2 試劑
第三代與第四代HIV診斷試劑盒分別購于英科新創(chuàng)試劑股份有限公司和北京萬泰生物藥業(yè)有限公司，均被中國藥品生物制品檢定所批批檢定合格， 在有效期內(nèi)使用，符合國家質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
3方法
嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)和試劑盒說明書，對所有血清標(biāo)本同時(shí)使用第三代與第四代HIV診斷試劑進(jìn)行檢測， 并將初次檢測為反應(yīng)性的標(biāo)本進(jìn)行雙孔復(fù)查， 任一種試劑檢測結(jié)果為反應(yīng)性及兩種試劑為反應(yīng)性的標(biāo)本送湖南省疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病檢測中心確認(rèn)。室間質(zhì)評標(biāo)本與質(zhì)控血清和樣本一同進(jìn)行檢測。
4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
采用spss6.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，兩組結(jié)果的比較采用χ2 檢驗(yàn)。
5 結(jié)果
對5800份標(biāo)本采用兩種試劑進(jìn)行檢測， 第三代HIV診斷試劑檢測出7例是陽性，但用第四代試劑檢測出18 例是陽性的， 其中有3例標(biāo)本兩種試劑均為陽性最后確認(rèn)陽性， 有1例標(biāo)本第四代試劑檢測為陽性， 但第三代試劑檢測為陰性， 最后確認(rèn)為疑是陽性，電泳條帶為P24抗原。
從表1 可以看出，在特異性方面，第四代試劑稍遜于第三代試劑， 這與文獻(xiàn)報(bào)道一致。另外還有1例經(jīng)第四代HIV診斷試劑檢測為有反應(yīng)性， 但第三代試劑檢測為陰性， 經(jīng)P24抗原檢測為陽性， 經(jīng)NAT檢測為陽性， 說明此標(biāo)本為窗口期樣本。
從表2 看， 兩種診斷試劑平行檢測室間質(zhì)評血清， 結(jié)果全部達(dá)標(biāo)， 但對于比較弱的陽性標(biāo)本， 第四代試劑反應(yīng)性更靈敏些， 即第四代試劑敏感性較強(qiáng)。
討論
自從1981 年，人們首次發(fā)現(xiàn)艾滋病，研究人員從艾滋病患者體內(nèi)成功分離出其病原體，并發(fā)展了血清學(xué)抗體檢測、唾液檢測和尿液測檢等常規(guī)使用的標(biāo)準(zhǔn)診斷項(xiàng)目。血清學(xué)抗體檢測從20世紀(jì)上葉就得到長足的發(fā)展，到現(xiàn)在已經(jīng)有四代試劑。第一代試劑然敏感性、特異性均較低，它采用病毒裂解抗原包被的ELISA 間接法，。第二代試劑是運(yùn)用DNA 重組和多肽合成技術(shù)，避免細(xì)胞培養(yǎng)蛋白導(dǎo)致的非特異性反應(yīng)，是一種重組抗原的HIV 抗體初篩試劑。1986 年， 在西非的艾滋病病人標(biāo)本中又分離出另外一種被稱為HIV-2的HIV。HIV-2陽性標(biāo)本用HIV-1篩查試劑抗體檢測常常出現(xiàn)漏檢的。在1992 年2 月14 日，第一個(gè)HIV-1/ HIV-2抗體ELISA 試劑被FDA批準(zhǔn)了。1994年發(fā)展了起來的第三代H IV 抗體篩查試劑提高試劑的檢測敏感性，它是用雙抗原夾心法， 以特異性的H IV 抗原作為酶標(biāo)記物，而不是抗人IgG，這種試劑不需要將標(biāo)本過度稀釋來保證反應(yīng)的特異性就可以檢測包括IgA、I gM、IgG等不同的HIV 抗體亞類。國際上出現(xiàn)的第4 代HIV檢測試劑， 它可同時(shí)檢測HIV-1/ HIV-2兩種抗體和p24 抗原， 又稱為HIV 抗原/抗體診斷試劑，較第三代試劑每個(gè)測試的費(fèi)用相似， 但敏感性高， 窗口期縮短。這種試劑能夠檢測早期的血清陽轉(zhuǎn)， 縮短了檢測的窗口期， 進(jìn)一步提高了輸血的安全性。
我國國產(chǎn)三代的ELISA試劑和四代HIV檢測試劑起步較晚， 但是近年來隨著我國科技的迅速發(fā)展。到1994 年， 衛(wèi)生部檢定并批準(zhǔn)了國產(chǎn)二代HIV-1/ HIV-2 抗體酶標(biāo)診斷試劑盒。目前國內(nèi)主要流行的第三代試劑，但是有很多廠家已經(jīng)推出自己研制的第四代試劑。從1998 年起，根據(jù)衛(wèi)生部要求， 中國疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心國家艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室對國內(nèi)的HIV診斷試劑進(jìn)行臨床質(zhì)量評估， 為國內(nèi)的HIV診斷試劑用戶提供質(zhì)量信息，診斷試劑進(jìn)行了連續(xù)8年的試劑考評， 得出國產(chǎn)HIV抗體診斷試劑質(zhì)量的總體水平在逐年提高的結(jié)論； 特別是從2000年開始， 國產(chǎn)HIV 診斷試劑從第二代ELISA 間接法篩查試劑提升到第三代雙抗原夾心法篩查試劑， 敏感性和特異性已接近國外同類產(chǎn)品水平。目前第四代試劑可同時(shí)檢測血清中HIV的p24 抗原和抗體。
結(jié)論
當(dāng)今血液安全的最大隱患是HIV窗口期感染。研究表明， 使用第四代HIV試劑可使窗口期可縮短4到5天。同時(shí)第四代試劑在檢測低滴度的血清標(biāo)本時(shí)其反應(yīng)性更強(qiáng)，意味著有更高的靈敏度，可以有效的避免漏檢， 從而及時(shí)篩查出可疑的HIV感染者。但是第四代試劑特異性低于第三代試劑， 使得檢測結(jié)果出現(xiàn)很多的假陽性，從而增加了工作的復(fù)雜性，可對于血液安全卻是非常重要的。
參考文獻(xiàn)
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[關(guān)鍵詞] 熒光原位雜交；產(chǎn)前診斷；染色體非整倍體
[中圖分類號] R714.53 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）10-242-04
Comparative study on application of two fluorescence in situ hybridization （FISH） kits for inspecting amniotic fluid chromosomes
LIU Keling1 JIA Bei2
1.Department of Obstetrics Baoan District People's Hospital，Shenzhen 518101，China；2.Department of Obstetrics，Nanfang Hospital，Southern Medical University，Guangzhou 510512，China
[Abstract] Objective Two fluorescence in situ hybridization （FISH） kits were utilized to inspectamniotic fluid chromosomes，to compare the both kits in clinical application. Methods Two fluorescence in situ hybridization （FISH） kits from Beijing GPmedical and Abbott were utilized to inspect 30 samples of amniotic fluid chromosomes.Their differences in respect of signal intensityand hybridizing were compared. Results All samples of the 30 cases were successfully detected by the both FISH kits.The hybridizing ratethere was no significant difference （P>0.05）.Vysis kits 21/13 chromosome fluorescent hybridization signal was stronger than the GP kits’.The GP kits 18 chromosomes signal was clear and not easy to fuse. Conclusion the FISH kits from the Beijing GPmedical and Abbott Vysis can make the same prenatal diagnosis for the chromosome abnormality.
