時間：2023-05-31 09:50:45
開篇：寫作不僅是一種記錄，更是一種創(chuàng)造，它讓我們能夠捕捉那些稍縱即逝的靈感，將它們永久地定格在紙上。下面是小編精心整理的12篇化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，希望這些內(nèi)容能成為您創(chuàng)作過程中的良師益友，陪伴您不斷探索和進(jìn)步。
[關(guān)鍵詞] 化學(xué)發(fā)光免疫分析儀；操作；維護(hù)；故障處理
[中圖分類號]R392-33 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B[文章編號] 1673-7210（2009）05（b）-127-02
美國拜耳公司生產(chǎn)的ACS:180SE全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀以其獨特的免疫分析技術(shù)，齊全的檢測項目，簡便的操作，快速、靈敏的測試結(jié)果，在臨床上廣泛應(yīng)用。該機(jī)使用的一次性樣品杯、定標(biāo)液、酸堿試劑、輔助試劑等均為廠家負(fù)責(zé)免費提供，降低了檢測成本，方便了客戶。
1 儀器的使用環(huán)境及保養(yǎng)
環(huán)境溫度、塵埃、電源的穩(wěn)定性對機(jī)器的影響很大。環(huán)境溫度和濕度過高或過低，儀器都會報警，因此實驗室應(yīng)安裝空調(diào)和除濕機(jī)。室內(nèi)濕度過大時儀器無法正常啟動，可用吹風(fēng)機(jī)對準(zhǔn)儀器后部的窗口吹10～15 min即可。同時要做好環(huán)境的防塵、清潔工作。定期用無水乙醇擦拭吸樣針和試劑針，同時調(diào)整吸樣針和試劑針的位置，試驗用水必須使用達(dá)標(biāo)水質(zhì)。
2 操作流程
2.1 儀器工作全程由微機(jī)控制
儀器自檢、灌注、編排工作表、樣本和試劑的識別與定標(biāo)、樣本和試劑的混合、進(jìn)樣、清洗等均由自動程序控制，操作簡便。
2.2 樣品杯為一次性使用，廠家負(fù)責(zé)免費提供
使用時將杯子放如杯倉內(nèi)，由機(jī)械裝置引導(dǎo)自動進(jìn)入軌道，吸樣針和試劑針將樣本和試劑吸入，反應(yīng)分析后樣品杯被清洗送入污物倉，同時將檢測結(jié)果自動傳送至電腦，整個過程全自動化檢測。
2.3 吸針均由程序自動控制
為使吸樣針和試劑針準(zhǔn)確吸樣和吸試劑，機(jī)內(nèi)有一負(fù)壓泵為吸針提供負(fù)壓，針上有傳感器及液面檢測器負(fù)責(zé)檢測。吸針的吸樣位置和吸樣量多少均由程序自動控制。
2.4 結(jié)果分析
分析結(jié)果直接傳入英文版的微機(jī)，再自動傳送至中文版的微機(jī)中，打印中文綜合報告。
3 常見故障及處理
3.1 系統(tǒng)故障及電路故障
當(dāng)系統(tǒng)發(fā)生故障時，英文版微機(jī)顯示器左上角窗內(nèi)后黃色表識閃動，機(jī)內(nèi)故障檢測系統(tǒng)將指示出故障發(fā)生的具體部位及處理辦法。大部分故障可自己解決。當(dāng)電路發(fā)生故障時就要與廠家維修工程師聯(lián)系解決。因為控制儀器的微機(jī)是全英文版的，所以操作人員必須能夠具備一定的英文水平，儀器旁也應(yīng)該隨時放置英文詞典以備查用。
3.2 微機(jī)故障
微機(jī)是該系統(tǒng)的心臟。有時由于微機(jī)不能啟動，與主機(jī)之間的連接松動等都會造成整個系統(tǒng)不能工作。這時應(yīng)該檢查微機(jī)電源、與主機(jī)間的連接線路、系統(tǒng)軟件等。如確屬微機(jī)本身硬件或軟件故障，就要與廠家維修工程師聯(lián)系解決。
3.3 卡杯子
卡杯子故障是該儀器出現(xiàn)故障率較高的現(xiàn)象之一。杯子一旦卡住，整個檢測過程就要重新開始，既浪費時間又浪費試劑。
3.3.1 杯倉卡杯子由于樣品杯是在杯倉內(nèi)任意放置，由倉內(nèi)機(jī)械傳送帶隨機(jī)拾取的，使用一段時間后倉內(nèi)灰塵及塑料樣品杯上的毛刺等都可能使杯子卡住。此時軌道上無杯，機(jī)器空走。解決的方法是將機(jī)器左側(cè)上外板拆下，將卡杯取出，用棉簽蘸取無水乙醇清潔傳輸帶、杯倉即可。
3.3.2 污物倉卡杯子檢測后樣品杯被清洗送入污物倉內(nèi)。長時間使用后，杯子進(jìn)入污物倉的出口處會有灰塵積聚，出口斜面變澀，使杯子不能順利滑入污物倉，從而堵住出口。此時儀器報警，檢測停止。解決的方法是將污物倉打開，用用棉簽蘸取無水乙醇清潔杯子出口即可。
3.4 過濾器滲漏或過臟
儀器左邊上一小窗可看見水過濾器。由于受水炙和環(huán)境的影響，如果一段時間結(jié)果出現(xiàn)較大偏差，并從小窗上看到過濾器發(fā)黃或是滲漏，就需要與廠家維修站聯(lián)系更換水過濾器。
3.5 樣品（試劑）盤無動作
當(dāng)傳動裝置發(fā)生故障時，樣品（試劑）盤不能動作，此時應(yīng)首先檢查傳動馬達(dá)有無動作，在拆開清潔后發(fā)生此故障，多半是由于條形碼檢測器沒有檢到條形碼。只要將樣品（試劑）盤轉(zhuǎn)一下位置就可解決。所以在拆盤時要記住原始位置很重要。如果條形碼檢測器燈不亮，無掃描，則是檢測器本身故障，就要與廠家維修工程師聯(lián)系解決。
3.6 液面檢測故障
當(dāng)進(jìn)樣（吸試劑）的1～3號針任一發(fā)生故障時，該針進(jìn)到樣本（或試劑）杯中，只是輕點一下，不能吸液，則要考慮是否液面檢測器損壞?？蓪芍会樕弦好鏅z測器互換。如果故障也隨之轉(zhuǎn)移，就可斷定是液面檢測器損壞。此電路板在機(jī)上為軟線連接，拆裝時要格外小心，以免擴(kuò)大故障。
3.7 水量過少或水液面過低
在儀器的左面有上下兩個水桶，上面是凈水桶，下面是污水桶。兩個水桶分別由兩個帶圓型塑料墊的蓋子蓋住。使用一段時間后，即使凈水桶里是滿的儀器也會出現(xiàn)水液面過低的報警現(xiàn)象。此時，可打開凈水桶蓋子，將蓋子上的圓形塑料墊轉(zhuǎn)動位置蓋上即可。如果長期磨損，轉(zhuǎn)動后仍不能解決，就需要與廠家維修站聯(lián)系更換塑料墊。
3.8 樣品或試劑量過少，液面過低
此時吸針因吸不到樣品或試劑而報警，無法檢測?？蓪悠饭芑蛟噭┢可晕⑾蛏咸?～5 mm，以不影響吸針吸樣為準(zhǔn)，這樣可將樣品或試劑液面稍微提高，從而順利檢測，同時避免了試劑的浪費。
