時(shí)間：2023-05-29 17:51:21
開篇：寫作不僅是一種記錄，更是一種創(chuàng)造，它讓我們能夠捕捉那些稍縱即逝的靈感，將它們永久地定格在紙上。下面是小編精心整理的12篇免疫組化技術(shù)，希望這些內(nèi)容能成為您創(chuàng)作過程中的良師益友，陪伴您不斷探索和進(jìn)步。
【關(guān)鍵詞】 自制免疫組化筆；中性樹膠；免疫組化切片
【Abstract】 Objective To avoid organization overflow of antibody in immunohistochemical experiment, and get not incubation and reaction on antigen and antibody.Therefore, the experiment must use immunity group pen draws a circle periphery the slice organization avoids the immune body flowing out.Methods The old selfmade immunity group liquid stone wax pencil, pour into the 2ml gum with the vial, joins the right amount xylene dilution gum, dips the dilution after this pen the gum draws a circle periphery the slide organization.Results The result reaches 90% again using the selfmade immunity group pen's waterproofing rate, was the same with the American import immunity group pen and the domestically produced pen its waterproofing rate effect, strengthened the immunity group masculine cell's expression effect.Conclusion The spends the old selfmade immunity group pen definitely to be possible to replace any domestically produced, the import immunity group pen, and low in price.
【Key words】 Simple PAP pen;Neutral balsma; Immunohistochemistry
作者單位：519000廣東省珠海市中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院病理科
免疫組織化學(xué)技術(shù)是利用免疫學(xué)抗體與抗原結(jié)合的原理以及細(xì)胞化學(xué)技術(shù)對組織、細(xì)胞特定抗原或抗體進(jìn)行定位定量研究的技術(shù)。它廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、組織解剖學(xué)、病理學(xué)等［1］。做免疫組化不外乎兩種方法:漂片法或貼片法［2］。然而，前者容易爛片，不適合做腦片等大而易碎的組織;后者方法較好，但為了保持良好的染色效果和節(jié)省抗體，常常需要免疫組化筆。免疫組化筆無論是國產(chǎn)還是進(jìn)口，都有在使用過程中液體石蠟流出不暢或使用中用力過大導(dǎo)致液體石蠟流出過多污染片子，免疫組化液體石蠟筆使用到后期隔水性差，同時(shí)圈片數(shù)量有限，且價(jià)格昂貴。我們通過多次實(shí)驗(yàn)，摸索出一種廢舊免疫組化液體石蠟筆的再利用技術(shù)，其防水性好、價(jià)格低廉、可保證免疫組化效果。
1 資料與方法
1.1 材料
1.1.1 實(shí)驗(yàn)用品和器械 樹膠2 ml(中國上海懿洋儀器有限公司)、廢舊免疫組化液體石蠟筆一支、30張貼有腦片的載玻片(每張載玻片2張腦片)、0.05 m的PBS、各種抗體、MaxVisionTM試劑盒、DAB顯色劑(AEC顯色劑)(購于邁新試劑)、濕盒、恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱、冰箱、普通顯微鏡等。
1.1.2 實(shí)驗(yàn)分組 實(shí)驗(yàn)分3組:甲組用美國進(jìn)口免疫組化筆畫圈;乙組用國產(chǎn)一般免疫組化筆(福州邁新公司生產(chǎn))畫圈;丙組用廢舊免疫組化液體石蠟筆畫圈。每組15張載玻片(30張腦片)。
1.2 方法
1.2.1 免疫組化筆的制作方法 將廢舊免疫組化液體石蠟筆放入二甲苯中，將筆芯中殘留的液體石蠟徹底溶解去除干凈之后取出，這樣就制成了一只再利用免疫組化筆。
1.2.2 免疫組化筆的使用方法 用小瓶倒入2 ml樹膠，加入適量二甲苯稀釋樹膠，將再利用免疫組化筆蘸少量稀釋后樹膠圍繞切片組織周圍0.2 cm處畫圈，樹膠不能覆蓋切片上的組織。
1.2.3 免疫組化MaxVisionTM法(試劑盒及抗體均購于福州邁新試劑公司)［3］。①石蠟切片脫蠟和水化后，用PBS(pH7.4)沖洗3次，3 min次。②根據(jù)每一種抗體的要求，對組織抗原進(jìn)行相應(yīng)的修復(fù)。③如果有必要(內(nèi)源性過氧化物酶含量過高的組織)，每張切片加一滴或50 μl 3%過氧化氫，室溫下孵育10 min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS沖洗3次，3 min/次。④除去PBS液，每張切片加一滴或50 μl的第一抗體(用戶自選)，室溫下孵育60 min或4℃過夜，建議參見每種抗體的說明書。PBS沖洗3次，3 min/次。⑤除去PBS液，每張切片加一滴或50 μl即用型MaxVisionTM試劑，室溫下孵育10~15 min。PBS沖洗3次，3 min/次。⑥除去PBS液，每張切片加2滴或100 μl新鮮配制的DAB或AEC溶液，顯微鏡下觀察3~5 min(DAB)或10 min(AEC)。⑦自來水沖洗，蘇木素復(fù)染，PBS或自來水沖洗返藍(lán)。如果用DAB顯色，則切片經(jīng)過梯度酒精脫水干燥，(二甲苯透明)，中性樹膠封固；如果用AEC顯色，則切片不能經(jīng)酒精脫水，而直接用水性封片劑封片。
1.2.4 結(jié)果觀察及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 觀察整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中再利用免疫組化筆的隔水性效果;鏡下觀察組織切片中抗原與抗體結(jié)合后抗原在免疫組化中陽性反應(yīng)物的表達(dá)情況，將所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理、分析。
2 結(jié)果
2.1 3種免疫組化筆隔水率的比較 美國產(chǎn)免疫組化筆的隔水率為90%;國產(chǎn)免疫組化筆的隔水率為80%;而再利用的免疫組化筆的隔水率可達(dá)90%。
2.2 3種免疫組化筆對免疫組化試驗(yàn)陽性結(jié)果的影響 鏡下大體觀察發(fā)現(xiàn):用再利用的免疫組化筆畫圈的切片陽性結(jié)果良好，而用美國產(chǎn)免疫組化筆畫圈的切片雖有陽性結(jié)果，但片子周圍有時(shí)有污染現(xiàn)象。
3 討論
我們在多次免疫組化實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn):市售的各種免疫組化液體石蠟筆有時(shí)會(huì)出現(xiàn)使用不暢，甚至根本畫不出來，有時(shí)畫片時(shí)稍用力過大，液體石蠟就會(huì)從筆芯中溢出過多污染切片，是影響免疫組化結(jié)果的因素之一，而且此筆價(jià)格昂貴，一桿國產(chǎn)筆價(jià)格大約在400元左右，畫圈不超過200個(gè)筆芯中的液體石蠟即用完。為此，我們通過多方探索找到了理想的替代品:中性樹膠。樹膠是一種天然樹脂，廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)，作為生物切片的封藏劑，它可溶于二甲苯、苯、甲苯、二氧氯環(huán)等，不溶于水［3］。中性樹膠中加入適量二甲苯稀釋，可使樹膠易浸入筆芯中，在切片上畫圈時(shí)使之順暢，同時(shí)二甲苯揮發(fā)后樹膠畫的圈淡且薄，但卻不影響隔水效果。免疫組化組織切片染色后需用中性樹膠封片，封片用的樹膠與畫圈用的樹膠相互溶合，不會(huì)形成污染。故此，我們應(yīng)用其特性再利用了廢舊的免疫組化筆，在實(shí)驗(yàn)中不但節(jié)約了大量的資金，而且使用方便耐用，3 ml 樹膠可畫300個(gè)圈左右，代價(jià)大約只有2元錢。最重要的是它不影響免疫組化結(jié)果，由于隔水性能好，保證了抗原抗體的充分結(jié)合，增強(qiáng)了免疫組化的效果，節(jié)約各種抗體及試劑盒各試劑，故可推薦使用。
參 考 文 獻(xiàn)
［1］ 李成文.現(xiàn)代免疫化學(xué)技.上海：上海科技出版社，1992：97100.