[Key words] Fluorescence in situ hybridization；Prenatal dignosis；Chromosomal aneuploid
曬庠位原位雜交技術(shù)（FISH）基于分子細(xì)胞遺傳學(xué)發(fā)展的學(xué)科，始于1998年，至今在臨床研究中廣泛應(yīng)用，在產(chǎn)前診斷領(lǐng)域更是不斷完善和推廣[1-3]。由于商業(yè)試劑盒應(yīng)用方便、高效、穩(wěn)定且專業(yè)化，臨床上更青睞采用FISH商業(yè)試劑盒進(jìn)行產(chǎn)前診斷[4]，如美國雅培Vysis公司（美國），其試劑以極高的靈敏度及可重復(fù)性在臨床應(yīng)用中極受歡迎。目前我國金菩嘉公司（中國）自行研發(fā)成功FISH商業(yè)試劑盒可滿足產(chǎn)前診斷系列使用。本課題通過雅培Vysis公司和金菩嘉公司分別研制的FISH試劑盒進(jìn)行臨床應(yīng)用比較，以便國產(chǎn)FISH商業(yè)試劑盒的優(yōu)化，增強(qiáng)市場競爭力。
1 資料與方法
1.1 一般資料
隨機(jī)選取2009年3～10月在南方醫(yī)院行產(chǎn)前診斷的高危孕婦30例，年齡18～44歲，平均（30.4±5.3）歲。孕周17～37周，平均（23.1±4.4）周。產(chǎn)前診斷指征包括：（1）孕婦年齡≥35歲10例；（2）母血清唐氏篩查高風(fēng)險(xiǎn)15例；（3）超聲篩查異常，指羊水過多、心室強(qiáng)光點(diǎn)、腹部雙泡征、雙側(cè)脈絡(luò)叢多回聲區(qū)等共3例；（4）多項(xiàng)指征，符合前面任意兩項(xiàng)或兩項(xiàng)以上者1例；（5）IVF-ET術(shù)后且極度焦慮孕婦1例。所有孕婦均簽署產(chǎn)前診斷知情同意書。選擇這30例的液氮凍存的未培養(yǎng)的羊水標(biāo)本，結(jié)合其核型分析進(jìn)行兩種FISH診斷試劑（金菩嘉及雅培Vysis）的檢測。
1.2 主要試劑及儀器
1.2.1 試劑盒 采用美國 VysisFISH檢測試劑盒及北京金普嘉公司FISH試劑盒。
1.2.2 儀器 采用OLYMPUS公司（BX-51）的熒光顯微鏡、OLYMPUS公司的顯微照相機(jī)、Thermobrite原位雜交儀及VideoTest公司的FISH2.0分析軟件。
[關(guān)鍵詞] 抗體檢測 膠體金 ELISA
隨著養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)發(fā)展及動(dòng)物防疫工作的進(jìn)一步深化，對動(dòng)物進(jìn)行免疫接種已成為預(yù)防和控制動(dòng)物疫病的重要手段?？谔阋?、豬瘟和藍(lán)耳病是國家要求強(qiáng)制免疫的重大動(dòng)物疫病，其抗體監(jiān)測關(guān)系免疫效果的考核、合理免疫程序的建立，也是評估疫苗質(zhì)量、對重大動(dòng)物疫情預(yù)警能力的的可靠依據(jù)。
縣級以上獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室目前開展抗體監(jiān)測主要使用ELISA試劑盒，其昂貴、費(fèi)時(shí)和要求專業(yè)儀器和專業(yè)人員的特點(diǎn)，使之不適合基層推廣使用。近年來，隨著一系列膠體金檢測產(chǎn)品在動(dòng)物疫病檢測領(lǐng)域的推廣運(yùn)用，以其操作簡單、價(jià)格低廉、現(xiàn)場即時(shí)檢測等特點(diǎn)，迅速獲得了基層獸醫(yī)站和養(yǎng)殖戶的認(rèn)可。為了解這項(xiàng)新技術(shù)的檢測準(zhǔn)確性和可靠性，我們用膠體金和ELISA兩種試劑盒檢測豬血清中的抗體水平，其結(jié)果對比如下。
一、材料與方法
1.被檢血清
從全市5個(gè)規(guī)模養(yǎng)豬場采集并分離豬血清共27份，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
2.診斷試劑
口蹄疫合成肽ELISA試劑盒為上海優(yōu)耐特生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)，批號：201012004；豬瘟抗體ELISA試劑盒為北京愛德士元亨生物科技有限公司生產(chǎn)，批號：43220-X681；豬藍(lán)耳病抗體ELISA試劑為北京愛德士元亨生物科技有限公司生產(chǎn)，批號： 40959-X061。
膠體金快速診斷試劑盒為蘇州艾瑞德生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)，豬口蹄疫抗體快速檢測試劑盒批號：CFC005A；豬瘟抗體快速檢測試劑盒批號：CFC002A；豬繁殖與呼吸綜合癥抗體快速檢測試劑盒批號：CFC001A。
3.檢測方法
3.1酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作，以測得樣品OD值大于臨界值為陽性，否則為陰性。
3.2膠體金快速診斷法嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作，以檢測線和對照線同時(shí)出現(xiàn)紫紅色線為陽性，只有對照線出現(xiàn)紫紅色線為陰性。
二、檢測結(jié)果
表1 兩種方法檢測血清抗體結(jié)果
兩種方法的檢測結(jié)果經(jīng)x2檢驗(yàn)，有顯著差異。
表2 樣品結(jié)果分布圖
三、結(jié)果分析
1.由表1可知，分別用2中診斷試劑盒測定27份血樣抗體，ELISA測得的口蹄疫和藍(lán)耳病抗體的合格率明顯高于膠體金 ，而測得豬瘟抗體的合格率略低于膠體金。從兩種方法的檢測結(jié)果的符合率來看，豬瘟最高，為74%，口蹄疫次之，為41%，藍(lán)耳病檢測符合率只有26%。兩種檢測方法的結(jié)果出現(xiàn)了明顯分離，因此，兩種檢測方法不具有平行相關(guān)性。
2.由表2可知，對樣本個(gè)體而言，既有ELISA檢測合格而膠體金不合格的樣本，又有膠體金檢測合格而ELISA檢測不合格的樣本。因此，不能以此判斷兩種檢測方法的敏感性高低。
四、討論
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2009.20.046
我國結(jié)核病疫情:我國屬于全球結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家之一,結(jié)核病的患病人數(shù)在世界各國中居于第2位。疫情嚴(yán)峻的原因與臨床診斷技術(shù)和新藥研制滯后、防治不力、結(jié)核桿菌與人類免疫缺陷病毒(HIV)雙重感染以及耐藥結(jié)核病人數(shù)的急劇增加等有關(guān)。目前診斷肺結(jié)核的主要方法是痰涂片染色鏡檢,結(jié)合X線胸片檢查,繼以結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)確認(rèn)。但是,涂片檢查敏感性差,分離培養(yǎng)結(jié)核桿菌時(shí)間過長,X線檢查又往往缺乏特異性,用于基因診斷技術(shù)的PCR尚處于發(fā)展階段。因此,建立敏感、特異、快速、低成本的快速檢測方法十分重要。現(xiàn)對結(jié)核病的快速診斷技術(shù)概況加以綜述。