總之，在使用過程中日常維護(hù)和保養(yǎng)至關(guān)重要，能消除隱患，降低故障率；如果能了解一些常見的故障發(fā)生的原因并及時加以處理，更有利于提高儀器的使用效率，充分發(fā)揮該儀器快速、準(zhǔn)確的性能。
[參考文獻(xiàn)]
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【關(guān)鍵字】放射免疫法、化學(xué)發(fā)光免疫法、血清AFP、效果分析
【中圖分類號】R426 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1004-7484（2014）07-4045-02
臨床檢測血清AFP中，應(yīng)該對患者采用有效生長激素檢測方式，這樣才可以提高檢測的準(zhǔn)確性，提升患者的身體健康質(zhì)量，提高治病療效【1】。以下針對我院從2013年1月到2013年12月期間采集的100例住院患者血清標(biāo)本進(jìn)行分析，探討臨床中，采取化學(xué)發(fā)光免疫法與放射免疫法檢測血清AFP的效果。
1 資料與方法
1.1資料
對我院2013年1月到2013年12月的100例住院患者進(jìn)行血清標(biāo)本收集工作， 本次研究的血清標(biāo)本采集中，均是由經(jīng)驗豐富的檢驗人員在2小時內(nèi)，對清晨空腹患者抽取靜脈血3 ml，并排除患者有先天性疾病、心肝重要器官疾病；試驗儀器包括德國羅氏公司的檢測試劑盒，以及電化學(xué)分析儀、放射免疫分析儀、深低溫；將患者隨機(jī)分配成對照組與試驗組，且在每組中都具有50例患者的血清標(biāo)本，患者在性別、身體狀況以及年齡等資料方面，相互進(jìn)行比較后，不存在差異，無統(tǒng)計學(xué)意義。
1.2 方法
對于對照組患者血清標(biāo)本檢測中，將會使用XAKP- 2000A/02 型 γ 計數(shù)儀【2】，并應(yīng)用中國原子能科學(xué)研究所提供的AFP 試劑盒，對患者的待檢測樣本進(jìn)行梯度稀釋，使檢測物濃度在12.5～8000umol/L范圍間，進(jìn)行放射免疫法檢測；對試驗組患兒50例血清標(biāo)本檢測中，將會使用KL1- e411 型全自動電化學(xué)發(fā)光儀進(jìn)行檢測【3】，并稀釋其檢測樣本的梯度，可以保持檢測物濃度為12.5～8000umol/L，進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光法測定。對兩組檢測方法比較中，分析比對其檢測血清AFP水平差異，考察其之間的相關(guān)性；并對兩組檢測方法中的低值、中值、高值進(jìn)行記錄試驗，且測定每日測定每份樣本22次，連續(xù)測20天，并考察批內(nèi)CV值。
1.3 統(tǒng)計處理
對本次兩組研究結(jié)果，可以應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)軟件SSPS 12.0【4】，針對最后兩組的檢測結(jié)果進(jìn)行處理， 在數(shù)據(jù)處理之中，計量資料我們將會用t檢驗進(jìn)行比較，技術(shù)資料用x2檢驗，設(shè)置統(tǒng)計學(xué)的水準(zhǔn)是a=0.05。
2結(jié)果
兩組檢測結(jié)果，電化學(xué)發(fā)光法檢測血清AFP線性范圍更寬，電化學(xué)發(fā)光法檢測血清AFP精密、靈敏度度更高，其兩組檢測結(jié)果之間差異非常顯著（ P
3討論
據(jù)悉，血清AFP是檢測原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌的標(biāo)志物，是最靈敏性、特異性的腫瘤標(biāo)志，在臨床腫瘤診斷中發(fā)揮重要作用。針對血清AFP檢測中，應(yīng)該制定合理的檢測方案，才可以取得準(zhǔn)確的檢測結(jié)果，提高肝癌患者的生活質(zhì)量。因此在臨床診斷檢測血清AFP中化學(xué)發(fā)光免疫法，較常規(guī)放射免疫法檢驗有較好的效果，可以提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性、靈敏性、高度特異性。
化學(xué)發(fā)光免疫法檢測血清AFP，在臨床中具有較好的效果，應(yīng)用化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)作為抗原抗體反應(yīng)指示系統(tǒng)，定量檢測抗原、抗體，并應(yīng)用發(fā)光劑標(biāo)記抗體，與其它檢測方法相比，具有很高的穩(wěn)定性，采用機(jī)器自動加樣，具有準(zhǔn)確性，化學(xué)發(fā)光免疫法檢測的線性范圍較放射免疫法檢測更寬，更適宜于臨床檢測 血清AFP。在血清AFP測定中，應(yīng)用電化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢查，可以采用高度的特異性抗體【5】，有效起到清除樣本干擾的作用，提高檢測結(jié)果的靈敏度，減少誤差，使用電化學(xué)發(fā)光法測定血清AFP，臨床檢驗效果更穩(wěn)定。
由上可知，在臨床中對血清AFP檢測中，應(yīng)用放射免疫法與電化學(xué)發(fā)光法檢測進(jìn)行檢驗，電化學(xué)發(fā)光法檢測較放射免疫法更具應(yīng)用優(yōu)勢，具有更好重復(fù)性，精密度高，有很好的臨床效果，值得在實際在推廣應(yīng)用。
參考文獻(xiàn)
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【關(guān)鍵詞】 E601； 比對分析； 化學(xué)發(fā)光
中圖分類號 R446 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 B 文章編號 1674-6805（2016）16-0048-02