【論文摘要】近年來分子生物學(xué)技術(shù)以及其它高、新技術(shù)在病理領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用，同樣作為體育界的基礎(chǔ)研究學(xué)科運(yùn)動(dòng)人體科學(xué)的發(fā)展已經(jīng)不能滿足簡單的宏觀的研究，越來越多的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)以及病理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)在運(yùn)動(dòng)人體科學(xué)廣泛應(yīng)用，尤其是組織病理學(xué)技術(shù)中定位技術(shù)，例如免疫組化、原位雜交等。本文就以上三種病理學(xué)常用的定位技術(shù)的方法進(jìn)行綜述。
1免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)
隨著免疫組織化學(xué)染色技術(shù)的廣泛應(yīng)用，病理學(xué)研究產(chǎn)生了劃時(shí)代的飛躍。免疫組織化學(xué)是病理學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的方法，是在蛋白質(zhì)水平用各種特異性抗體檢測細(xì)胞內(nèi)各種抗原物質(zhì)。根據(jù)標(biāo)記物的不同，免疫組織化學(xué)技術(shù)可分為免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫鐵蛋白技術(shù)、免疫金-銀細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、親和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫電子顯微鏡技術(shù)等。
1.1免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)步驟免疫組化技術(shù)是在組織化學(xué)的方法上結(jié)合免疫學(xué)的理論和技術(shù)發(fā)展起來的一門新技術(shù)。其原理是利用免疫學(xué)的核心——抗原體特異性結(jié)合的原理，用標(biāo)記抗體追蹤抗原，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記于結(jié)合后的特異性抗體上的顯示劑，如酶、金屬離子、同位素等顯示一定的顏色，并借助顯微鏡、熒光顯微鏡、電鏡對其顏色進(jìn)行觀察，以達(dá)到檢測抗原物的目的[1]。
1.2免疫組化技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)免疫組化技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：①特異性強(qiáng)，免疫組化中抗體與組織細(xì)胞中的抗原的結(jié)合是特異的。如白細(xì)胞共同抗原（LCA）顯示淋巴細(xì)胞成分。②敏感性高，而今，由于抗生物素—生物素（ABC）法和鏈酶素—過氧化物酶連接（SP）法的出現(xiàn)，使抗體的稀釋度(代表敏感度)達(dá)到了上千、上萬，甚至上億倍，使免疫組化技術(shù)更加可靠。③定位準(zhǔn)確，由于抗原抗體的結(jié)合是特異的，因而免疫組化技術(shù)可在組織和細(xì)胞內(nèi)準(zhǔn)確定位，對不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，將形態(tài)與功能相結(jié)合，對疾病進(jìn)行深入的研究。
2原位雜交實(shí)驗(yàn)技術(shù)
原位雜交是將組織化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)結(jié)合來檢測合定位核酸的技術(shù)。它是用一段已知序列的核苷酸片斷來檢測細(xì)胞內(nèi)是否存在欲檢測物質(zhì)的DNA或RNA，是比免疫組化更加靈敏而深入一個(gè)層次的檢驗(yàn)方法。根據(jù)所選探針和待測靶序列的不同，核酸原位雜交有DNA-DNA雜交、DNA-RNA雜交、RNA-RNA雜交等。
2.1原位雜交技術(shù)的應(yīng)用原位雜交由于不需要從待測組織中提取核酸，可完好的保存組織、細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，將形態(tài)學(xué)與基因功能活動(dòng)的變化相結(jié)合進(jìn)行多層面的研究。主要應(yīng)用：①細(xì)胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位可用于基因圖譜、基因表達(dá)和基因組進(jìn)化的研究；②感染組織病毒DNA/RNA的檢測和定位；③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)及其變化的監(jiān)測；④基因在染色體上的定位；⑤檢測染色體的變化；⑥間期細(xì)胞遺傳學(xué)的研究。
2.2原位雜交技術(shù)與免疫組化的比較
2.2.1兩者的區(qū)別原位雜交與免疫組化染色技術(shù)相比較，這兩種方法的共同之處均具有定位檢測的功能，且均有較高的敏感性和特異性，所不同的是免疫組化染色是用的是抗體，其檢測對象是抗原，機(jī)制是抗原-抗體的特異性結(jié)合，是蛋白質(zhì)表達(dá)水平的檢測；原位雜交使用的是探針，遵循堿基互補(bǔ)配對的原則與待測靶序列結(jié)合，是DNA或mRNA水平的檢測。從實(shí)驗(yàn)方法來看，免疫組化染色操作相對簡單，成本相對較低，受外界因素的影響相對小；原位雜交技術(shù)無論從實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)上，還是從實(shí)際操作上均較免疫組化染色復(fù)雜，成本的高低與試劑的種類和來源密切相關(guān)。一般而言，直接選用商品化的標(biāo)記探測和檢測試劑盒的實(shí)驗(yàn)成本較高；熒光標(biāo)記探針較非熒光標(biāo)記探針的成本高，對樣本及實(shí)驗(yàn)條件的要求較高，也更容易受到外界因素的影響。
2.2.2免疫組化與原位雜交雙標(biāo)技術(shù)雙標(biāo)技術(shù)是在同一張組織切片上標(biāo)記兩種不同的抗體或同時(shí)應(yīng)用兩種不同的檢測手段，如免疫組化和原位雜交技術(shù)，在不同層次來檢測同一細(xì)胞上某些物質(zhì)的表達(dá)是否有相關(guān)性的一種實(shí)驗(yàn)方法。與傳統(tǒng)的單項(xiàng)檢測相比，雙標(biāo)記具有無可比擬的優(yōu)越性，可以克服由于切片間各種差異而引起的時(shí)間或空間的樣本誤差。實(shí)驗(yàn)方法上先進(jìn)行原位雜交會(huì)減少免疫組化過程中對待測DNA或RNA的破壞或影響，一般目前均推薦先進(jìn)行原位雜交后進(jìn)行免疫組化標(biāo)記[2，3]。具體的操作跟單純的免疫組化和原位雜交各自的方法一致。需要注意的問題就是：①所用的實(shí)驗(yàn)設(shè)備必須經(jīng)DEPC水浸泡或200℃烤箱過夜，操作時(shí)須帶口罩及手套；②當(dāng)雜交步驟完成后，切片必須認(rèn)真浸泡及長時(shí)間洗滌至少超過30min。③作免疫組化的各步驟時(shí)間均須適當(dāng)延長，以增加抗原抗體間的結(jié)合，楊青春等人研究發(fā)現(xiàn)每個(gè)步驟均延長2～3倍時(shí)間。④免疫組化顯色后不需要用蘇木精復(fù)染，以免遮蓋核信號。
參考文獻(xiàn)
[1]紀(jì)小龍，施作霖.診斷免疫組織化學(xué)[M].北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，1997.5.
免疫組化技術(shù)，在現(xiàn)代生物學(xué)領(lǐng)域中廣泛應(yīng)用，在醫(yī)學(xué)的基礎(chǔ)和臨床研究中發(fā)揮著重要的作用，為疾病尤其是腫瘤的診斷、鑒別診斷提供了強(qiáng)有力的手段。為了使顆粒清楚、背景不加深，經(jīng)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用蠟塊切好片，用15%乙醇處理，做免疫組化染色，細(xì)胞核和細(xì)胞漿的背景著色明顯減輕，顆粒清晰，更易計(jì)數(shù)，取得較好的效果。
1 材料和方法
1.1 取材 取乳腺標(biāo)本，將組織切成1.5 cm×1.5 cm×0.2 cm大小，中爾馬林固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋。
1.2 切片 連續(xù)切片3 μm厚，并做常規(guī)免疫組化染色和切片后用15%乙醇處理后的免疫組化染色。
1.3 免疫組化染色 將切片放入有蓋的15%乙醇塑料容器內(nèi)漂洗數(shù)分鐘后，迅速放入水浴缸內(nèi)展平處理，結(jié)束后于60 ℃烤箱4 h。切片常規(guī)脫蠟至水，按免疫組化染色常規(guī)步驟進(jìn)行DAB顯色，水洗，迅速常規(guī)脫水，透明、封片。
2 結(jié)果
2.1 圖1 常規(guī)免疫組化染色：背景呈棕色，顆粒呈棕褐色 ×40作者單位：430085 湖北武鋼二醫(yī)院病理室(張麗 徐毅 吳愛軍 劉樹剛 袁偉)；湖北武鋼二醫(yī)院外科(陳首虹 羅力 紀(jì)光偉)
2.2 用15%乙醇處理切片后的免疫組化染色觀察 背景白色或淺黃色與棕褐色的顆粒形成鮮明對比，易于腫瘤的診斷和鑒別診斷(如圖2)。
3 討論
3.1 用15%乙醇處理切片后的免疫組化染色，是因?yàn)榇挤肿又械臍溲蹑I高度極化的緣故。羥基上帶有部分正電荷的氫可以和另一分子中帶部分負(fù)電荷的氧相互吸引而形成氫鍵，因此液體狀態(tài)的醇通過氫鍵發(fā)生締合［1］。從組織細(xì)胞水平進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)［2］。結(jié)果，背景清晰，棕褐色顆粒與背景反差增大。
3.2 在染色過程中應(yīng)注意：①DAB顯色時(shí)間要短，不超過3 min即可；②15%乙醇容器要加蓋，以免揮發(fā)；③對比染色應(yīng)為清楚地顯示陽性成分與進(jìn)行HE染色等。此種方法：重復(fù)性好，結(jié)果穩(wěn)定，具有可行性和實(shí)用價(jià)值。
參考文獻(xiàn)
1 承德醫(yī)學(xué)專科學(xué)校.醫(yī)用化學(xué).人民衛(wèi)生出版社，1980：140.