結(jié)明實(shí)驗(yàn):結(jié)明實(shí)驗(yàn)(MycoDot)是國內(nèi)外使用較早、較普遍的結(jié)核抗體快速檢測試驗(yàn),即將脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)作為抗原固定于在電泳梳上,再將此附有抗原的電泳梳置于稀釋的血清或全血中浸泡,標(biāo)本中如有LAM抗體,則與梳上LAM抗原相結(jié)合,浸入顯色液后,抗體金顆粒便會特異性地聚集在抗原抗體復(fù)合物上,在梳上附著抗原處形成紅色圓形斑點(diǎn),即為陽性。結(jié)核菌細(xì)胞壁成分中含有阿拉伯甘露糖,因此只有當(dāng)患者患活動(dòng)性結(jié)核病時(shí),才會有陽性反應(yīng)。健康人、既往感染者(結(jié)素試驗(yàn)陽性)以及卡介苗接種者都顯示為陰性。在入組3個(gè)國家1602例患者的臨床試驗(yàn)中,結(jié)明試驗(yàn)的總敏感性為70.2%,特異性為95.1%。在這一方法中,標(biāo)本采集方便,方法簡單、快速、可靠,可用肉眼判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果,無需特殊實(shí)驗(yàn)儀器,便于基層醫(yī)院推廣。
結(jié)核病診斷試劑盒:結(jié)核病診斷試劑盒(FD)采用結(jié)核分枝桿菌的特異性抗原――脂阿拉伯甘露糖(LAM)為固相抗原,并以金溶膠為標(biāo)記。其原理是將結(jié)核桿菌的特異性抗原LAM固定在特制載體上,當(dāng)被檢血清或全血中含有結(jié)核桿菌的特異性抗體(LAM-IgG)時(shí),便與載體上的抗原結(jié)合為抗原復(fù)合物,這種復(fù)合物可與標(biāo)記有“雙抗”的金溶膠試劑發(fā)生作用,形成紫紅色斑點(diǎn)。因此,試驗(yàn)結(jié)果呈紫紅色斑點(diǎn)者為陽性,無紫紅色斑點(diǎn)者為陰性。既往研究表明,FD檢測陽性率為80%,特異性為94%,檢測結(jié)果不受卡介苗接種的影響。FD檢測簡便、快速,且不需要專門技術(shù)和特殊設(shè)備,是用于結(jié)核病的診斷和鑒別診斷的一項(xiàng)輔助診斷方法,適用于在基層醫(yī)療單位推廣使用。
斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾法:斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾法(DIGFA)是將固相人型結(jié)核分支桿菌蛋白衍生物(PPD)純化抗原包被在斑點(diǎn)反應(yīng)板上,其與體液中的抗結(jié)核分支桿菌抗體(PPD-IgG)形成復(fù)合物,膠體金標(biāo)記抗人IgG或海藻硫酸多糖(SPA)與復(fù)合物結(jié)合,形成肉眼可見的紅色斑點(diǎn)。既往研究表明,斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾法檢測各類血清678份,敏感性為76.8%,特異性為91.5%。但受結(jié)核菌或其他分枝桿菌感染及卡介苗接種等影響,也可出現(xiàn)交叉反應(yīng)。這種方法具有簡便、快速,結(jié)果易于判讀,無需特殊儀器,能進(jìn)行單個(gè)標(biāo)本的測定,受檢患者可及時(shí)得到結(jié)果等特點(diǎn),適用于基層醫(yī)院診斷結(jié)核菌感染和進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。
結(jié)核桿菌抗體膠體金法診斷試劑盒:結(jié)核桿菌抗體膠體金法診斷(TB-DOT)試劑盒是用現(xiàn)代生物技術(shù)提純結(jié)核分枝桿菌特異性外膜抗原,應(yīng)用斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)(DIGFA)原理,并用定量標(biāo)準(zhǔn)色譜卡技術(shù)制作的TB-DOT試劑盒,用于活動(dòng)性肺內(nèi)外結(jié)核病IgG、IgM、IgA的檢測。研究顯示的靈敏性和特異性分別為85.5%和93.6%,與國內(nèi)學(xué)者報(bào)道靈敏性73.8%、特異性94.1%基本一致,因此,TB-DOT試劑盒是一種靈敏性和特異性較高的試劑盒。
免疫膠體金標(biāo)記技術(shù):免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)(ICS)具有快速、簡便、準(zhǔn)確的特點(diǎn),有助于提高診斷,適用于活動(dòng)性結(jié)核病的診斷。這種方法可用于涂片培養(yǎng)陰性但有臨床癥狀的患者,鑒別肺癌與其他肺部疾患,或動(dòng)態(tài)觀察結(jié)核病化療效果。但是,目前該方法檢測成本較高,尚難用于結(jié)核病初篩及在基層醫(yī)療單位普及應(yīng)用。
關(guān)鍵詞：干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫法；結(jié)核潛伏感染調(diào)查者；診斷分析
當(dāng)前，我國大約130萬人為結(jié)核病調(diào)查者，位居世界第2位。人體感染結(jié)核分枝桿菌后，病菌會潛伏在人體中。當(dāng)人體免疫力降低時(shí)，則會導(dǎo)致結(jié)核分枝桿菌大量增殖，引發(fā)疾病。臨床上對于這種疾病的檢測主要以的γ-干擾素檢測試劑盒（體外釋放酶聯(lián)免疫法）（簡稱WT試劑）檢測為主。為了探討干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫法（TB-IGRA）在結(jié)核潛伏感染中的診斷分析。
1資料與方法
1.1一般資料 對接收調(diào)查的140例健康者資料進(jìn)行分析，調(diào)查中，有15例男性，65例女性，健康者年齡在39～84歲，他們的平均年齡為（49.4±1.3）歲。兩組調(diào)查者年齡、入院時(shí)間等資料經(jīng)分析指標(biāo)間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
1.2方法 調(diào)查中，對調(diào)查者進(jìn)行體檢，必要時(shí)對調(diào)查者進(jìn)行輔助檢查，如調(diào)查者的結(jié)核功能、體溫等。首先，在對這些健康者檢查過程中，使用美國BD公司肝素鋰抗凝采血管抽取超過55 mL靜脈血，然后將抽取的樣本顛倒混勻3次以上，每種培養(yǎng)管分裝1 mL，分裝前需要顛倒混勻3次以上并立刻于37℃培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)（22±2）h。然后將樣本培養(yǎng)（22±2）h后取出，并進(jìn)行離心，收集上清液。最后使用雙抗體夾心法定量檢測上清液中IFN-γ的含量，并根據(jù)結(jié)果判定是否為結(jié)核分枝桿菌感染陽性。
QFT試劑新鮮全血標(biāo)本采集，利用抽取的3種不同的采血管，按照灰蓋（本底對照培養(yǎng)管）、紅蓋（結(jié)核特異性抗原測試培養(yǎng)管）、紫蓋（非特異刺激原陽性對照培養(yǎng)管）的順序分別采集1 mL靜脈血，并立即顛倒混勻3次以上，使抗凝劑充分溶解。新鮮全血經(jīng)刺激培養(yǎng)（22±2）h后，3離心10 min（000～5000 rpm），取上清放于新的EP管中。