【Abstract】 Objective：To explore the laboratory Roche E601 and Siemens ADVIA Centaur CP those two electrochemiluminescence testing result can be compared in order to analyze the accuracy and consistency of the two sets of analysis system for detection of tumor markers and thyroid hormone results.Method：Analysis and comparison of the results of indoor quality control of two instruments in one month.Reference to the clinical and Laboratory Standards Institute（CLSI） EP9-A2 document，with E601 as the comparison instrument，and Centaur CP as experiment instrument，simultaneous detection of alphafetoprotein（AFP），carcinoembryonic antigen（CEA）， thyroid stimulating hormone（TSH），free triiodothyronine（FT3） and free thyroxine（FT4） in the patients.The experimental data were statistically analyzed.The correlation between the two instruments was compared.Result：The results of AFP，CEA，TSH，F(xiàn)T3，F(xiàn)T4 were stable， and the bias results were in accordance with the relevant requirements.The detection results were significantly correlated（P>0.05），which was consistent with the clinical requirements.Conclusion：The performance of the two instruments are good，the test results are accurate and reliable，and they have good consistency.The results of each test item（AFP，CEA，TSH，F(xiàn)T3，F(xiàn)T4） are comparable.
【Key words】 E601； Comparative analysis； Chemiluminescence
First-author’s address：Xinhui Hospital Affiliated to Southern Medical University，Jiangmen 529100，China
doi：10.14033/ki.cfmr.2016.16.023
近年來，隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步和檢驗醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展，越來越多的醫(yī)院或者實驗室同時存在者不同品牌、不同型號、不同原理的多臺儀器檢測相同項目的現(xiàn)象。使用兩臺不同的儀器進(jìn)行相同項目測定時，由于各種因素導(dǎo)致測定結(jié)果常存在一定程度的誤差，若誤差過大，必然會影響到臨床的分析診斷、治療和療效觀察。為了保證檢驗結(jié)果的一致性，應(yīng)進(jìn)行儀器間的比對分析和偏倚評估，以保證系統(tǒng)間檢測結(jié)果的可靠性和可比性。故按照美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CLSI）EP9-A2文件[1]的要求，對筆者所在科室E601與ADVIA Centaur CP兩臺電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測AFP、CEA、TSH、FT3、FT4的結(jié)果進(jìn)行了比對分析和偏倚評估，現(xiàn)報道如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
每天隨機(jī)收集8份住院及門診患者的新鮮血清標(biāo)本，連續(xù)5 d，共40組數(shù)據(jù)。收集的標(biāo)本及時離心并分離血清，排除黃疸、溶血、脂血等因素。按照EP9-A2文件的要求，標(biāo)本濃度包括高、中、低值，盡可能選擇在線性范圍內(nèi)的樣本，并且實驗室參考范圍以外的標(biāo)本數(shù)量應(yīng)在50%以上。所有操作均在2 h內(nèi)檢測完畢，以確保檢測結(jié)果的穩(wěn)定性。因為我國臨床實驗室參考美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會（NCCLS）的有關(guān)規(guī)定，要求臨床實驗室應(yīng)于2 h內(nèi)分離血清測定[2]。
1.2 儀器與試劑
羅氏E601與西門子ADVIA Centaur CP電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及其配套試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，批號均相同，且均在有效期內(nèi)。
1.3 方法
1.3.1 檢測方法 以E601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀為比對儀器（X），ADVIA Centaur CP為實驗儀器（Y），比對項目為AFP、CEA、FT3、FT4、TSH。
1.3.2 質(zhì)量控制 按照儀器標(biāo)準(zhǔn)操作程序定期對儀器進(jìn)行維護(hù)與保養(yǎng)，按照常規(guī)方法進(jìn)行校準(zhǔn)和室內(nèi)、室間質(zhì)控，在質(zhì)控結(jié)果在控的前提下，測定待檢樣本獲得檢測結(jié)果。
1.3.3 樣本測定 將每天收集的8份標(biāo)本分別在E601、ADVIA Centaur CP兩臺儀器上進(jìn)行雙份平行測定，連續(xù)檢測5 d，共得出40組數(shù)據(jù)，記錄結(jié)果。
1.4 統(tǒng)計學(xué)處理