【關(guān)鍵詞】 胸腔積液;冰凍切片;免疫組化
胸腔積液是多種胸部疾病，特別是腫瘤性疾病的常見伴發(fā)體征，甚至為患者首發(fā)表現(xiàn)，明確胸腔積液的性質(zhì)對于疾病的診斷、治療有重要意義。一般病理檢查通常離心、涂片、HE染色，但由于細(xì)胞分散、染色效果不好、重復(fù)性差等原因，診斷的陽性率低，易漏診。尤其是增生的間皮細(xì)胞和轉(zhuǎn)移性腺癌;未分化癌與小細(xì)胞癌和淋巴瘤之間不易區(qū)別，疑診病例較多，對臨床幫助不大。我們將胸腔積液離心后進(jìn)行冰凍切片常規(guī)HE染色，同時(shí)進(jìn)行相應(yīng)的免疫組化標(biāo)記，明顯提高了胸水細(xì)胞診斷的陽性率及準(zhǔn)確性。該方法可重復(fù)性高，細(xì)胞清晰，能明確診斷，部分病例能明確腫瘤的類別和來源，有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。
1 資料與方法
1.1 臨床資料 2006年5月—2008年12月我們共收集胸水標(biāo)本64例，其中男性28例、女性36例，年齡32～82歲，平均年齡51.6歲。經(jīng)組織學(xué)或結(jié)合臨床資料證實(shí)腺癌12例，鱗癌8例，惡性上皮型間皮瘤4例，間皮增生40例。
1.2 方法 ①將送檢的胸水直接用一次性吸管吸取下面沉淀的部分30 ml于試管內(nèi)，2 500 r/min，離心10 min。將上清液去掉，離心沉淀物涂片1張、HE染色。沉淀的部分放在冰凍切片機(jī)上冷凍頭上，然后加入OCT包埋劑進(jìn)行切片。②胸水離心沉淀物少就直接倒去上清液，先在冰凍切片機(jī)的冷凍頭上加入OCT包埋劑，然后將胸水離心沉淀物放在上面進(jìn)行切片。③胸水離心沉淀物常規(guī)切片6張：1張HE染色，5張免疫組化染色。④制作免疫組化染色的冷凍切片必須冷藏保存，然后根據(jù)需要進(jìn)行免疫組化染色。⑤免疫組化染色標(biāo)記細(xì)胞角蛋白(cytokeratin，CK)、上皮膜抗原(EMA)、肺癌相關(guān)抗原(LCA)、間皮細(xì)胞、波形蛋白(vimentin)。免疫組化染色方法：采用即用型快捷免疫組化MaxvislonTM試劑盒，試劑及抗體和免疫組化陽性片均由福建邁新生物技術(shù)公司提供，陰性對照采用PBS作為一抗。
染色步驟：①切片室溫干燥后，入4℃丙酮固定10 min，用PBS(pH7.4)沖洗3次，每次3 min。②根據(jù)每一種抗體的要求，對組織抗原進(jìn)行相應(yīng)的修復(fù)，除細(xì)胞角蛋白用胰酶消化外，間皮細(xì)胞、vimentin、LCA、EMA都要檸檬酸高溫修復(fù)(按說明操作)。 ③每張切片加1滴3%過氧化氫，室溫下孵育10 min，PBS沖洗3次，每次3 min。 ④每張切片加1滴自選1抗體，室溫下孵育60 min。⑤PBS沖洗3次，每次3 min。⑥除去PBS液，每張切片加2滴新配制的DAB溶液10 min。⑦自來水洗，蘇木素復(fù)染直至中性樹膠封固。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.01，P
2 結(jié)果
送檢的64例胸水直接離心涂片HE染色診斷陽性細(xì)胞7例，陰性39例，可疑18例。應(yīng)用冰凍切片技術(shù)聯(lián)合免疫組化檢查結(jié)果陽性細(xì)胞24例，陰性38例，可疑陽性僅2例;χ2=22.13，P
3 討論
胸腔積液是多種胸部疾病特別是惡性腫瘤的常見伴發(fā)體征，甚至為患者首發(fā)癥狀。通過胸腔積液對明確病變性質(zhì)及類型有重要意義，對疾病的治療也有重要指導(dǎo)意義。一般的胸水病理檢查僅僅行單純離心、涂片、HE染色，光鏡下觀察，但由于細(xì)胞分散、染色效果不理想，又因細(xì)胞容易堆積成團(tuán)，其診斷的陽性率較低，特別是小細(xì)胞腫瘤難以和間皮瘤、淋巴瘤、未分化腫瘤細(xì)胞區(qū)別。 冰凍切片技術(shù)是一種成熟的病理制片技術(shù)，已廣泛用于病理診斷。其與直接涂片法比較，可全面、簡單、快捷的收集積液內(nèi)的腫瘤細(xì)胞;切片質(zhì)量高，視野清晰，細(xì)胞分布均勻，可明顯提高腫瘤細(xì)胞的陽性檢出率和診斷準(zhǔn)確性;而且細(xì)胞相對較集中，可明顯節(jié)約診斷時(shí)間，提高工作效率;特別對于有較大組織塊殘存的樣本，可重復(fù)性切片。我們在胸水細(xì)胞病理診斷中采用冰凍切片技術(shù)聯(lián)合免疫組化，大大提高了胸水細(xì)胞診斷的準(zhǔn)確性，免疫組化又能準(zhǔn)確的定位腫瘤細(xì)胞的表達(dá)抗原，確定腫瘤細(xì)胞的屬性及來源，明顯提高了陽性細(xì)胞的檢出率。不僅有助于良、惡性的判斷，而且對常規(guī)涂片中難以鑒別的間皮細(xì)胞瘤和轉(zhuǎn)移性腺癌的識(shí)別以及對分化差的腫瘤的病理診斷或腫瘤類型的確定有重要作用。
細(xì)胞角蛋白(CK)廣泛存在于各種上皮細(xì)胞及上皮源性腫瘤細(xì)胞中，故某些低分化腺癌可呈強(qiáng)陽性表達(dá)，而間皮細(xì)胞則為弱陽性，在間皮瘤中也可為強(qiáng)陽性，所以CK可作為上皮源性腫瘤的重要標(biāo)記物，但不能完全區(qū)分腺癌與間皮瘤。EMA是一種高分子質(zhì)量跨膜糖蛋白，在正常腺細(xì)胞中表達(dá)率很低;但在癌組織由于存在畸形糖基化和糖基化不完全，使其核心蛋白暴露出新的蛋白表位或新的糖抗原，從而成為上皮組織來源腫瘤特異的抗原之一。LCA對肺癌診斷較高的敏感性、特異性，可用于肺癌的輔助診斷。波形蛋白(vimentin)是間葉源性腫瘤細(xì)胞的標(biāo)記物，絕大多數(shù)癌為陰性表達(dá)，而間皮瘤呈陽性表達(dá)，因此可用于區(qū)分腺癌與間皮瘤。我們應(yīng)用一組抗體進(jìn)行檢測比較，不僅提高了診斷的陽性率，而且對腺癌和惡性間皮瘤起到鑒別診斷作用。
在操作中應(yīng)注意幾個(gè)問題：①冰凍切片不能太厚，一般4 μm連續(xù)切片，同時(shí)應(yīng)使用粘膠片，切片后如果不染色，必須吹干，冷藏保存。②在胸水細(xì)胞離心沉淀較少的情況下，倒去上清液，先在冰凍切片機(jī)的冷凍頭上加入OCT包埋劑，然后將胸水離心沉淀物放在上面進(jìn)行切片。 ③如果血性胸水，可加入0.5%氯化銨溶液離心去除紅細(xì)胞效果較好。 ④在采集胸水時(shí)最好使用一次性吸管吸取下面沉淀部分，胸水應(yīng)新鮮。⑤免疫組化觀察時(shí)應(yīng)注意，胞漿和細(xì)胞核陽性色差異，特別是惡性間皮瘤陽性部位在胞膜部分，免疫組化還可以根據(jù)病例不同選擇不同的抗體。
綜上所述，冰凍切片聯(lián)合免疫組化檢測可明顯提高胸積液細(xì)胞診斷的陽性率及準(zhǔn)確性，且操作簡單、方便快捷，對腫瘤細(xì)胞的診斷和鑒別診斷具有重要意義，可為臨床正確選擇治療方案提供較為可靠的依據(jù)。
【參考文獻(xiàn)】
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關(guān)鍵詞 胃腸間質(zhì)瘤 免疫組織化學(xué) CD117 CD34
胃腸道間質(zhì)瘤（gastrointestinal stromal tumors,GIST）是一組獨(dú)立起源于胃腸道干細(xì)胞的腫瘤，臨床并非十分罕見。相關(guān)報(bào)道近年發(fā)病率為1～2/10萬，中國至少應(yīng)超過此數(shù)目。收集57例GIST臨床病例并做免疫組化檢測，探討其臨床病理特點(diǎn)和免疫組化特征，為進(jìn)一步規(guī)范病理診斷標(biāo)準(zhǔn)及為臨床治療提供相關(guān)依據(jù)。
材料與方法
標(biāo)本來源與檢測方法：收集我院2005年8月～2010年12月明確診斷為胃腸道間質(zhì)瘤的手術(shù)標(biāo)本57例，經(jīng)10%中爾馬林固定，常規(guī)石蠟切片，HE染色。采用S-P法對所有病例進(jìn)行CD117、CD34、SMA、Desmin等抗體的免疫組化檢測。
手術(shù)方式：57例均為手術(shù)完全切除，切除距腫瘤均2cm以上。其中，胃間質(zhì)瘤行大部分切除或行楔形拒不切除，大、小腸間質(zhì)瘤切除約10cm的腸管及相應(yīng)的系膜或局部或姑息切除。
結(jié) 果
臨床資料：本組病例中男31例（54.39%），女26例（45.61%），男女比例1:0.839；年齡39～82歲，平均58.77歲；發(fā)生部位：胃20例（35.09%）,小腸19例（33.33%），十二指腸10例（17.54%），結(jié)腸5例（8.78%），腹膜3例（5.26%），瘤體直徑≤5cm者30例，＞5cm者27例；主要臨床癥狀：腹痛、腹脹，消化道出血，腹塊，腸梗阻等，全組均無惡病質(zhì)表現(xiàn)。見表1。
病理學(xué)特征：大體標(biāo)本上，病灶表現(xiàn)為黏膜下、壁內(nèi)和漿膜下小結(jié)節(jié)，部分表現(xiàn)為潰瘍，稍大的腫瘤突出于腔內(nèi)，20%～30%出現(xiàn)潰瘍，切面質(zhì)地從稍硬至變軟，伴出血時(shí)中心呈褐色，其中5例腫塊伴有出血性壞死和囊性改變；組織學(xué)上，由梭形細(xì)胞和上皮樣細(xì)胞兩種腫瘤細(xì)胞主要形態(tài)，梭形瘤細(xì)胞呈交叉囊狀、柵欄狀、旋渦狀或假菊形團(tuán)樣排列，上皮樣瘤細(xì)胞呈彌漫片狀、小巢狀排列。