PPD檢測：醫(yī)護(hù)人員在健康者前臂皮內(nèi)注射標(biāo)準(zhǔn)PPD 0.1 mL。待72 h后，觀察調(diào)查者的反應(yīng)結(jié)果，并詳細(xì)記錄硬結(jié)平均直徑（mm）。PPD
1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 實(shí)驗(yàn)中，對健康者檢查過程中搜集和記錄的數(shù)據(jù)利用SPSS13軟件進(jìn)行處理和分析，然后醫(yī)護(hù)人員再對這些數(shù)據(jù)采用t方法進(jìn)行檢驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用χ2表示。
2結(jié)果
實(shí)驗(yàn)中，WT試劑陽性率（25.7%）高于其他兩種方法；在密切接觸者中，QF試劑檢出率較WT試劑高（67.8%）。由此可以看出，TB-IGRA陽性率高于PPD皮試，見表1。
兩種試劑陽性符合率為81.3%[26/（26+6+0）×100%]，陰性符合率為88.9%[104/（104+13+0）×100%]，總符合率為86.7%[26+104+0）/（32+117+1）×100%]。WT試劑與QFT試劑配對分析結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P>0.05，見表2。
3討論
目前，國內(nèi)對于結(jié)核潛伏感染調(diào)查者的診斷主要是根據(jù)結(jié)核菌素皮試的結(jié)果判定的，普遍認(rèn)為PPD強(qiáng)陽性或在短期內(nèi)陰性轉(zhuǎn)為陽性者即為結(jié)核菌潛伏感染者。但是，P這種方法卻不能區(qū)分BCG接種產(chǎn)生的免疫應(yīng)答反應(yīng)與潛伏感染產(chǎn)生的應(yīng)答反應(yīng)。肖松生等人曾經(jīng)提出：利用ELISPOT法能夠有效地診斷出結(jié)核潛伏感染調(diào)查者，并且這種方法目前已經(jīng)被廣泛使用。
首先，在檢測健康人群中，WT和QFT試劑IGRA陽性率高于PPD皮試法。其陽性率分別為25.7%，21.4%和14.3%。而在密接者中，三種方法的陽性率分別為46.4%，67.8%和39.3%。由于調(diào)查范圍屬于體外免疫科的實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室中存放了大量的痰標(biāo)本，在平時(shí)的工作中不可避免的會接觸結(jié)核桿菌。即使這樣，實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明，IGRA和PPD兩種測試對結(jié)核潛伏感染都有用處。其次PPD結(jié)果與IGRA結(jié)果之間有相關(guān)性，當(dāng)PPD檢測結(jié)果為3+～4+，WT試劑陽性率60%（12/20）。PPD檢測結(jié)果為陰性時(shí)，WT陽性率為18.2%（2/11）。相關(guān)研究顯示，篩查結(jié)核潛伏感染可用先PPD，后IGRA的兩步策略，但I(xiàn)GRA須在PPD檢測之后的3 d內(nèi)進(jìn)行。
此次調(diào)查中，二者檢測時(shí)的原理一樣，但是兩種試劑結(jié)果還是有差別。實(shí)驗(yàn)中，總體人群中陽性率WT試劑高于QFT試劑，在密接者中QFT試劑高于WT試劑。但總的來說，WT試劑與QFT試劑符合率良好達(dá)86.7%。QFT試劑已被國外驗(yàn)證在診斷結(jié)核感染及結(jié)核病方面的特異性和敏感性都很好，在本實(shí)驗(yàn)中選用QFT作為對照，比較其與WT試劑的差異（P>0.05）。
綜述，干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫法（TB-IGRA）在結(jié)核潛伏感染中檢測效果較好，診斷價(jià)值要比PPD皮試高，值得推廣使用[1-5]。
參考文獻(xiàn)：
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[關(guān)鍵詞] 結(jié)核分枝桿菌；基因芯片；結(jié)核病診斷
[中圖分類號] R378.91+1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2014）01（b）-0123-03
國內(nèi)每年有將近13萬人因結(jié)核病死亡[1]，且有將近12萬新發(fā)耐多藥結(jié)核病患者，未來數(shù)年內(nèi)可能出現(xiàn)耐藥菌為主的流行態(tài)勢[2]。目前，結(jié)核病診斷的標(biāo)準(zhǔn)方法主要包括分枝桿菌分離培養(yǎng)、抗酸菌痰涂片鏡檢、菌種鑒定和藥敏試驗(yàn)等，但是其普遍存在特異性差、靈敏度低或需時(shí)長的缺點(diǎn)[3]，本院引進(jìn)國內(nèi)最新的結(jié)核診斷技術(shù)——晶芯結(jié)核分枝桿菌生物芯片診斷系統(tǒng)，是近年發(fā)展起來的進(jìn)行大規(guī)模遺傳多態(tài)性檢測的新方法[4]，其應(yīng)用于臨床診斷結(jié)核病，提高了時(shí)效性，現(xiàn)報(bào)道如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
本院2013年3月1日～2013年9月30日接受診治的結(jié)核病臨床疑似病例共685例，其中男性363例，女性322例；年齡9～76歲，平均（34.51±2.28）歲；其中臨床診斷結(jié)核病病例681例，包括185例痰結(jié)核菌培養(yǎng)陰性肺結(jié)核，157例痰結(jié)核菌培養(yǎng)陽性肺結(jié)核，193例結(jié)核性腦膜炎，95例結(jié)核性胸膜炎，51例骨結(jié)核。非結(jié)核分枝桿菌病4例。
1.2 試劑與儀器
Extractor 36核酸提取儀、BioMixerⅡ芯片雜交儀、Slider Washer芯片洗干儀、LuxScan 10 K-B芯片掃描儀、晶芯分枝桿菌菌種鑒定試劑盒、晶芯結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測試劑盒，均購自博奧生物有限公司。
1.3 方法
1.3.1 標(biāo)本的處理 以痰樣本為例（其余樣本同痰樣本處理方法）：①向痰液中加入等體積10%NaOH，渦旋振蕩，充分液化均勻，也可37℃液化30 min后再振蕩；②取1 ml液化后的痰液轉(zhuǎn)入1.5 ml Eppendorf管中，12 000 r/min，5 min，棄去上清；③加入1 ml生理鹽水，渦旋振蕩后12 000 r/min，5 min，棄去上清。
1.3.2 核酸提取 ①向處理好的標(biāo)本管內(nèi)加入80 μl核酸提取液，用加樣器混勻后轉(zhuǎn)入核酸提取管內(nèi)；②用核酸快速提取儀振蕩10 min，然后95℃水浴5 min。
1.3.3 PCR擴(kuò)增 ①從B試劑盒取出PCR擴(kuò)增試劑，自然解凍后輕搖，迅速離心后分裝18 μl至八聯(lián)排管中，加上蓋，標(biāo)上編號；②加入2 μl樣本核酸溶液，用加樣器吸打混勻；③上機(jī)擴(kuò)增。
1.3.4 芯片雜交 ①將PCR產(chǎn)物置PCR儀擴(kuò)增95℃變性5 min，隨后立即放入冰水混合物中，驟冷冰浴3 min；②取9 μl雜交緩沖液至八聯(lián)排管中，再按樣品順序加6 μl PCR產(chǎn)物；③準(zhǔn)備雜交盒，將14 μl雜交混合物加入芯片點(diǎn)陣中，完成后且金屬封條密封雜交盒；④放入雜交儀內(nèi)50℃雜交2 h；⑤將芯片洗干，甩水。