數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析采用IBM SPSS Statistics 19.0與Microsoft Office Excel 2010軟件。室內(nèi)質(zhì)控物變異系數(shù)參照美國國家臨床實驗標(biāo)準(zhǔn)化委員會文件對儀器要求進(jìn)行評價，偏倚范圍參考美國CLIA88能力驗證分析質(zhì)量要求進(jìn)行偏倚性及相關(guān)性分析，以P
2 結(jié)果
2.1 室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果
美國國家臨床實驗標(biāo)準(zhǔn)化委員會文件對儀器檢測結(jié)果變異系數(shù)具有一定的要求。從表1可以看出，筆者所在科室兩臺電化學(xué)發(fā)光分析儀檢測結(jié)果變異系數(shù)（CV%）均在其要求的范圍內(nèi)，因此，可繼續(xù)進(jìn)行下一步的相關(guān)標(biāo)本檢測工作。
2.2 實驗儀器ADVIA Centaur CP與比對儀器E601檢測相關(guān)性的比較
本文以E601為比對儀器，ADVIA Centaur CP為實驗儀器，ADVIA Centaur CP檢測結(jié)果偏倚報告如下：AFP：4.14%；CEA：3.43%；FT3：3.54%；FT4：2.86%；TSH：5.65%。由表2可以看出，ADVIA Centaur CP的偏倚結(jié)果均符合美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會的相關(guān)要求。經(jīng)F檢驗，兩臺儀器的檢測結(jié)果相關(guān)性良好，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
3 討論
隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，醫(yī)學(xué)檢驗迅速發(fā)展，伴隨著筆者所在醫(yī)院發(fā)展規(guī)模的壯大，筆者所在科室的檢驗標(biāo)本也越來越多，單一臺化學(xué)發(fā)光儀已不能滿足臨床的要求，因此，為了應(yīng)付大量檢測項目，提高檢測效率，筆者所在科室同時采用羅氏E601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及西門子ADVIA Centaur CP電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測常規(guī)腫瘤標(biāo)志物。本文研究將E601為比對儀器，ADVIA Centaur CP為實驗儀器作對比進(jìn)行分析。每天進(jìn)行標(biāo)本檢測前做室內(nèi)質(zhì)控，將質(zhì)控物進(jìn)行相關(guān)檢測，檢測結(jié)果表明：AFP、CEA、FT3、FT4、TSH的CV%值均小于5%，結(jié)果符合國家臨床實驗標(biāo)準(zhǔn)化委員會文件對儀器的要求，說明筆者所在科室兩臺電化學(xué)發(fā)光分析儀檢測結(jié)果重復(fù)性和穩(wěn)定性均良好。然后，筆者還利用這兩臺電化學(xué)發(fā)光分析儀對40份隨機(jī)抽取的患者血清標(biāo)本進(jìn)行相關(guān)項目的檢測，并對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計和對比分析。分析結(jié)果表明，筆者所在科室兩臺儀器檢測的AFP、CEA、FT3、FT4、TSH的結(jié)果差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
ISO15189文件明確指出：當(dāng)相同的檢驗項目應(yīng)用于不同的程序或設(shè)備，或在不同的地點進(jìn)行，或以上各項均不同時，應(yīng)有確切的機(jī)制以驗證在整個臨床適用區(qū)間內(nèi)檢驗結(jié)果的可比性[3]，同時文件明確要求：“分析系統(tǒng)應(yīng)具有完整性和有效性，實驗室應(yīng)使用與分析系統(tǒng)相適應(yīng)的試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和消耗品等，并應(yīng)能提供測定結(jié)果的溯源性”。因此，實驗室在引進(jìn)一個新的檢測系統(tǒng)前，應(yīng)和原有的檢測系統(tǒng)同時檢測同一批患者標(biāo)本進(jìn)行比對試驗，從測定結(jié)果間的差異了解新檢測系統(tǒng)引入后與原有檢測系統(tǒng)的偏倚[4]。
綜上所述，在保證檢測系統(tǒng)精密度和準(zhǔn)確性的前提下，建立起各檢測系統(tǒng)規(guī)范化的長效比對機(jī)制，對實現(xiàn)不同檢測系統(tǒng)間檢測結(jié)果的一致性和可比性具有重要意義。同時，使實驗室對檢測結(jié)果的偏倚有了明確的了解和準(zhǔn)確的評估管理依據(jù)，保證了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和同一實驗室在檢測同一項目時結(jié)果的延續(xù)性[5]。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，筆者所在科室兩臺全自動電化學(xué)發(fā)光分析儀檢測結(jié)果相關(guān)性良好，檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠，AFP、CEA、FT3、FT4、TSH的偏倚值均符合CLIA88能力驗證分析質(zhì)量的要求，可以為臨床的診斷及疾病的治療提供有效的實驗室數(shù)據(jù)，有利于醫(yī)生對疾病的診斷及預(yù)后的判斷。因此，筆者所在科室兩臺全自動電化學(xué)發(fā)光分析儀均符合臨床檢驗的要求，并且可以在檢測標(biāo)本時相互參照，互相檢測儀器的運(yùn)行狀況，假若某一臺儀器發(fā)生故障或出現(xiàn)不穩(wěn)定的因素，檢驗人員能及時發(fā)現(xiàn)問題并進(jìn)行相關(guān)處理，從而避免了發(fā)出不合理的報告。檢驗醫(yī)學(xué)的發(fā)展，核心問題是質(zhì)量，質(zhì)量是檢驗之本，沒有高質(zhì)量的檢驗結(jié)果就談不上學(xué)術(shù)的高水平[6]。因此，筆者所在科室選擇與儀器相關(guān)配套的質(zhì)控物來做室內(nèi)質(zhì)控，以確保檢測結(jié)果的重復(fù)性、穩(wěn)定性及準(zhǔn)確性。