免疫組織化學(xué)結(jié)果：本組57例中CD117陽性表達(dá)56例（98.25%），CD34陽性表達(dá)45例（78.95%）,SMA陽性表達(dá)（35.09%），Desmin陽性表達(dá)（1.75%），見表2。
生物學(xué)分級標(biāo)準(zhǔn)：GIST的生物學(xué)行為分級按2008年改良的NIH危險(xiǎn)度評估，見表3。
討 論
1983年Mazur和Clark受首先命名胃腸道間質(zhì)瘤（GIST）并描述了這是一組位于胃腸道和腸系膜上具有明確病理和免疫組化特征的胃腸道肉瘤［1］，當(dāng)時(shí)認(rèn)為此是一種少見腫瘤，但近年來由于研究的進(jìn)一步深入，及免疫組化、基因檢測等技術(shù)的應(yīng)用，發(fā)病率有增加的趨勢，據(jù)報(bào)道GIST占消化道惡性腫瘤的2.2%,根據(jù)目前已發(fā)現(xiàn)的GIST相關(guān)基因改變可將腫瘤分為3類：c-kit突變型（80%～85%），PDGFRA突變型（5%～10%），野生型GIST（10%）。目前公認(rèn)胃腸道間質(zhì)瘤是胃腸道中最常見的間葉源性腫瘤。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)展，對GIST的認(rèn)識(shí)不斷更新，特別是在腫瘤的組織起源、分子遺傳學(xué)的發(fā)病機(jī)制及治療等方面，早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期手術(shù)治療可以提高GIST的治愈率。但至今GIST的手術(shù)療效和術(shù)后易復(fù)發(fā)等仍是困床的難題［2,3］。
本組經(jīng)免疫組化檢測顯示CD117和CD34陽性率較高，SMA、Desmin的陽性率均較低，因此，可將CD117和CD34陽性作為診斷GIST的標(biāo)志。但是許多GIST有明顯的臨床特征，但不是所有的GIST均CD117（+）,反之，也不是CD117（+）的腫瘤都是GIST。Miettine等［4］已建議，將GIST定義為胃腸道除外平滑肌腫瘤和神經(jīng)鞘瘤以及神經(jīng)纖維瘤的富于細(xì)胞且表達(dá)CD117的梭形、上皮樣或多形性的間葉源性腫瘤。所以，免疫組織化學(xué)染色在鑒別胃腸道間質(zhì)瘤中具有重要意義。
早期認(rèn)為，GIST分為良性和惡性兩種，但現(xiàn)在人們認(rèn)所有的GIST都是有一定的惡性潛能。這類腫瘤無絕對良性，目前比較公認(rèn)的是：腫瘤大小、核分裂像計(jì)數(shù)及原發(fā)部位，是GIST最重要的預(yù)后參考指標(biāo)。目前對GIST的治療以手術(shù)加靶向藥物治療為主，約83%的患者可以進(jìn)行根治性切除，但術(shù)后易發(fā)生復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移，5年生存率45%～70%［5］。伊馬替尼這種新型分子靶向治療藥物的的出現(xiàn)徹底改變了胃腸道間質(zhì)瘤的治療模式，其不僅反應(yīng)輕微，而且可以用于術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的胃腸道間質(zhì)瘤的治療。ESMO指南建議。在開始新輔助治療前，推薦做腫瘤活檢并行基因突變檢測。以早期篩選潛在甲磺酸伊馬替尼耐藥的人群［6］。伊馬替尼的出現(xiàn)徹底改變了胃腸道間質(zhì)瘤的治療模式。
參考文獻(xiàn)
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表1 腫瘤生物學(xué)行為與發(fā)生部位的關(guān)系
【關(guān)鍵詞】抗原修復(fù)；免疫組化
【中圖分類號】R392 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號】1004-7484（2012）12-0294-01
在病理診斷和科研中，免疫組織化學(xué)越來越為人們認(rèn)識(shí)和接受，應(yīng)用也越來越廣泛。它能提供抗原特異性表達(dá)和準(zhǔn)確定位，有助于一些疑難病理診斷問題的解決。但目前所進(jìn)行的常規(guī)石蠟切片標(biāo)本均用甲醛固定，使抗原性物質(zhì)或由于形成醛、羧甲鍵等原因而被封閉了部分抗原決定簇，或由于蛋白之間發(fā)生交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽，從而影響免疫組織化學(xué)結(jié)果，為解決這些問題需要做抗原修復(fù)[1]。目前，基層醫(yī)院病理科常用的抗原修復(fù)方法有兩種：高壓鍋修復(fù)和微波爐修復(fù)。我們選擇了15種常用抗體用高壓鍋、微波爐兩種修復(fù)方法進(jìn)行免疫組化試驗(yàn)，現(xiàn)將結(jié)果總結(jié)如下。
1 材料與方法
1.1儀器設(shè)備
OLYMPUS CX―41顯微鏡、市售家用微波爐、高壓鍋、電磁爐。
1.2 試劑：15種抗體、即用型二步法（非生物素）檢測試劑盒、DAB顯色劑、PBS磷酸鹽緩沖液（0.01M PH7.2―7.4）、檸檬酸鹽緩沖液（0.01M PH6.0）均購自中杉金橋生物技術(shù)有限公司。
1.3 組織材料：病理組織來自我院病理科，經(jīng)10%中爾馬林固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，厚約4μm 。
1.4 高壓鍋法：15張切片脫蠟、水洗后置于0.01mmol檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）中，加熱至噴汽，開始計(jì)時(shí)，2.5分鐘后，離開熱源，自然冷卻。PBS沖洗2次，每次約3分鐘。后按試劑盒操作步驟進(jìn)行。
1.5 微波爐法：15張切片脫蠟、水洗后置于盛有0.01mmol檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）的耐熱容器中加熱至沸騰（98 -100℃），持續(xù)10分鐘。自然冷卻， PBS沖洗2次，每次約3分鐘。后按試劑盒操作步驟進(jìn)行。
2 結(jié)果
光鏡下，細(xì)胞質(zhì)（細(xì)胞核）內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，陽性細(xì)胞數(shù)占1%-10%為（+），11%-50%為（ ++），51% -80%為（ +++） [2]。從表中可以看出：15種抗體中，有10種抗體顯色結(jié)果相同，2種微波修復(fù)比高壓修復(fù)染色效果提高了一個(gè)（+），3種高壓修復(fù)比微波修復(fù)染色效果提高了一個(gè)（+）。
3 討論
用微波進(jìn)行抗原修復(fù)，時(shí)間短時(shí)染色較淺，時(shí)間長時(shí)背景深[2]。因此，抗原修復(fù)時(shí)間的掌握很重要。在本次試驗(yàn)中，部分膜、漿標(biāo)記的抗原，微波修復(fù)要比高壓修復(fù)顯色效果滿意；高壓處理檢測細(xì)胞核抗原，較為滿意。總之，在日常工作中，利用本科的儀器設(shè)備和技術(shù)條件，選擇合適的抗原修復(fù)技術(shù)能夠改善免疫組化染色結(jié)果，我們要根據(jù)抗原的不同表達(dá)部位，選擇合適的抗原修復(fù)方法，提高免疫組化染色的效果，使反應(yīng)結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠。
參考文獻(xiàn)：
[關(guān)鍵詞] 喉癌;Lumican;組織芯片;免疫組化
[中圖分類號] R76[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B[文章編號] 1673-7210(2010)04(b)-134-01
隨著各項(xiàng)技術(shù)的發(fā)展,人們的研究逐漸深入,組織芯片技術(shù)的發(fā)展,為喉癌的研究提供了新的途徑。蛋白聚糖(proteoglycans, PGs)作為細(xì)胞外基質(zhì)的重要組成部分能夠調(diào)節(jié)癌細(xì)胞的生長和侵襲,在原發(fā)灶的生長或轉(zhuǎn)移灶的形成期間,細(xì)胞外基質(zhì)會(huì)通過生物合成和降解形成特征性的重塑。小的富含亮氨酸蛋白聚糖(small leucine rich proteoglycans, SLRP)不僅可以調(diào)節(jié)細(xì)胞外水平衡、影響組織生物力學(xué),同時(shí)在細(xì)胞遷移、增殖、腫瘤生長、黏附和移行,以及調(diào)節(jié)生長因子的活性等方面也發(fā)揮著重要作用。本研究應(yīng)用組織芯片技術(shù)及免疫組化方法檢測分析,旨在探討Lumican在喉癌組織中的表達(dá)與組織學(xué)及臨床所見之間的關(guān)系,現(xiàn)將相關(guān)資料總結(jié)報(bào)道如下:
1 材料與方法
1.1 研究對象
本研究收集2007 年1 月～2009年10月我院喉癌手術(shù)切除標(biāo)本,包括喉癌組織以及癌旁正常組織65對,將其按病理分型統(tǒng)計(jì):低分化鱗癌29例,高分化鱗癌36例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性25例,陰性40例。男45例,女20例,年齡42～75歲,平均65歲。聲門型37例,聲門上型28例。因芯片脫落及殘缺無法分析的點(diǎn)共3對。
1.2 試劑
羊抗人Lumican多克隆抗體;SP-9003免疫組化試劑盒;黏片劑APES和DAB顯色試劑盒;0.01MPBS緩沖液(pH值為7.2～7.4),0.01 ml枸櫞酸鹽緩沖液(pH值為6.0)。
1.3 實(shí)驗(yàn)方法
HE染色包括準(zhǔn)備、脫蠟、染色、脫水透明、中性樹脂封片。
免疫組化的準(zhǔn)備工作及脫蠟步驟同HE染色,然后加3% H2O2作用10 min,抗原恢復(fù),正常山羊血清封閉室溫15 min,滴加一抗,PBS沖洗,滴加相應(yīng)的二抗, PBS沖洗,滴加辣根過氧化物酶(HRP),再進(jìn)行PBS沖洗,DAB顯色,蘇木素復(fù)染,梯度酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片同HE染色。
1.4結(jié)果判定
免疫組化結(jié)果判定:在胞膜或細(xì)胞漿著色呈棕黃色顆粒大于30%為強(qiáng)陽性表達(dá)(++),5%～30%為陽性表達(dá)(+),
1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
計(jì)數(shù)資料采用秩和檢驗(yàn),P
2 結(jié)果
在62對組織芯片中,癌細(xì)胞組中有46例不同程度Lumican蛋白的表達(dá)(強(qiáng)陽性20例,陽性26例),占74.19%,而癌旁正常組織中僅有17例有陽性表達(dá),占27.42%,其余45例無表達(dá),在喉癌組織中Lumican的表達(dá)明顯高于Lumican在癌旁正常組織中的表達(dá)(P
3 討論
338個(gè)氨基酸組成了Lumican蛋白,12號染色體的12q21.3-q22區(qū)為其基因定位區(qū)[1]。其中亮氨酸高度重復(fù)的一個(gè)中央?yún)^(qū)構(gòu)成了信號肽的核心蛋白,兩側(cè)二硫腱的分子中心區(qū)可進(jìn)行N-糖基化鏈鎖[2]。
Seya等[3]對伴有早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的158例結(jié)直腸癌患者進(jìn)行免疫組化方法的研究發(fā)現(xiàn),高表達(dá)Lumican患者生存率顯著降低,并且高表達(dá)的Lumican與癌腫浸潤深度和淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移范圍相關(guān),與性別、年齡、發(fā)病部位、是否侵及淋巴管及靜脈及組織分型無關(guān)。
本實(shí)驗(yàn)對62對組織芯片研究顯示,癌細(xì)胞組中有46例不同程度Lumican蛋白的表達(dá),在與癌細(xì)胞毗鄰的成纖維細(xì)胞中的表達(dá)較弱,而僅17例癌旁正常組織中有Lumican的弱表達(dá)。部分癌旁正常黏膜上皮組織中有Lumican的弱表達(dá)。研究結(jié)果與Lu等[5]的不完全一致,考慮可能與下列因素有關(guān):①是否為大樣本研究。②在免疫組化過程中有無進(jìn)行抗原修復(fù)。③實(shí)驗(yàn)所用抗體具有不同的靈敏性[6]。
本研究發(fā)現(xiàn)在喉癌組織中Lumican的表達(dá)強(qiáng)度顯著高于癌旁正常黏膜組織(P
通過本次實(shí)驗(yàn),證實(shí)Lumican在喉癌的發(fā)生發(fā)展過程中起到一定作用,闡明Lumican與組織學(xué)及臨床所見的關(guān)聯(lián),將有利于對疾病進(jìn)展及愈后的評估與判斷。
[參考文獻(xiàn)]
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【關(guān)鍵詞】 胃腸間質(zhì)瘤；免疫組化；診斷
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作者單位：466000 河南省周口市中心醫(yī)院病理科 胃腸間質(zhì)瘤(gastrointestinal stromal tumors，GIST)是胃腸道常見的間葉源性腫瘤，可見于胃、小腸、結(jié)直腸、食管，其中以胃最為常見。此腫瘤好發(fā)于中老年人，男性稍多于女性。近年來隨著對胃腸間質(zhì)瘤認(rèn)識(shí)的加深，免疫組化的開展，現(xiàn)對此腫瘤的診斷有了進(jìn)一步的提高，對我院近幾年診斷的胃腸間質(zhì)瘤病例進(jìn)行回顧性分析，現(xiàn)報(bào)告如下。
1 資料與方法
11 一般資料 2006年10月至2011年10月我院胃腸道間葉腫瘤32例。年齡31~76歲，中位年齡543歲，其中男19例(59%)，女13例(41%)。
12 方法 所有標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定24 h，石蠟包埋切片，分別進(jìn)行HE和免疫組化染色。
13 組織學(xué)良惡性判斷標(biāo)準(zhǔn) 目前胃腸間質(zhì)瘤的良惡性可分為3類［1］。良性：腫瘤直徑5 cm，細(xì)胞排列密集，細(xì)胞無多形性或輕度呈多形性，無或者有少量壞死，核分裂像5 cm或彌漫多個(gè)，細(xì)胞排列密集并見細(xì)胞多形性，壞死多見，核分裂像>5//50 hPF。
2 結(jié)果
21 腫瘤大體形態(tài)特征 腫瘤大小不等，邊界清楚，無包膜，多呈圓形、卵圓形或分葉狀，直徑30~100 cm，多為單發(fā)。腫瘤多位于胃腸肌壁間，漿膜下層或突入管腔，向腔內(nèi)生長呈息肉樣腫塊常伴潰瘍形成，向漿膜下生長者形成漿膜下腫塊。腫瘤切面呈灰白色，編織狀，質(zhì)地中等。
22 組織學(xué)特點(diǎn) GIST的組織學(xué)呈多樣性，大部分病例腫瘤主要由長梭形細(xì)胞組成，呈編織狀排列，核略呈梭形，有時(shí)出現(xiàn)柵狀排列；還有一些病例由梭形細(xì)胞和上皮樣細(xì)胞按不同比例組成，上皮樣細(xì)胞體積較大，胞漿寬大，空泡狀，核圓形或卵圓形。
23 免疫組化表型特征 近年來的研究表明［2］,胃腸間質(zhì)瘤可能來源于Cajal細(xì)胞，免疫組織化學(xué)檢查表明CD117呈陽性，CD117是一種干細(xì)胞因子的跨膜受體，約90%以上的GIST表達(dá)此類抗體。CD34也有70%~80%的陽性率，SMA常常局灶表達(dá)，陽性率為20%~30%，S100和Desmin呈陰性。我院的此32例GIST病例中有30例(93%)CD117呈陽性，26例(81%)CD34呈陽性，與上述研究結(jié)果一致。
3 討論
GIST是一類成分復(fù)雜的間葉性腫瘤［3］，具有不成熟的梭形和(或)上皮樣細(xì)胞增生。此類腫瘤曾被認(rèn)為是不典型的平滑肌瘤或平滑肌肉瘤。近年來的研究認(rèn)為它是一類獨(dú)立起源于胃腸道原始間質(zhì)干細(xì)胞并呈非定向分化的消化道腫瘤。
GIST多見于成人，好發(fā)于40歲以上，年青人少見，男性稍多于女性。胃腸間質(zhì)瘤發(fā)生于胃者最為多見，小腸次之，食管和大腸少見。臨床常見癥狀表現(xiàn)為隱約的腹痛或腹部不適，上消化道出血，梗阻，腹部包塊等。GIST由不同數(shù)量的梭形細(xì)胞和上皮樣細(xì)胞組成。梭形細(xì)胞胞質(zhì)紅染，核呈梭形，染色質(zhì)稀疏；上皮樣細(xì)胞體積較大，形態(tài)不一，胞漿豐富可呈空泡樣。
GIST組織細(xì)胞學(xué)形態(tài)方面變化比較大，尤其是在同一種腫瘤之內(nèi)可見梭形細(xì)胞到上皮樣細(xì)胞等不同的細(xì)胞學(xué)形態(tài)，在光鏡下很難進(jìn)行區(qū)分，所以免疫組化在GIST的診斷中作用很大。近年來的免疫組化結(jié)果表明［4］，CD117和CD34陽性率較高，且兩者的共同陽性率也可達(dá)到65%，部分病例SMA和S100呈局灶陽性，Desmin多為陰性。目前的臨床病理工作中可以把CD117和CD34陽性作為GIST的診斷標(biāo)志。
影響GIST預(yù)后的因素有腫瘤的部位、瘤體的浸潤程度、粘連程度、核分裂像及KIT基因突變等［5］。腫瘤直徑>5 cm或10 cm者、腫瘤破裂者、核分裂像>5/50 hP者顯示預(yù)后差。
參 考 文 獻(xiàn)
［1］ 劉彤華主編診斷病理學(xué).第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2006,57.
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［3］ 彭杰青.胃間葉組織腫瘤，外科病理學(xué).武漢，湖北科學(xué)技術(shù)出版社，1999:110.