1.3.5 芯片掃描結(jié)果判讀 開啟掃描儀，預(yù)熱激光10 min，輸入芯片編號，樣本信息，選擇樣本，開始掃描，并判讀結(jié)果。
2 結(jié)果
2.1 結(jié)核分枝桿菌基因芯片檢測對結(jié)核病的診斷結(jié)果
本組結(jié)核菌基因檢測685例臨床疑似病例中，陽性患者135例，陽性率為19.7%，通過基因芯片檢測結(jié)果顯示，結(jié)核患者131例，非結(jié)核患者4例，陽性率為19.1%。
2.2 結(jié)核分枝桿菌基因芯片法耐藥基因變異的檢測結(jié)果
隨機(jī)選取68例陽性患者進(jìn)行耐藥基因檢測，通過基因芯片檢測結(jié)果顯示，12例患者發(fā)生基因突變，總突變率為17.6%；其中11例患者為利福平和異煙肼雙重基因突變，雙重基因突變率為16.2%，另1例只發(fā)生利福平基因突變；耐多藥率為16.2%。利福平總突變率為17.6%，其中9例為531（C-T）位點(diǎn)突變，3例為526（C-T）位點(diǎn)突變；異煙肼總突變率為16.2%，其中7例患者為katG 315（G-C）位點(diǎn)突變，3例為inhA-15（C-T）位點(diǎn)突變，1例為katG 315（G-A）位點(diǎn)突變。
3 討論
結(jié)核病嚴(yán)重危害人民群眾的身心健康，已經(jīng)成為全球共同關(guān)注的重大社會問題和公共衛(wèi)生問題[5]。目前，結(jié)核病診斷的主要方法包括分枝桿菌分離培養(yǎng)、抗酸菌痰涂片鏡檢、菌種鑒定和藥敏試驗(yàn)等，存在極易漏檢、敏感性低或時(shí)效性差的問題，培養(yǎng)法需要4周左右才能獲得結(jié)果，而藥敏試驗(yàn)法則需要8周，耐藥性不能盡早檢出結(jié)果，不僅會嚴(yán)重延誤診斷，更會引起臨床治療推遲，甚至導(dǎo)致治療失敗[6]，同時(shí)，也助長了耐藥結(jié)核分枝桿菌的傳播及流行，可能造成出現(xiàn)耐多藥結(jié)核，從而加劇了預(yù)防和控制結(jié)核病的艱巨性，因此，臨床上能夠找到快速診斷結(jié)核感染和耐藥結(jié)核病的新型診斷工具對結(jié)核預(yù)防控制的有效性有重大意義[7]。目前，基因芯片技術(shù)已經(jīng)被應(yīng)用于臨床，其具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速檢測和高通量的特點(diǎn)，為有效預(yù)防和控制結(jié)核病提供了一個(gè)新的快速、高效、實(shí)用的分子診斷平臺[8]，同時(shí)為結(jié)核病的篩查、合理用藥和疫情監(jiān)控提供了準(zhǔn)確且高效的應(yīng)用指導(dǎo)。
本院采用晶芯結(jié)核分枝桿菌生物芯片診斷系統(tǒng)診斷結(jié)核病，是博奧生物與結(jié)核病國家參比實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過對分枝桿菌菌種快速鑒定和結(jié)核耐藥快速檢測開展的合作研究，研制的分枝桿菌菌種鑒定試劑盒和結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測試劑盒，是國內(nèi)最新的結(jié)核診斷技術(shù)。與傳統(tǒng)的檢測方法相比，基因芯片法具有檢測時(shí)間短和通量高的特點(diǎn)[9]。分枝桿菌菌種鑒定試劑盒能夠快速檢測結(jié)核等17種臨床上多見的分枝桿菌，結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測試劑盒能夠快速檢測利福平和異煙肼的耐藥性，同時(shí)可將6～8周的常規(guī)檢測時(shí)間縮減到6 h[10]，這兩款試劑盒能夠成功應(yīng)用于臨床實(shí)踐，明顯縮短了復(fù)雜疑難疾病的確診時(shí)間，同時(shí)對結(jié)核耐藥做到早期篩選，并可指導(dǎo)患者合理用藥。
晶芯結(jié)核分枝桿菌的菌種鑒定和耐藥基因檢測采用的是DNA微陣列芯片技術(shù)，可通過對常見臨床樣本中的分枝桿菌核酸進(jìn)行檢測，快速獲取臨床常見致病分枝桿菌的準(zhǔn)確種屬信息。該產(chǎn)品主要用于結(jié)核病和非結(jié)核分枝桿菌病的輔助診斷，也可用于流行病學(xué)調(diào)查等領(lǐng)域，具有靈敏、準(zhǔn)確、快捷、先進(jìn)、高效的特點(diǎn)。
綜上所述，采用晶芯結(jié)核分枝桿菌生物芯片診斷系統(tǒng)用于臨床診斷結(jié)核病及其耐藥性，能夠縮短診斷時(shí)間，提高臨床時(shí)效性，得到了良好的社會效益，值得推廣應(yīng)用。
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【關(guān)鍵詞】 腺苷脫氨酶； 臨床應(yīng)用； 靈敏度 ；預(yù)后
腺苷脫氨酶（ADA）廣泛分布于人體各組織中， 以胸腺、脾和其他淋巴組織中含量最高， 肝、肺、腎和骨胳肌等處含量較低。血液中ADA主要存在于紅細(xì)胞、粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞， 其活性約為血清的40～70倍， T淋巴細(xì)胞比B淋巴細(xì)胞該酶活性更高。ADA較谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）更能反映急性肝損傷， 并有助于探測AH的殘留病變和肝臟病進(jìn)展。ALT恢復(fù)正常而ADA持續(xù)升高者， 常易復(fù)發(fā)或易遷延為慢性肝炎。故ADA活性測定可作為慢性肝病的篩選指標(biāo)[1]。因此， 作者ADA聯(lián)合檢測試劑盒（自動(dòng)生化型）， 進(jìn)行臨床驗(yàn)證和評價(jià)， 報(bào)告如下。
1 資料與方法
1. 1 一般資料 收集正常人群、未經(jīng)治療的肝炎患者和各類非肝炎性（慢性）疾病患者的血清各300例以上。正常人群為健康體檢人群標(biāo)本， 采用當(dāng)天生化檢測的血清標(biāo)本， 當(dāng)天采集， 當(dāng)天測定完畢；各類非肝炎性（慢性）疾病患者為門診患者， 除外診斷明確的肝炎患者， 標(biāo)本采用當(dāng)天隨機(jī)門診抽血的生化血清標(biāo)本， 當(dāng)天測定完畢；肝炎患者標(biāo)本， 為住院患者確認(rèn)中已明確診斷肝炎， 且未經(jīng)治療的患者， 留取當(dāng)天分離血清樣品， -20℃冰箱保存， 約2周內(nèi)測定。
1. 2 方法 ADA試劑盒由上海執(zhí)誠生物技術(shù)有限公司提供， 實(shí)驗(yàn)在Olympus AU640自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行。自動(dòng)化分析基本參數(shù)：Sample volume 15.0 μl；R1 volume 75 μl； R2 volume 75 μl；Wavelength pri：570 nm； method：rate；Reaction slope （+）；Measuring point： First（20）；Last（25）；Calibration Type（2AB）；Standard：C1 100 U/ml；C2 64 U/ml.