筆者所在科室兩臺全自動化學(xué)發(fā)光儀性能良好，檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠，具有良好的相關(guān)性。各檢測項目（AFP、CEA、TSH、FT3、FT4）結(jié)果具有可比性。
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孔銘：其實科華生物這次定增籌劃了很久，我覺得投資者應(yīng)該先了解一下背景――在2013年，公司原大股東徐顯德、沙立武就與有關(guān)投資機(jī)構(gòu)討論所持公司股份協(xié)議轉(zhuǎn)讓事宜。兩位股東均已年逾六十，近年來漸漸退出公司管理層，此次股份轉(zhuǎn)讓引入LAL公司作為戰(zhàn)略投資者。
定增方案一直陸續(xù)推進(jìn)到2015年1月30日，公司修改增發(fā)預(yù)案，擬以15.77元/股向LAL公司非公開發(fā)行2029萬股，募集資金3.2億元，用于補(bǔ)充公司流動資金，LAL公司以現(xiàn)金認(rèn)購全部股份。
LAL是由方源資本設(shè)立的持股目的公司，公司引入境外戰(zhàn)略投資者，一方面有利于進(jìn)一步提升公司治理水平，增強(qiáng)經(jīng)營管理能力，另一方面公司豐富的行業(yè)經(jīng)驗與方源資本的投資經(jīng)驗相結(jié)合，有益于公司尋求外延式突破發(fā)展。
科華生物這樣的輕資產(chǎn)型公司，未來業(yè)績增長主要還是看創(chuàng)新。我們可以先看看2014年的情況，2014年公司共有24項化學(xué)發(fā)光試劑獲得醫(yī)療器械注冊證，覆蓋癌胚抗原、腫瘤相關(guān)抗原、甲狀腺素、胰島素、甲胎蛋白等多個檢測項目，同時公司的全自動化學(xué)發(fā)光測定儀卓越C1800、卓越C1820獲得醫(yī)療器械注冊證。
與傳統(tǒng)的酶免法相比，化學(xué)發(fā)光法具有精確度高、定量與檢測速度快等優(yōu)點，代表了免疫診斷的最新發(fā)展方向，目前國內(nèi)高端醫(yī)院仍以進(jìn)口產(chǎn)品為主。公司在化學(xué)發(fā)光領(lǐng)域開始步入收獲期，“儀器+試劑”格局已經(jīng)構(gòu)成，預(yù)計今明兩年仍是化學(xué)發(fā)光試劑獲批的高峰期。同時，經(jīng)過一年的市場推廣期后，我們看好今年下半年化學(xué)發(fā)光產(chǎn)品步入放量增長期。
《動態(tài)》：市場一直是以一個高成長公司來觀察科華生物的，但2014年業(yè)績增速偏低，應(yīng)該說不太符合市場的預(yù)期，往后看的話，業(yè)績增速能否恢復(fù)？
孔銘：公司2014年業(yè)績增速放緩，一方面受行業(yè)整體增速下滑影響，另一方面公司主動加強(qiáng)內(nèi)控，對終端客戶進(jìn)行謹(jǐn)慎篩選，依靠“儀器+試劑”模式進(jìn)行銷售的儀器投放量減少，從而影響后端試劑銷售。預(yù)計未來隨著化學(xué)發(fā)光儀器新產(chǎn)品的推廣，公司將適當(dāng)加大投放力度，業(yè)績有望迅速恢復(fù)。
公司近年一直受到產(chǎn)能瓶頸影響，生產(chǎn)線全部滿負(fù)荷運(yùn)行。2015年漕河涇本部金標(biāo)生產(chǎn)樓改建項目與松江真空采血耗材新生產(chǎn)季度即將投入使用，公司產(chǎn)能瓶頸得以突破，收入有望快速增長。
《動態(tài)》：您說科華生物2015年及以后主要看新產(chǎn)品的創(chuàng)新升級，能否更具體的來分析一下？
孔銘：好的，現(xiàn)有已上市診斷試劑類公司共同的問題是產(chǎn)品線的老化，目前集中在生化、免疫領(lǐng)域，國產(chǎn)化已經(jīng)較高，成長性不足。分子領(lǐng)域更高技術(shù)含量的產(chǎn)品獲批不足。
與其它診斷試劑類公司不同的是，在現(xiàn)有的產(chǎn)品線上，科華生物的創(chuàng)新升級聚焦于化學(xué)發(fā)光和POCT兩大類。
POCT其實是“快速檢測試劑”（point of care-testing）的簡稱，其意義是指：“在接近病人治療處，由未接受臨床實驗室學(xué)科訓(xùn)練的臨床人員或者病人（自我檢測）進(jìn)行的臨床檢驗，是在傳統(tǒng)、核心或中心實驗室以外進(jìn)行的一切檢驗”。
與臨床實驗室檢驗相比，POCT具有檢測快速，標(biāo)本簡單且不需要處理，使用操作簡單等優(yōu)點，適合門診快速檢測，家庭自我檢測等領(lǐng)域，是檢驗科學(xué)的發(fā)展方向。目前占到美國體外診斷市場約30%的市場份額。
隨著國內(nèi)醫(yī)療改革創(chuàng)新的不斷涌現(xiàn)，例如民營資本、移動醫(yī)療、遠(yuǎn)程醫(yī)療等變革的出現(xiàn)，更快速便捷的檢測需求將逐步放大。
公司2013年獲批干式化學(xué)分析儀，在POCT技術(shù)平臺方面取得突破。目前已經(jīng)獲批丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試紙條（干化學(xué)法）、尿素測定試紙條（尿素酶法）、α-淀粉酶測定試紙條（EPS法）等多種與干式化學(xué)分析儀配套的診斷試劑。另外公司在研的膠體金產(chǎn)品（如檢測）也將是POCT中比較有潛力的品種。
《動態(tài)》：請再講講化學(xué)發(fā)光產(chǎn)品的情況。
孔銘：化學(xué)發(fā)光化免疫分析技術(shù)，是繼放射免疫技術(shù)（RIA）、酶聯(lián)免疫診斷技術(shù)（ELISA）熒光免疫技術(shù)和時間分辨熒光免疫技術(shù)之后又一市場領(lǐng)導(dǎo)技術(shù)，現(xiàn)在已經(jīng)成為國外的主流技術(shù)，并帶領(lǐng)國內(nèi)免疫診斷市場快速發(fā)展。其具有放射免疫的高靈敏度，線性范圍廣，又具有酶聯(lián)免疫操作簡便快速的特點，易于標(biāo)準(zhǔn)化操作，試劑保質(zhì)期長，且測試中不使用有害物質(zhì)，從而成為非放射性免疫分析法中最有前景的方法之一。
化學(xué)發(fā)光目前在臨床上主要用于激素檢測、腫瘤標(biāo)記物、內(nèi)分泌功能、傳染性疾病等各項檢測;這些領(lǐng)域適用人群的基數(shù)較大，且處于擴(kuò)張過程中，由于其相對優(yōu)勢，化學(xué)發(fā)光的市場增速較快，而且主要的市場參與者為外資，包括貝克曼、羅氏、雅培和西門子等;其儀器主要是全自動化學(xué)發(fā)光儀，并且封閉式的使用配套的相關(guān)試劑。外資企業(yè)通過儀器的投放壟斷性的帶動試劑產(chǎn)品的增長，占據(jù)了三級醫(yī)院市場的絕大多數(shù)份額。