【摘要】
目的 探討不同抗原修復(fù)法對DA.1U大鼠肝組織內(nèi)核受體檢測結(jié)果的影響。方法 應(yīng)用微波修復(fù)法、高壓修復(fù)法、酶修復(fù)法和高壓加酶修復(fù)法對DA.1U大鼠肝組織切片進(jìn)行修復(fù)，然后進(jìn)行免疫組化染色。結(jié)果 DA.1U大鼠肝組織內(nèi)核受體LXRα、LXRβ、PPARγ和FXR經(jīng)高壓抗原修復(fù)后，染色陽性強(qiáng)度較其他修復(fù)方法明顯增強(qiáng)，而且定位較佳。結(jié)論 在核受體免疫組化染色中高壓抗原修復(fù)法染色效果優(yōu)于其他抗原修復(fù)法。
【關(guān)鍵詞】 核受體；免疫組織化學(xué)；抗原修復(fù)
ABSTRACT: Objective To explore the effects of different methods of antigen retrieval on the results of immunohistochemical staining of nuclear receptors. Methods Antigens were retrieved by using microwave oven， autoclave， enzyme and autoclave plus enzyme， respectively， in liver sections from DA.1U rats， followed by immunohistochemical staining. Results After antigen retrieval with autoclave， the positive staining intensity of nuclear receptors LXRα， LXRβ， PPARγ and FXR in the liver sections from DA.1U rats was enhanced obviously， and the location of nuclear receptors was better by using this method than the others. Conclusion In the immunohistochemical staining of nuclear receptors， using autoclave to retrieve antigens is the best method.
KEY WORDS: nuclear receptor; immunohistochemical staining; antigen retrieval
核受體在生物體內(nèi)廣泛分布，與配體結(jié)合后活化，調(diào)控基因的表達(dá)，在機(jī)體生長發(fā)育、新陳代謝等生理過程中發(fā)揮重要作用。核受體LXRα、LXRβ、PPARγ和FXR在糖、脂代謝調(diào)控中起重要的作用，參與2型糖尿病的發(fā)生發(fā)展。
免疫組織化學(xué)染色是根據(jù)抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，用標(biāo)記的特異抗體對組織細(xì)胞內(nèi)抗原進(jìn)行定位、定性及定量研究。甲醛溶液固定導(dǎo)致許多抗原決定簇被掩蓋，不能與抗體很好結(jié)合。核受于核內(nèi)，鏡下觀察染色結(jié)果時(shí)，若隱若現(xiàn)，抗原表達(dá)不均勻。為了解決該問題，使抗原決定簇能很好的暴露出來，我們采取了微波修復(fù)法、高壓熱修復(fù)法和酶修復(fù)法等。抗原修復(fù)方法對DA.1U大鼠肝組織切片進(jìn)行修復(fù)；比較分析不同抗原修復(fù)法對DA.1U大鼠肝組織內(nèi)核受體免疫組化染色結(jié)果的影響。
1 材料與方法
1.1 儀器與試劑
Olympus DP71圖像分析儀。LXRα、LXRβ、PPARγ和FXR抗體購自Abcam公司；免疫組化(SP法)試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司。
1.2 組織材料
病理切片來自DA.1U大鼠糖尿病模型肝組織，經(jīng)40g/L多聚甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，5μm厚，每個(gè)蠟塊各切5片。
1.3 抗原修復(fù)
組織切片常規(guī)脫蠟至水，3%(體積分?jǐn)?shù))H2O2滅活內(nèi)源性過氧化物酶，0.02mol/L PBS沖洗后抗原修復(fù)。
1.3.1 微波修復(fù)法
將切片插入塑料切片架，放置于盛有150mL 0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液(pH 6.0)的容器中，置微波爐內(nèi)加熱1min 40s，使緩沖液溫度保持于82℃以上。取出切片架，室溫放置3min，然后將切片架置于涼水中冷卻15min。
1.3.2 高壓修復(fù)法
將切片插入金屬架，放置于盛有400mL 0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液(pH 6.0)的燒杯中，將燒杯放入高壓鍋內(nèi)，蓋鍋、壓閥。待煮沸噴氣后，計(jì)時(shí)2～3min，然后將壓力鍋端離電爐，自然冷卻20min后取出切片。
1.3.3 酶修復(fù)法
將復(fù)合消化液滴加于切片組織上并完全覆蓋，將切片放入濕盒內(nèi)，37℃溫箱中消化10min。
1.3.4 高壓加酶修復(fù)法
按上述方法高壓修復(fù)后取出切片，蒸餾水沖洗，PBS洗2min×3次后，將復(fù)合消化酶滴加于切片組織上并完全覆蓋，將切片放入濕盒內(nèi)，37℃溫箱中消化3min。
1.4 免疫組織化學(xué)染色
經(jīng)上述步驟處理后的切片均用PBS沖洗3次，各5min；滴加正常動(dòng)物血清封閉液，室溫放置20min，甩去多余液體；每張切片滴加Ⅰ抗30μL，4℃過夜，次日37℃復(fù)溫45min，PBS沖洗2min×3次；每張切片滴加生物素標(biāo)記Ⅱ抗30μL，37℃ 20min，PBS沖洗5min×3次；滴加鏈酶親和素過氧化物酶復(fù)合物，37℃ 20min，PBS沖洗5min×3次；DABH2O2顯色，在顯微鏡下控制染色程度，自來水沖洗10min；蘇木素復(fù)染。以PBS替代Ⅰ抗作為陰性對照。
2 結(jié) 果
核受體LXRα、LXRβ、PPARγ和FXR均表達(dá)于核內(nèi)，以核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕色顆粒為陽性。對4種核受體抗原采用4種抗原修復(fù)方法，以PPARγ為例說明(圖1)：①陰性對照，未見特異性免疫染色，肝細(xì)胞核均被蘇木素染為藍(lán)色；②不修復(fù)，可見肝細(xì)胞核均為藍(lán)色，未見棕色顆粒；③微波修復(fù)，在少數(shù)肝細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕色顆粒，核仍為藍(lán)色，定位不準(zhǔn)確；④酶修復(fù)，采用復(fù)合消化液修復(fù)肝組織后，細(xì)胞核未被染色；⑤高壓修復(fù)，該法修復(fù)肝組織切片后，染色強(qiáng)度明顯強(qiáng)于其他修復(fù)法，而且背景清晰；⑥高壓加酶修復(fù)，通過該法修復(fù)后，肝組織染色強(qiáng)度強(qiáng)，但是組織碎裂，且背景深。LXRβ免疫組化染色結(jié)果見圖2。
3 討 論
甲醛固定時(shí)，蛋白質(zhì)的自由氨基與醛基形成羧甲基，或蛋白質(zhì)氨基酸殘基在分子內(nèi)或分子間形成醛鍵，使得蛋白質(zhì)抗原決定簇部分被封閉，無法表達(dá)出來，影響免疫組化的結(jié)果[1]。抗原決定簇是否充分暴露，是決定免疫組化結(jié)果的關(guān)鍵因素。為了更好地暴露抗原，目前世界公認(rèn)的方法就是進(jìn)行抗原修復(fù)。抗原修復(fù)方法主要包括熱修復(fù)和酶修復(fù)。高溫抗原修復(fù)方法機(jī)理復(fù)雜，高壓可使交聯(lián)斷裂或折疊的肽鏈解開，從而暴露抗原決定簇[2]；微波場內(nèi)離子或極性分子直接碰撞，使扭曲、折疊的異常結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常[3]。熱修復(fù)法比較穩(wěn)定，因高壓修復(fù)法避免了外界環(huán)境對溫度的影響，在染色強(qiáng)度和重復(fù)性方面優(yōu)于微波修復(fù)法[4]。酶修復(fù)法則是通過溶解抗原表面的變性蛋白使之暴露，但是酶消化時(shí)間因組織不同而異，不易控制，結(jié)果不穩(wěn)定。在抗原修復(fù)過程中仍需注意：①抗原修復(fù)液的選擇：在修復(fù)過程中應(yīng)加入足夠的修復(fù)液防止干片，一般選用檸檬酸鹽緩沖液(pH=6.0)，它適用于大多數(shù)抗原，修復(fù)效果佳。②抗原修復(fù)溫度及時(shí)間的選擇：有研究表明，溫度達(dá)到92℃以上才能使甲醛固定的蛋白抗原修復(fù)，一般應(yīng)保持在92℃～98℃。有效溫度持續(xù)時(shí)間長短應(yīng)因抗原修復(fù)方法不同而不同，一般微波修復(fù)法溫度不好控制，抗原修復(fù)液易沸騰，容易脫片，應(yīng)嚴(yán)密觀察；高壓修復(fù)時(shí)，盛有抗原修復(fù)液的燒杯隔水放在高壓鍋內(nèi)，壓閥噴氣2～4min，溫度容易控制，效果佳。③抗原修復(fù)液應(yīng)自然冷卻：抗原修復(fù)持續(xù)高溫過后應(yīng)自然降溫，慢慢恢復(fù)蛋白原構(gòu)型。抗原修復(fù)作用廣泛，不僅可以用于免疫組化，尚能用于末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記法(Tunel)、原位雜交(ISH)和熒光原位雜交(FISH)的檢測，以及樹脂包埋的半薄和超薄切片的免疫組化檢測和非交聯(lián)劑固定的活細(xì)胞和細(xì)胞涂片中抗原的檢測等領(lǐng)域。
本試驗(yàn)嘗試了4種抗原修復(fù)方法，結(jié)果表明在核受體免疫組化中，高壓抗原修復(fù)法結(jié)果穩(wěn)定，優(yōu)于酶修復(fù)法及微波修復(fù)法，染色較強(qiáng)，定位準(zhǔn)確，背景清晰。所以，應(yīng)當(dāng)根據(jù)不同的抗原特征，合理選擇抗原修復(fù)方法。
參考文獻(xiàn)
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[2]NORTON A， JORDAN S， YEOMANS P. Brief， hightemperature heat denaturation (pressure cooking): a simple and effective method of antigen retrieval for routinely processed tissues [J]. J Pathol， 1994，173(4):371379.