2 結(jié)果
根據(jù)檢測試劑盒提供的結(jié)果判讀說明， ADA結(jié)果≥18 U/ml判為陽性。觀察健康體檢人群、門診患者群體和肝炎患者ADA的陽性檢出率， 檢測結(jié)果與統(tǒng)計(jì)分析見表1， 2。
通過觀察正常人群、未經(jīng)治療的肝炎患者和各類非肝炎性（慢性）疾病患者的血清ADA量值變化和陽性率顯示：健康體檢人群組ADA檢出的特異性為98.9%， 假陽性率為0.85%；肝炎患者組ADA檢出的陽性率為74.23%， 假陰性率為25.77%；隨機(jī)門診患者組（排除診斷明確的肝炎患者， 可能存在急性炎癥和未明確診斷的肝炎患者）ADA檢出的陽性率為7.65%；對肝臟疾病的分類統(tǒng)計(jì)中顯示：其檢出的陽性率最高為肝硬化>酒精性肝病>肝癌>先天性肝病。
3 討論
腺苷脫氨酶是一類非特異性的物質(zhì)， 它并不能作為肝炎的診斷指標(biāo)， 而更多的應(yīng)該作為肝炎的觀測指標(biāo)。ADA是反映肝損傷敏感指標(biāo)， 可作為肝功能常規(guī)項(xiàng)目之一， 肝實(shí)質(zhì)損害時(shí)， 血清ADA活力升高。血清中ADA主要來源于肝臟， 因?yàn)樗歉渭?xì)胞的胞漿酶， 所以任何原因造成的肝細(xì)胞損傷， 其肝細(xì)胞膜的通透性就會增強(qiáng)， 致使血清中的ADA酶的活性升高， 故該酶可以作為反映肝實(shí)質(zhì)損傷的指標(biāo)[2]。
3. 1 判斷急性肝損傷及殘存病變研究表明， 在急性肝炎時(shí)血清ADA活性增高， 其陽性率高于ALT和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γ2GT）。而且由于ADA恢復(fù)正常較遲， 較ALT、γ2GT更能正確反映急性肝實(shí)質(zhì)損害， 并有助于探測急性肝炎的殘存病變。但重癥肝炎發(fā)生酶膽分離時(shí)， 盡管ALT不高， 而ADA常明顯升高。急性肝炎后期ADA升高率高于ALT， 其恢復(fù)正常時(shí)間也較后者遲， 并與組織學(xué)恢復(fù)一致。ALT恢復(fù)正常而ADA持續(xù)升高者， 常易復(fù)發(fā)或易遷延為慢性肝炎。
3. 2 協(xié)助診斷慢性肝病在反映慢性肝損傷時(shí)ADA較ALT為優(yōu)[3]。許多研究中都發(fā)現(xiàn)， 慢性活動(dòng)性肝炎（CAH）、肝硬化患者血清中ADA值顯著升高， 且較持久， 因而可判斷慢性肝病的程度[4]。另外， 慢性活動(dòng)性肝炎ADA活性明顯高于慢性遷延性肝炎（CPH）， 因此， 檢測ADA有助于CAH和CPH的鑒別診斷。
3. 3 有助于肝纖維化的診斷ADA活性差異與肝細(xì)胞損害關(guān)系不大， 與肝纖維化程度相關(guān)。肝纖維化程度增加， ADA活性增加。
本次臨床驗(yàn)證所用的試劑盒是自動(dòng)生化型， 優(yōu)勢力之處主要是：樣品用量省， 可以在自動(dòng)生化儀上編程測定， 提高了分析精密度。
臨床癥狀和影像學(xué)檢查是肝炎診斷的重要依據(jù)， 但當(dāng)肝炎缺乏特殊的癥侯群， 早期更無癥狀。各種影像學(xué)所能顯示的各不相同， 所以要實(shí)現(xiàn)早期診斷實(shí)際上是十分困難的。作者強(qiáng)調(diào)診斷應(yīng)從形態(tài)推進(jìn)到物質(zhì)， 堅(jiān)信物質(zhì)先于形態(tài)的觀點(diǎn)， 才能在診斷上有所突破 。ADA在各種肝炎早期即可升高已確實(shí)無疑。但在病程中各期的變化情況可能與疾病種類有關(guān)， 尚需累積資料。
參考文獻(xiàn)
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【摘要】目的 探討D一二聚體(D―D)測定在急性下肢深靜脈血栓形成(DVT)診斷中的臨床價(jià)值。方法 運(yùn)用超聲檢查對94例下肢各深靜脈血栓情況，并測定每一位患者血中D―D值，總結(jié)D―D值在急性下肢深靜脈血栓形成診斷中的價(jià)值。結(jié)果 急性DVT患者血中D―D值明顯升高。結(jié)論D―D可作為急性DVT診斷、預(yù)測及預(yù)后判斷方法之一。
【關(guān)鍵詞】 D一二聚體；靜脈血栓形成
下肢深靜脈血栓形成(DVT)起病急，病情重，易并發(fā)肺動(dòng)脈栓塞(PE)，?？晌＜吧?。D二聚體(D―dimer，D―D)是經(jīng)凝血酶及岡子Ⅷ作用的交聯(lián)纖維蛋白經(jīng)纖溶酶降解后產(chǎn)生的終末產(chǎn)物，是反映體內(nèi)凝血和纖溶的理想分子標(biāo)志物之一。D―D對靜脈血栓栓塞診斷的敏感性可達(dá)94％～99％［1］，在排除DVT和PE中，D―D的檢測已獲得了廣泛的應(yīng)用，其陰性結(jié)果對于排除VTE具有很高的價(jià)值。然而國內(nèi)對D―D在DVT中的應(yīng)用罕見報(bào)道，對急性DVT的診斷尚未見報(bào)道。本文通過應(yīng)用乳膠凝集法檢測DVT病程中D--D的變化，探討其臨床應(yīng)用價(jià)值。
1臨床資料
1．1病例來源
排除由于風(fēng)濕、類風(fēng)濕疾病或細(xì)菌性心內(nèi)膜炎所致D-D升高的患者，94例均是2006年1月一2010年12月在江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院外科與脈管科住院患者，并經(jīng)超聲檢查確診為急性下肢深靜脈血栓形成患者。男48例，女46例；年齡28～92(平均59．27±1 2．36)歲。病程1 2h至7d。發(fā)病在左下肢55例(58.51％ )，右下肢26例(27.66％ )，雙下肢13例(13.83％ )。單發(fā)36例（38.29%），多發(fā)58例(61.71%)。并與50例正常對照，比較血栓形成組患者血中D-D測值變化。
1．2診斷依據(jù)診斷均符合以下條件：(1)發(fā)病急驟，患肢脹痛或劇痛，股三角區(qū)或小腿有明顯壓痛；(2)患肢廣泛性腫脹；(3)患肢皮膚呈暗紅色，溫度升高；(4)患肢廣泛性淺靜脈怒張；(5)排除急性動(dòng)脈栓塞、急性淋巴管炎、丹毒、原發(fā)性盆腔腫瘤、小腿損傷性血腫、小腿纖維組織炎等疾?。?6)結(jié)合彩超符合急性DVT診斷者。
1．3儀器與方法