我提示投資者注意，科華生物的全自動化學(xué)發(fā)光測定儀2014年獲批，相關(guān)的配套試劑也在陸續(xù)獲批當(dāng)中。
《動態(tài)》：從業(yè)績增長空間看，科華生物還是很有潛力的，但目前科華生物動態(tài)市盈率接近40倍，市場的擔(dān)憂仍集中在估值偏高，這方面您有什么觀點？
孔銘：我認(rèn)為診斷試劑行業(yè)價值的整體提升推升公司投資機(jī)會。
[關(guān)鍵詞] 電化學(xué)發(fā)光法；放射免疫法；甲狀腺激素
[中圖分類號] R446.62 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2012）03-0071-02
Comparing of measurement of thyroid hormones by ECLIA and RIA
ZHANG Yuping
Deparment of Clinical Laboratory, the Affiliated Hospital of Xinyang Vocational and Technical College, Xinyang 464000, China
[Abstract] Objective To compare which one is superiority in result of reliability and methodology of convenience between ECLIA and RIA measurement. Methods The thyroid hormones were measured by ECLIA and RIA. The measurements were compared of precision, sensitivity, coefficient of recovery, linear range and others. Results Precision, sensitivity, coefficient of recovery, linear range of ECLIA have had an advantage over RIA. Conclusion ECLIA is an outstanding method applied in clinical laboratory.
[Key words] ECLI; RIA; Thyroid hormones
放射免疫法（RIA）檢測成本低，但具有報告時間長、結(jié)果不穩(wěn)定、同位素污染等缺點，漸趨于淘汰。近年來隨著檢測分析技術(shù)的發(fā)展，電化學(xué)發(fā)光（ECLI）分析法日益受到關(guān)注，本文分別采用2種方法對甲狀腺激素標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和20份患者血清甲狀腺激素進(jìn)行測定并對其評價，現(xiàn)報道如下。
1 材料與方法
1.1 材料
20份血清標(biāo)本取自門診患者，均為甲狀腺疾病，血標(biāo)本無脂血和溶血。標(biāo)準(zhǔn)品及質(zhì)控品均為羅氏公司提供。
1.2 儀器與試劑
電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀為美國羅氏公司生產(chǎn)的2010型；美國產(chǎn)全自動γ計數(shù)儀。電化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑購于羅氏公司，放射免疫分析試劑購于天津九鼎公司。
1.3 方法
1.3.1 精密度 用兩種方法分別對中、高值質(zhì)控品進(jìn)行測定，每份樣品連測20次，計算批內(nèi)CV值。每日測定1次，連續(xù)20次，計算批間CV值。
1.3.2 線性范圍 將甲狀腺激素標(biāo)準(zhǔn)品（FT3 40 pmol/L，F(xiàn)T4 45 pmol/L，TSH 100 mIU/L）及中、高值質(zhì)控品按不同比例關(guān)系混合制成評價樣品，重復(fù)測定5次。坐標(biāo)圖上預(yù)期值與實測值的直線所達(dá)的限值即為線性范圍。
1.3.3 靈敏度 分別對空白零標(biāo)準(zhǔn)做批內(nèi)20次檢測，分別記錄放射強(qiáng)度和發(fā)光強(qiáng)度并做統(tǒng)計，再計算檢測低限（LLD）[1]。公式：LLD=均值BIK+2SBLK。
1.3.4 回收實驗 將甲狀腺激素標(biāo)準(zhǔn)品（FT3 40 pmol／L，F(xiàn)T4 45 pmol/L，TSH 100 mIU/L）作為基質(zhì)，在其中分別加入中、高值質(zhì)控品作為樣品1和2 ，然后分別進(jìn)行測定，計算均值并進(jìn)行比較。
1.4 統(tǒng)計學(xué)方法
采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較計量資料采用t檢驗，以P ＜ 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 精密度
觀察兩種方法測定甲狀腺激素的批內(nèi)和批間CV結(jié)果可見，兩種方法均達(dá)到了臨床檢驗的質(zhì)量要求，但電化學(xué)發(fā)光法的精密度更高。見表1、2。
2.2 線性范圍
2種方法檢測FT3、FT4、TSH的可報告范圍：電化學(xué)發(fā)光免疫法（0.26～115） pmol/L、（0.12～116） pmol/L、（0.08～90）mIU/L。放射免疫法為（1.14～65）pmol/L、（1.69～82） pmol/L、（0.23～58）m/L。
2.3 靈敏度
兩種方法檢測FT3、FT4、TSH的低限，電化學(xué)發(fā)光免疫法為0.12pmol/L、0.16pmol/L、0.09mIU/L；放射免疫法為1.11pmol/L、1.77pmol/L、0.24mIU/L。
2.4 回收實驗
檢測結(jié)果平均回收率見表。均有較好的回收率，比較后發(fā)現(xiàn)電化學(xué)發(fā)光免疫法優(yōu)于放射免疫法（P ＜ 0.05）。
3 討論