1 集安市醫(yī)院放射科 吉林省集安市 134200 2 吉林省腫瘤醫(yī)院放射科 吉林省長春市 130021【摘 要】胃腸道外間質(zhì)瘤(EGIST) 非常少見, 約占胃腸道間質(zhì)瘤的5%-10%，而肝臟的原發(fā)性惡性間質(zhì)瘤更是罕見報(bào)道。我們收治1 例肝左葉惡性間質(zhì)瘤, 現(xiàn)結(jié)合文獻(xiàn)復(fù)習(xí)報(bào)道如下。
關(guān)鍵詞 肝臟巨大間質(zhì)瘤；1 例；報(bào)道
1 臨床資料
女性患者，48 歲， 因上腹部脹痛1年， 加重1 周就診。查體上腹部可觸及明顯包塊，質(zhì)硬、固定。CT 檢查肝左葉17.6×12.6×22.0cm 腫物，增強(qiáng)掃描腫物明顯強(qiáng)化，壞死區(qū)未見強(qiáng)化，腫物由肝動(dòng)脈供血且血運(yùn)豐富。（圖1-3）
手術(shù)及病理所見：術(shù)中診斷肝左葉巨大腫瘤，行肝左葉切除術(shù)。腫物質(zhì)地較韌，活動(dòng)度差，表面血管豐富，腫物剖開里面為液化壞死物。病理結(jié)果為梭形細(xì)胞伴出血、梗死。免疫組化結(jié)果：CD117（+）、CD34（+）、SMA（-）Ki-67（3%+）Dog-1（+）S-100（-）Desmin（-）， 結(jié)合免疫組化結(jié)果支持間質(zhì)瘤( 高度惡性潛能)。（圖4）。
2 討論
2.1 EGIST 的病理特點(diǎn)
EGIST 是指組織形態(tài)、免疫表型等與GIST 相似, 但起源于腹腔或腹膜后的軟組織, 且與腸壁或內(nèi)臟漿膜面無關(guān)的一類腫瘤[1]。c-kit 基因突變和Kit 蛋白CD117 表達(dá)為其生物學(xué)特征，腫瘤免疫組化CD117和CD34 呈陽性表達(dá)， 是確診GIST 和EGIST 最可靠和最有診斷價(jià)值的依據(jù)。
2.2 EGIST 臨床常見癥狀
腹部不適和腹部疼痛、腫塊壓迫癥狀等，少有嘔血及便血等，臨床中本病并無特異性，本例發(fā)生于肝臟的間質(zhì)瘤僅表現(xiàn)為上腹部脹痛，所以臨床初診發(fā)生誤診幾率較大。
2.3 影像診斷
當(dāng)前影像檢查手段主要有CT 及MRI等， 根據(jù)Kim 及Lee2006 年的研究，EGIST表現(xiàn)為境界清楚的較大分葉狀腫塊，病灶中心含大范圍低密度區(qū)，但其內(nèi)無氣體存在，增強(qiáng)后病灶中可見粗大血管影是其特征表現(xiàn)。近幾年MR 新技術(shù)的開展，對EGIST 的定性及定位診斷更加準(zhǔn)確，對腫瘤內(nèi)的成分及良惡程度判斷優(yōu)于CT 及其他影像學(xué)檢查。
2.4 鑒別診斷
對于本例應(yīng)與肝癌及肝血管平滑肌瘤鑒別，肝癌增強(qiáng)呈快進(jìn)快出征象，而血管平滑肌瘤影像上與間質(zhì)瘤很難鑒別，病理及免疫組化有助于鑒別。EGIST 術(shù)前盡可能與小腸間質(zhì)瘤相區(qū)分，以便制定更為合理的手術(shù)方案。EGIST 很少出現(xiàn)GIST 伴發(fā)的消化道出血和梗阻的臨床癥狀，CT 更多表現(xiàn)為體積較大，邊緣多見分葉，內(nèi)部更少見、甚至不見氣液面，鄰近腸管多受推擠移位而無侵犯。腹膜后間質(zhì)瘤，有特征性的定位征象，較易與小腸間質(zhì)瘤區(qū)別。EGIST 表現(xiàn)難以與發(fā)生于腹膜后間隙、腸系膜和網(wǎng)膜肉瘤相區(qū)分, 仍需依賴于病理和免疫組化檢查。但在腹膜后、網(wǎng)膜或腸系膜出現(xiàn)類似于惡性GIST 表現(xiàn)腫塊時(shí)，應(yīng)考慮到該病可能。
【關(guān)鍵詞】乳腺；粗針穿刺活檢；病理診斷
隨著乳腺影像技術(shù)的發(fā)展和乳腺癌治療的革新，乳腺粗針穿刺活檢（needle core biopsy，NCB）在乳腺疾病診治中的作用越來越重要[1-4]。目前，病理科接受到的乳腺粗針穿刺標(biāo)本逐漸增加，病理醫(yī)師需要擔(dān)負(fù)起在相對有限的材料基礎(chǔ)上給臨床提供全面而簡明的報(bào)告，同時(shí)，病理醫(yī)師如經(jīng)驗(yàn)不足易給臨床發(fā)出錯(cuò)誤的病理信息[1，4]。本文總結(jié)了近2年我院乳腺NCB病例，對于診斷中的問題和對策進(jìn)行初步探討，以便降低風(fēng)險(xiǎn)和避免錯(cuò)誤。
1材料與方法
1.1材料 收集我院病理科2009-1-2010-12間93例40-60歲乳腺NCB材料，包括原始取材記錄、HE切片、免疫組化染色切片和原病理診斷。其中有后期腫塊切除手術(shù)病理資料27例。
1.2方法 取每例送檢組織2～6條、長度0.3～2.2cm，直徑均為0.1cm。常規(guī)中性甲醛固定，每條標(biāo)本并列包埋，切片厚4?m。使用Qlgmpus BX51顯微鏡觀察（高倍視野面積為0.24mm2），按WHO（2003）乳腺腫瘤分類進(jìn)行病變分類和分型。
1.3免疫組化 良、惡性病變鑒別一般選用SMA、p63、CD10和ER抗體；HE形態(tài)為浸潤性癌臨床需要進(jìn)行新輔助化療治療方案者選用ER、PR、c-erbB-2、p53、EGFR和Ki-67。
1.4結(jié)果判定 陽性物質(zhì)呈棕黃色。SMA、CD10、CK5/6和34?E12胞質(zhì)陽性；p63、ER、PR、p53和Ki-67為胞核陽性；cerbB-2、EGFR和E-cadherin為胞膜陽性；p120導(dǎo)管癌為胞膜陽性，小葉癌為胞質(zhì)陽性。
2結(jié)果
2.1乳腺疾病檢出率 93例中，良性61例，包括普通型導(dǎo)管增生9例，腺病23例，纖維瘤11例，狀瘤5例，非典型導(dǎo)管增生10例，炎癥2例，脂肪壞死1例。乳腺癌30例，其中非特殊類型浸潤性導(dǎo)管癌24例，浸潤性小葉癌3例，神經(jīng)內(nèi)分泌癌1例，導(dǎo)管原位癌2例。1例良、惡性未定；1例未見乳腺導(dǎo)管和小葉結(jié)構(gòu)。
2.2需用免疫組化鑒別診斷比率 見表1。其中狀瘤、非典型增生、小管癌、神經(jīng)內(nèi)分泌癌和導(dǎo)管原位癌均需要結(jié)合HE和免疫表型診斷；只有黏液癌通過形態(tài)學(xué)即可診斷。
UDH，普通型導(dǎo)管增生；FAT，纖維腺瘤；IDC（NOS），浸潤導(dǎo)管癌（非特殊類型）；ILC，浸潤性小葉癌；DIC，導(dǎo)管原位癌。
3討論
本組大部分乳腺病變通過超聲引導(dǎo)行NCB能夠明確診斷。尤其是浸潤性導(dǎo)管癌，臨床如果獲得準(zhǔn)確的病變部位標(biāo)本且病變組織足夠（一般3條），就能為臨床提供較為準(zhǔn)確的病理信息（包括組織類型和分級，預(yù)示預(yù)后和治療方案的免疫組化染色結(jié)果）。但是，仍然有一些病變NCB病理觀察困難，存在一些診斷總是和陷阱[1]。
3.1良性硬化性病變與浸潤性癌 乳腺良性硬化性病變主要為硬化性腺病和放射性瘢痕，在切除標(biāo)本中與浸潤性癌鑒別有難度，但通過低倍鏡觀察是否存在小葉基本結(jié)構(gòu)，一般硬化性腺病還是能夠識(shí)別的；放射性瘢痕因低倍鏡下可見到腺管呈放射性排列及中央有纖維瘢區(qū)，也能夠首先考慮到。但在NCB中，常常見不到硬化性腺病所擴(kuò)大的完整小葉和放射性瘢痕病變?nèi)玻又M織有擠壓，易造成過診斷。因此，對于疑為浸潤性癌，但細(xì)胞核分級低、呈腺泡和管狀的病變應(yīng)該用肌上皮標(biāo)記物進(jìn)行免疫組化鑒別診斷，如腺管存在肌上皮層則為良性硬化性病變。