1．3．1儀器及試劑 肢體檢查采用彩色B超(美國產(chǎn)Agilent一4500型全數(shù)字化彩超，線陣變頻探頭8-1 2 MHz)；試劑用澳大利亞AGEN生物醫(yī)學(xué)試劑公司生產(chǎn)的DIMERTEST 乳膠試劑盒(試劑號BD145A)。
1．3．2檢測方法操作方法嚴(yán)格按試劑盒要求進(jìn)行。
1．4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以x2 檢驗(yàn)處理，應(yīng)用SPSS1 0．0 ForWindows統(tǒng)計(jì)軟件與Excel工作表。
2結(jié)果
94例急性下肢深靜脈血栓形成患者血中D-D測值水平較正常對照組明顯升高，差異有顯著性意義（見下表）。
組別 不同D-D濃度的病例數(shù)（mg/L）
1.0 合計(jì)陽性率%
血栓組4 6 84 9495.74
正常組 50 0 0500
注：P
3討論
D-D含量的變化可作為體內(nèi)高凝狀態(tài)和纖溶亢進(jìn)的分子標(biāo)志物之一 ［2］。D-D可用免疫學(xué)原理檢測。DimerTestTM是利用針對D．dimer的高度特異性單克隆抗體DD．36B／22包被乳膠顆粒，經(jīng)過乳膠凝集現(xiàn)象表現(xiàn)出來，從而產(chǎn)生陽性結(jié)果。其方法簡便、快速(約4 min)、費(fèi)用低、重復(fù)性好，無需特殊制備血漿，適于急癥或基層醫(yī)院需要。本組結(jié)果顯示：DVT急性期內(nèi)為新鮮血栓形成繼發(fā)性纖溶亢進(jìn),其D-D值明顯升高，這與有關(guān)文獻(xiàn)［3］報(bào)道一致。表明血栓在機(jī)化同時(shí)纖溶持續(xù)存在，且血液高凝，新鮮血栓可能繼續(xù)生成。臨床上，對高度懷疑DVT，而癥狀和體征不明顯者，可以應(yīng)用D-D 進(jìn)行確診或排除。D-D可作為急性DVT診斷、預(yù)測、及預(yù)后判斷方法之一，可為DVT臨床研究、診斷等提供客觀依據(jù)。
參考文獻(xiàn)
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【關(guān)鍵詞】血清;結(jié)核病;結(jié)核抗體
近年來隨著流動(dòng)人口的不斷增多和愛滋病在全球大規(guī)模流行,在世界范圍內(nèi)結(jié)核病卷土重來,已成為人類頭等傳染病。檢驗(yàn)結(jié)核抗體是結(jié)核病診斷和鑒別診斷的重要輔助方法。為了評估結(jié)核抗體快速診斷試劑盒對結(jié)核病診斷的價(jià)值,我們作了結(jié)核抗體試劑與細(xì)菌學(xué)的符合情況對比。
1.材料與方法
1.1 檢測試劑。結(jié)核抗體試劑(TB-DOT)為上海奧普公司提供的澳大利亞B&J Life Science Laboratory Company產(chǎn)品,抗原為純化的結(jié)核桿菌特異性外膜抗原,利用斑點(diǎn)免疫金滲濾試驗(yàn)(DIGFA)的原理。血清結(jié)核抗體檢測標(biāo)本量為40 ul。按試劑說明書操作:1.在檢測板的反應(yīng)孔中間加入2滴封閉液,等待薄膜吸入。2.取40 ul新鮮的血清標(biāo)本加入反應(yīng)孔中間,等待薄膜吸入。3.在反應(yīng)孔中間加入6滴洗滌液,等待薄膜吸入。4.在反應(yīng)孔中間加入2滴金標(biāo)液,等待薄膜吸入。5. 在反應(yīng)孔中間加入6滴洗滌液,等待薄膜吸入,目測結(jié)果。結(jié)核菌直接涂片為痰液直接涂片,自然干燥后“金胺O”染色,用熒光顯微鏡檢查。結(jié)核菌培養(yǎng)法用改良羅氏培養(yǎng)基進(jìn)行37℃培養(yǎng)8周,觀察結(jié)果或用BECTEC MGIT-960儀器快培6周,觀察結(jié)果。
1.2 檢測對象。結(jié)核病組304例,男186例,女118例,年齡15-82歲,均來自本院,是根據(jù)X線、B超、病史診斷的肺結(jié)核住院患者;肺部其他疾病組100例均來自本院,其中肺部腫瘤71例,其他疾病(包括肺炎、支擴(kuò)、慢阻肺等)29例;對照組為100例正常獻(xiàn)血員。
2.結(jié)果
三類疾病組測定結(jié)果(見表1)
三類方法測定肺結(jié)核組結(jié)果分析見表2)
3.討論
多年來診斷結(jié)核病的主要方法仍是痰涂片染色鏡檢結(jié)合X線胸片檢查以及細(xì)菌培養(yǎng)等。尤其是細(xì)菌學(xué)的檢查一直作為肺結(jié)核診斷的金標(biāo)準(zhǔn),其中涂片法特異性高,但敏感性差,分離培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌由于結(jié)核菌自身生長的速度緩慢,病人少痰、無痰、留取痰液方法不當(dāng)?shù)榷喾N原因,使痰結(jié)核菌的陽性率很難進(jìn)一步提高[1],使一部分痰菌陰性的肺結(jié)核診斷較為困難。
表1說明:肺結(jié)核患者的血清用TB-DOT檢測的結(jié)核抗體陽性率為74.0%,而在肺部腫瘤組陽性率僅為8.4%,肺部其他疾病組陽性率僅為10.3%0在肺結(jié)核組中,血清結(jié)核抗體的敏感性為74.0%;在肺部腫瘤組中血清結(jié)核抗體的特異性為91.6%,在肺部其他疾病組中血清結(jié)核抗體的特異性為89.7%、在對照組中血清結(jié)核抗體的特異性為91.0%,這四組結(jié)果之間有顯著差異性。說明了結(jié)核抗體的檢測可作為肺結(jié)核和其他肺部疾病的重要鑒別指標(biāo)之一。本文使用的結(jié)核抗體試劑盒是以結(jié)核分枝桿菌阿拉伯糖甘露糖脂(LAM)為抗原,用葡萄糖A蛋白膠體金綴合物作標(biāo)記物,檢測血清中相應(yīng)的結(jié)核抗體,方法簡便、快速,敏感性高,試劑盒中所用抗原的特異性是測試結(jié)果好壞的決定性因素[2]。
肺結(jié)核的實(shí)驗(yàn)室診斷方法眾多,各自的敏感性和特異性也相差較大。因此選用合理的檢測方法相當(dāng)重要[3]。本文進(jìn)行了血清結(jié)核抗體、痰液直接涂片找抗酸桿菌和結(jié)核菌培養(yǎng)三種方法的比較。表2說明:在179例痰菌陽性患者,三種測定方法均為陽性116例(84.6%),陰性63(35.2%)為一種或兩種方法陽性而其他方法陰性;在125例痰菌陰性患者中TB-Ab陽性數(shù)為75例(60.0%);在30例涂片(+)培養(yǎng)(-)和12例涂片(-)培養(yǎng)(+)中TB-Ab陽性率分別為83.3%和75.0%;而在137例涂片培養(yǎng)均(+)的患者中TB-Ab陽性數(shù)116(84.6%)。上述三種方法單一檢測時(shí)均存在一定數(shù)量的漏檢率,而二種方法聯(lián)合檢測時(shí)陽性率可達(dá)75.0% ― 83.3%,三種方法聯(lián)合檢測時(shí)陽性率可達(dá)84.6%,說明了應(yīng)用二種或二種以上方法聯(lián)合檢測能顯著提高痰菌陰性肺結(jié)核的陽性檢出率[4]。