放射免疫分析始于20世紀(jì)60年代，其敏感度、特異性均較好，發(fā)生交叉反應(yīng)少，準(zhǔn)確性好、重復(fù)性好、批內(nèi)批間誤差低，但容易發(fā)生放射性污染，不能形成自動化，不能快速地檢測、出報告[1]。電化學(xué)發(fā)光免疫法是電化學(xué)發(fā)光和免疫測定相結(jié)合的新一代標(biāo)記免疫技術(shù)，近年來在國內(nèi)一部分臨床實驗室相繼應(yīng)用。電化學(xué)發(fā)光免疫法不僅可用于檢測激素類、腫瘤標(biāo)志物類，還可用于傳染病、血藥濃度的監(jiān)測，預(yù)計將來臨床應(yīng)用會更加廣泛。電化學(xué)發(fā)光免疫法自動化強(qiáng)，可以24小時開機(jī)，能夠隨時滿足現(xiàn)代醫(yī)院的節(jié)奏和病人對醫(yī)院的更高要求，如一些急診項目；絨毛膜促性腺激素、肌紅蛋白、肌鈣蛋白等，隨時檢測，具有更大的臨床應(yīng)用價值[2]。
本組試驗表明兩種方法檢測血清FT3、FT4、TSH的結(jié)果在精密度、線性范圍、靈敏度、回收率等幾方面均有顯著性差異，顯示電化學(xué)發(fā)光免疫法明顯優(yōu)于放射免疫法。電化學(xué)發(fā)光免疫法檢測血清FT3、FT4、TSH時，被測抗原與抗體全部參與反應(yīng)；而放射免疫法是競爭性反應(yīng)，被測物和標(biāo)準(zhǔn)物都不能全部參與反應(yīng)，最大結(jié)合時一般在50%左右，亦即抗體結(jié)合位點與標(biāo)記抗原結(jié)合一半[3]。試驗結(jié)果顯示了電化學(xué)發(fā)光免疫法在可測定范圍上要遠(yuǎn)勝于放射免疫法。
電化學(xué)發(fā)光可以最大程度消除樣本底的干擾及對位量的散射，可以獲得較高的靈敏度。另外電化學(xué)發(fā)光免疫法可以全自化，能夠最大限度減少系統(tǒng)和隨機(jī)誤差。而且電化學(xué)發(fā)光免疫法試劑有效期長，檢測快速準(zhǔn)確，且安全無毒，不會出現(xiàn)同位素輻射污染的問題[4]。
因此，電化學(xué)發(fā)光將會成為微量法檢測的發(fā)展和普及方向，可以替代放免法，使實驗室的服務(wù)具有競爭力。
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【關(guān)鍵詞】 elisa； 甲胎蛋白； 化學(xué)發(fā)光法； 體檢普查； 應(yīng)用價值
甲胎蛋白（afp）是1956年bergstrandh和czar在人胎兒血清中發(fā)現(xiàn)的一種專一性的甲種球蛋白，它是一種糖蛋白，每分子含兩條復(fù)合糖鏈，不同組織合成afp糖鏈的組成不同[1]。afp是個體發(fā)育和進(jìn)行性腫瘤的生長調(diào)節(jié)因子，參與細(xì)胞分化、生長調(diào)節(jié)及腫瘤的發(fā)生，70%以上的肝細(xì)胞癌患者血afp升高，檢測afp濃度對原發(fā)性肝癌具有重要的診斷意義，是發(fā)現(xiàn)早期肝癌的主要指標(biāo)之一。而afp檢測結(jié)果為實驗室互認(rèn)項目，現(xiàn)在實驗室常用的afp定量檢測方法學(xué)有elisa、放射免疫法和化學(xué)發(fā)光法等幾種，其中elisa法以快速、簡便實效而被廣泛應(yīng)用[2-4]。本研究對elisa法定量檢測afp做回顧性評價對比分析，為早期肝癌的診斷和大批量的健康體檢普查肝癌提供依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 標(biāo)本來源 9580例體檢者均為本院2010年1月-2012年1月體檢普查者，男6227例，女3353例，年齡22～75歲，平均46歲；其中肝癌患者根據(jù)中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司組織并由全國腫瘤防治辦公室與中國抗癌協(xié)會合編的“新編常見惡性腫瘤治規(guī)范”制定的肝癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)和分期標(biāo)準(zhǔn)[5]，均經(jīng)影像學(xué)檢查、組織病理學(xué)及臨床確診。所有患者均于早晨空腹采取外周靜脈血，兩小時內(nèi)3000 r/min離心15 min 分離血清檢測。
1.2 方法 用elisa（雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法）對9580例體檢者進(jìn)行afp濃度檢測，elisa法afp試劑和標(biāo)準(zhǔn)血清均購自河南鄭州安圖生物工程股份有限公司，洗板機(jī)購自美國bio-rad公司，酶標(biāo)儀為奧地利anthos 2010/ht酶標(biāo)儀，均嚴(yán)格按說明書操作。
1.3 對elisa檢測陽性的樣本用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法（cleia）重新檢測afp水平，試劑盒購自美國beckman公司，儀器為beckman公司的access全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，室內(nèi)質(zhì)控通過后進(jìn)行常規(guī)測定，對afp結(jié)果進(jìn)行四個濃度段統(tǒng)計對比分析。
1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用pems 3.1軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用 字2檢驗，以p<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2 結(jié)果
用elisa法檢測9580例體檢者afp陽性例數(shù)為214例，陽性率為2.23%（214/9580）；對elisa檢測陽性的樣本用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法（cleia）重新檢測afp水平， elisa和cleia檢測結(jié)果及陽性例數(shù)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.01），在afp各檢測濃度段確診肝癌例數(shù)分別為：10.0～20.0 μg/l濃度段1例，確診陽性率為0.8%；20～100 μg/l