3.2浸潤性癌 乳腺癌在NCB時(shí)需要確定是否有浸潤和分型，本組標(biāo)本大部分能確定，僅1例診斷導(dǎo)管內(nèi)癌者手術(shù)切除后為浸潤性導(dǎo)管癌。因此，在NCB診斷導(dǎo)管內(nèi)癌時(shí)應(yīng)告知臨床取材標(biāo)本局限，不能除外有浸潤的可能性。NCB組織易被擠壓，浸潤性癌的腺管常被擠壓呈條索狀，浸潤性導(dǎo)管癌和浸潤性小葉癌難以區(qū)分，此時(shí)需要做E-cadherin和p120進(jìn)行鑒別，前者導(dǎo)管癌陽性而小葉癌陰性；后都導(dǎo)管癌和小葉癌都可陽性，但導(dǎo)管癌陽性位于胞膜而小葉癌位于胞質(zhì)。建議診斷小葉癌時(shí)應(yīng)經(jīng)免疫組化證實(shí)。
3.3預(yù)示治療和預(yù)后的免疫標(biāo)記物染色 隨著臨床對乳腺癌新輔助化療和保乳手術(shù)治療的廣泛開展，臨床要求病理對NCB乳腺癌組織行與治療和預(yù)后相關(guān)的免疫標(biāo)記物檢測。通過本組觀察，我們認(rèn)為如有足夠的乳腺癌組織(組織微陣列所獲得的面積)就可以提供較準(zhǔn)確的免疫組化結(jié)果。
參考文獻(xiàn)
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[關(guān)鍵詞] 孤立性纖維性腫瘤； 診斷； 病理
[中圖分類號] R73 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A[文章編號] 1005-0515（2011）-01-178-01
下面本文通過對10例SFT進(jìn)行組織學(xué)觀察并結(jié)合免疫組化檢測SFT的形態(tài)學(xué)及診斷進(jìn)行探討。
1 材料與方法
收集懷化市第一人民醫(yī)院2007年10月至2010年9月外科手術(shù)切除的孤立性纖維性腫瘤病例10例標(biāo)本，男性7例，女性3例。標(biāo)本經(jīng)10%中爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，切片（4um）,HE染色，光鏡觀察。免疫組化染色應(yīng)用SP法，設(shè)陽性及陰性對照。抗體選用Vimentin,CD99，Bcl-2，CD34，S100，EMA，Ki67。所有抗體及試劑均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。
2 結(jié)果
2.1 臨床資料
10例SFT的發(fā)病年齡為38-66歲,平均50.2歲。其中發(fā)生于體表及腹膜后的為無痛漸增包塊，發(fā)生于膀胱者有尿頻尿急癥狀，發(fā)生于胸腔及肺者有咳嗽、咳痰，發(fā)生于鼻腔者有鼻塞，流涕癥狀。10例SFT發(fā)生于9 個(gè)部位，分別為腹膜后2 例，胸腔，肺，大腿、髂窩、腋窩、肩背部、鼻腔、膀胱各1 例。良性6例，不典型2 例，惡性2例。
2.2 病理檢查
2.2.1 有9例均完整切除，只有1例巨檢除鼻腔例外。大部分腫瘤為境界清楚的腫物，其中腫瘤最大者為16.5X13X8cm，最小者為1.1X1X0.9cm，大部分表面有包膜，切面結(jié)節(jié)狀、實(shí)性，灰白色,質(zhì)韌而富有彈性，3例有局灶出血及微囊性變，2例有粘液樣變。
2.2.2 鏡檢瘤組織共同的特征是組織結(jié)構(gòu)復(fù)雜、細(xì)胞形態(tài)多樣。瘤細(xì)胞呈梭形、短梭形及圓形，胞漿紅染，核仁不明顯，良性SFT的瘤細(xì)胞無異型，核分裂象不多見，平均0-2/10HPF，不典型SFT的瘤細(xì)胞輕度異型，核分裂2-4/10HPF，惡性SFT的瘤細(xì)胞異型明顯，核分裂4-10/10HPF，并有出血壞死。細(xì)胞稀疏區(qū)和密集區(qū)交替分布，薄壁血管較多，細(xì)胞間富有粗細(xì)不等瘢痕樣玻璃樣變性的膠原纖維。少見的組織形態(tài)包括：2例有血管外皮瘤樣結(jié)構(gòu)，2例富含血管，且血管壁增厚伴膠原纖維變性，1例瘤細(xì)胞呈較大的上皮樣細(xì)胞改變，伴有少數(shù)多核巨細(xì)胞,4例瘤細(xì)胞間有散在淋巴細(xì)胞浸潤。
2.2.3 免疫組化 Vimentin 陽性率100%,CD99 陽性率90%，Bcl-2 陽性率90%，CD34 陽性率70%，S100 0%（0/7），EMA 陽性率14.3%（1/7），Ki67陽性率2-40%。10例SFT的臨床病理特征及免疫組化表達(dá)情況見表1.
3 討論
3.1 起源與命名
孤立性纖維性腫瘤由(solitary fibrous tumor, SFT)由Klemperer和Rabin[1]于1931年首先在胸膜發(fā)現(xiàn)并命名,并認(rèn)為是間皮源性腫瘤。而今,隨著免疫組化和電鏡技術(shù)的發(fā)展, SFT被認(rèn)為起源于表達(dá)CD34抗原的樹突狀間質(zhì)細(xì)胞而非間皮細(xì)胞。
3.2 臨床特點(diǎn)
文獻(xiàn)報(bào)道發(fā)病年齡為9-85 歲，以中老年為多，女性稍多，本組平均年齡50.1 歲，以男性居多，男女之比為7：3。多數(shù)病例為緩慢生長的無痛性包塊，部分病例偶然發(fā)現(xiàn)，高杰等報(bào)道[2]35例中12例無任何臨床癥狀，本組10例有6例無臨床癥狀，特殊部位者可有相應(yīng)癥狀，如頭痛、眼球突出、尿潴留，膀胱刺激癥狀，鼻塞流涕等。
3.3 病理學(xué)特征
大體形態(tài)一般為單個(gè)卵圓形腫塊，界限清楚，部分病例有纖維性假包膜；也可多個(gè)腫瘤(20％)，腫塊直徑1-39cm，平均8.0cm，切面灰白色，質(zhì)韌而富有彈性，可伴有粘液樣變性、出血、壞死、囊性變。鏡下：組織結(jié)構(gòu)復(fù)雜、細(xì)胞形態(tài)多樣，大部分瘤細(xì)胞為梭形，特征性改變?yōu)榧?xì)胞稀疏區(qū)和密集區(qū)交替分布，薄壁血管較多，細(xì)胞間富有粗細(xì)不等的膠原纖維。少見的組織形態(tài)有瘤細(xì)胞呈雜亂無序、車輻狀、神經(jīng)纖維瘤樣、血管外皮細(xì)胞瘤樣等各種排列，可見石棉樣膠原纖維、星狀膠原纖維、血管壁增厚膠原纖維變性。根據(jù)腫瘤的組織學(xué)形態(tài)可將SFT分為3 級：良性SFT；不典型SFT：瘤組織含有不典型區(qū)域，細(xì)胞密度增加，核有異型性，核分裂象增多，但不>4/10HPF，可見小壞死灶；惡性SFT，診斷指征：腫瘤直徑>10cm；瘤細(xì)胞高度密集，異型性顯著，胞核呈多形性；核分裂象易>4/10HPF，大范圍的出血、壞死以及侵襲性生長至鄰近組織。大多數(shù)SFT都表達(dá)CD34、CD99、Bcl-2、Vimentin。Suster等認(rèn)為，Bcl-2 在SFT診斷[3]中比CD34意義大，對CD34 陰性，而Bcl-2 高表達(dá)的可確定SFT的診斷，本組病例Bcl-2陽性率90%，CD34陽性率70%。本瘤應(yīng)與惡性間皮瘤、滑膜肉瘤、惡性外周神經(jīng)鞘膜瘤、惡性血管外皮細(xì)胞瘤、惡性纖維性腫瘤、粘液樣惡性纖維組織細(xì)胞瘤等鑒別，依靠特征性改變及免疫組化可加以區(qū)分。
3.4 治療與預(yù)后
根治性手術(shù)切除是本病的首選治療方法，如有局部復(fù)發(fā)，仍應(yīng)考慮再次手術(shù)切除治療，本瘤對放療、化療均不敏感。絕大多數(shù)SFT生物學(xué)行為在臨床上呈良性過程，有的可局部復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)變?yōu)閻盒裕琒ung[4]等認(rèn)為，SFT的預(yù)后與腫瘤大小無關(guān)，而與患者的癥狀嚴(yán)重程度有關(guān)，單純根據(jù)組織學(xué)形態(tài)并不能完全精確的判斷其預(yù)后, 應(yīng)注意長期隨訪。
參考文獻(xiàn)
[1]KlempererP,Rabin CB. Pulmonary neoplasms of the pleura:a report of five cases〔J〕.Arch Patho,l 1931, 11(4): 385.
[2]高杰，鐘梅，等。孤立性纖維性腫瘤35 例臨床病理研究[J].診斷病理學(xué)雜志，2008,15(1):4-7.