涂陰肺結(jié)核的診斷是臨床上常遇到的問題。當(dāng)病人肺部出現(xiàn)異常陰影懷疑肺結(jié)核,而痰涂片鏡檢抗酸桿菌陰性時(shí),除多次查痰以及等待痰結(jié)核菌培養(yǎng)結(jié)果外,為了肺癌及其他肺部疾病的鑒別,有時(shí)需進(jìn)行纖維支氣管鏡檢查及肺活檢,以獲得病原學(xué)及病理學(xué)證據(jù)。因此,血清學(xué)診斷可為涂陰肺結(jié)核的診斷提供有益的參考資料[5]。表3說明:血清結(jié)核抗體對痰菌陽性肺結(jié)核的敏感性為83.8%,特異性為91.0%,陽性預(yù)期值為94.3%,陰性預(yù)期值為75.8%。血清結(jié)核抗體對痰菌陰性肺結(jié)核的敏感性為60.0%,特異性為91.0%,陽性預(yù)期值為89.3%,陰性預(yù)期值為64.5%。本文中125例痰菌陰性的肺結(jié)核患者中血清結(jié)核抗體陽性的為75例,陽性率可達(dá)60%。說明了在這些病人的鑒別診斷中結(jié)核抗體起著舉足輕重的作用。本法操作簡單,結(jié)果直觀,無論單一或批量樣品均可隨時(shí)檢測,其次金標(biāo)記物較穩(wěn)定,凍干后可在室溫下長期保存,反應(yīng)快速,診斷率高,特別適合結(jié)核分枝桿菌陰性及肺外結(jié)核的診斷,是一種輔助臨床診斷結(jié)核病的實(shí)用有效的免疫學(xué)方法之一,值得推廣應(yīng)用。但不令人滿意的是無論肺部其他疾病組還是肺部腫瘤組,假陽性率分別為10.3%和8.4%,是否與直接檢測未被稀釋的血清,易于引起非特異性吸附有關(guān),值得進(jìn)一步研究。
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資料與方法
研究對象：3246份標(biāo)本均來自本市2011年1月～2011年12月的性病監(jiān)測人群。
試劑：ELISA試劑盒，TRUST試劑盒，TPPA試劑盒。所有試劑均在有效期內(nèi)。
主要檢測儀器：TP-ELISA法使用的洗板機(jī)；酶標(biāo)儀。
方法：采用ELISA及TRUST兩種方法同時(shí)對性病監(jiān)測人群標(biāo)本進(jìn)行梅毒螺旋體血清學(xué)檢測，兩種方法有一種為陽性的標(biāo)本采用梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)(TPPA)法確證。檢測過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。
結(jié)果
TP-ELISA法和TRUST法的檢測結(jié)果：3246份標(biāo)本經(jīng)TP-ELISA(198份陽性，陽性率6.1%)和TRUST法(169份陽性，陽性率5.2%)篩查，221份(TP-ELISA和TRUST法檢測有一種為陽性即認(rèn)定為篩查陽性)篩查結(jié)果為陽性，見表1。
兩種梅毒血清學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較：221份篩查結(jié)果為陽性的標(biāo)本經(jīng)TPPA法確證，其中陽性197份，陰性24份。以TPPA法為標(biāo)準(zhǔn)，對TP-ELISA法和TRUST法篩選的陽性血清進(jìn)行分析。197例確證(TPPA法)陽性標(biāo)本經(jīng)TP-ELISA法檢測196例結(jié)果為陽性，敏感性99.5%；TP-ELISA法檢出的198例陽性標(biāo)本中2例經(jīng)TPPA法確證為陰性，特異性92.3%。197例確證(TPPA法)陽性標(biāo)本經(jīng)TRUST法檢測148例結(jié)果為陽性，敏感性80.1%；TRUST法檢出的169例陽性標(biāo)本中21例經(jīng)TPPA法確證為陰性，特異性47.3%。TP-ELISA法和TRUST法兩種方法同為陽性的146例標(biāo)本，經(jīng)確證均為陽性。見表2。
經(jīng)TPPA法確證為梅毒陽性的病例中有3例經(jīng)調(diào)查無梅毒臨床癥狀，無不潔性生活史和既往史，排除梅毒診斷，已經(jīng)確診為其他疾病。
討論
TP-ELISA法是通過基因工程途徑生產(chǎn)重組TP蛋白酶多肽作為抗原，檢TP重組抗原包被在微孔測定板上，測定患者的特異性TP抗體。該方法穩(wěn)定性好，操作規(guī)范，能檢出梅毒特異性IgM、IgG。結(jié)果判斷客觀，容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化和標(biāo)準(zhǔn)化測量。本次試驗(yàn)出現(xiàn)2例假陽性和1例假陰性，可能與梅毒螺旋體抗原純化不夠和基因位點(diǎn)不同有關(guān)。雖然可以通過TPPA法排除部分的假陽性，但TP-ELISA法和TPPA法均存在假陽性的問題［1］。
TRUST法檢測的是非特異性抗心磷脂抗體，感染發(fā)病過程中，一般在硬下疳出現(xiàn)4周之后才能檢出。梅毒在治療過程中，此類抗體滴度逐漸下降，治愈后轉(zhuǎn)陰。該方法特異性較低，可發(fā)生技術(shù)性假陽性和生物學(xué)假陽性。本次調(diào)查結(jié)果與資料報(bào)道一致。因此在臨床診斷中對于老年人及炎癥等患者，往往可以通過TRUST檢測滴度小于1:8來排除梅毒診斷。而癌癥及腫瘤患者由于存在高低度的特點(diǎn)，易引起誤診。
綜上所述，梅毒血清學(xué)試驗(yàn)雖然對梅毒的診斷有很大價(jià)值，但也存在一定的假陽性和假陰性。梅毒的血清學(xué)診斷程序應(yīng)該為首先排除原發(fā)病，再同時(shí)進(jìn)行TRUST法和TP-ELISA法檢測。如兩種方法均為陽性可進(jìn)行抗梅毒治療；如TP-ELISA法陽性而TRUST法陰性，可進(jìn)行隨訪，還要結(jié)合病史、體檢結(jié)果及其他檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行綜合分析后作出診斷，以免發(fā)生誤診。