濃度段3例，確診陽性率為5.9%；100～300 μg/l濃度段14例，確診陽性率為51.8%；>300 μg/l濃度段11例，確診陽性率為100%。結(jié)果見表1。
3 討論
近年來，隨著檢驗醫(yī)學(xué)的發(fā)展和對實驗室質(zhì)量要求的提高，人們越來越關(guān)注各檢測系統(tǒng)間檢測結(jié)果的相關(guān)性，如何實現(xiàn)不同實驗室、不同檢測系統(tǒng)對相同檢驗項目結(jié)果有較好的可比性，這對不同儀器互認(rèn)和實驗室認(rèn)可非常重要 [6]。afp是由胎肝細(xì)胞和卵黃囊合成的糖蛋白，是診斷原發(fā)性肝癌最靈敏的指標(biāo)；afp目前仍然是公認(rèn)的早期診斷和篩查原發(fā)性肝癌的指標(biāo)[7]，已廣泛用于肝癌的普查、診斷、判斷治療效果和預(yù)測復(fù)發(fā)。afp主要應(yīng)用于發(fā)現(xiàn)和監(jiān)測原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌，其次應(yīng)用于原發(fā)性肝癌的療效監(jiān)測[8]。而afp也是各實驗實間結(jié)果互認(rèn)項目之一?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測的試劑昂貴形成了成本高而難以在基層醫(yī)院推廣使用，也難以在大批量體檢普查中使用。
雖然afp特異性、敏感性不很理想，但仍是大規(guī)模體檢、篩查肝癌所最常用的血清標(biāo)志物[9]。本研究中，用elisa法檢測9580例體檢者afp陽性例數(shù)為214例，陽性率為2.23%，而elisa和cleia檢測結(jié)果及陽性例數(shù)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，
表1可見，確診肝癌例數(shù)在afp各濃度段均有陽性率，說明在10.0～20.0 μg/l濃度段肝癌發(fā)生可能性為0.8%，20～100 μg/l濃度段肝癌發(fā)生可能性為5.9%，100～300μg/l
濃度段肝癌發(fā)生可能性為51.8%，>300 μg/l濃度段肝癌發(fā)生可能性為100%?；瘜W(xué)發(fā)光法在線性范圍和精密度等方面明顯優(yōu)于elisa法，但是在大批量的普查樣本檢測中，elisa法具有快速、簡便、成本低廉的優(yōu)點，在健康體檢、人群普查、良性肝病患者定期檢查中起到很好篩查作用[10]。對于大批量的健康體檢樣本，無論是經(jīng)濟(jì)成本還是檢測速度，elisa檢測afp均優(yōu)于cleia，其缺點是檢測線性范圍較小，但對于高值樣本還能檢測出陽性，只是對于后期的療效觀測不理想。所以，在大批量的健康體檢普查腫瘤標(biāo)志物，檢測afp使用elisa法為最佳選擇。
綜上所述，elisa定量檢測afp水平敏感性高，分afp濃度段考慮診斷肝癌準(zhǔn)確性高，afp>300 μg/l肝癌發(fā)生可能性達(dá)100%，且試劑成本低，操作簡便快速，適合大批量體檢普查應(yīng)用，對一時難以購買化學(xué)發(fā)光儀器的基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)，elisa法也是一個很好而實用的診斷早期肝癌的檢測方法。
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【關(guān)鍵詞】發(fā)光；功能化；納米材料
納米材料在實際應(yīng)用中，其主要特點是比表面積大、化學(xué)反應(yīng)活性強(qiáng)以及具有良好的尺寸效應(yīng)，能夠和生物體產(chǎn)生特殊的相互作用。在生物標(biāo)記以及分析檢測中則主要是作為生物探針應(yīng)用，同時納米技術(shù)、生物技術(shù)以及分析技術(shù)的良好結(jié)合，也進(jìn)一步促進(jìn)了功能性納米材料的發(fā)展及應(yīng)用。本文則從發(fā)光功能化角度，對納米材料的發(fā)展及應(yīng)用探討。
1納米材料在電化學(xué)和電化學(xué)發(fā)光生物傳感中的應(yīng)用
其中將CdTe量子點作為標(biāo)志物的免疫傳感器，能夠同時測定人IgG抗原作為模型蛋白的熒光及電化學(xué)。首先借助于聚陽離子電解質(zhì)PDDA能夠在導(dǎo)電玻璃上將金膠納米粒子在ITO芯片上被成功吸附，之后在金膠納米離子上固定羊抗人IgG抗體，再實施封閉處理之后芯片則能夠和檢測出現(xiàn)抗原反應(yīng)，并和量子點標(biāo)記的鼠抗人IgG抗體反應(yīng)。在以上反應(yīng)結(jié)束后可以進(jìn)行熒光及電化學(xué)方式檢測。其中電致化學(xué)發(fā)光則是有效結(jié)合電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光的檢測方法，應(yīng)用也比較廣泛。量子點特點則為熒光特性獨特以及生物相容性好，在其應(yīng)用過程中將硫基乙酸作為穩(wěn)定劑，則能夠成功合成水溶性Cds納米晶體。在對進(jìn)行分析過程中，發(fā)現(xiàn)水溶液中會出現(xiàn)電致化學(xué)發(fā)光行為。采用自組裝方式和納米金放大技術(shù)相結(jié)合，在金電極上修飾Cds納米晶，則能夠構(gòu)建新型ECL免疫傳感器，主要是在低濃度脂蛋白檢測中應(yīng)用。這一材料在實際應(yīng)用中具有良好的電化學(xué)發(fā)光以及生物相容性，能夠進(jìn)一步構(gòu)建量子點電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器，主要應(yīng)用在人免疫球蛋白靈敏性檢測工作中。
2納米材料在聚合物電致發(fā)光中的應(yīng)用
聚合物電致發(fā)光在應(yīng)用中主要優(yōu)勢為：主動發(fā)光，并且效率高、寬視角、能耗低、厚度小、操作簡單等等，在照明及平板顯示領(lǐng)域中具有良好的應(yīng)用發(fā)展前景，目前已經(jīng)在全世界科學(xué)界及工業(yè)界得到普遍關(guān)注。聚合物電致發(fā)光二極管的首次研究則是在1990年，英國機(jī)劍橋大學(xué)首次報道關(guān)于聚對苯乙烯的聚合物電致發(fā)光二極管，在采用溶液法將聚合物前驅(qū)體進(jìn)行成膜之后，放置在2500C真空高溫環(huán)境中進(jìn)行處理，最終為均勻、致密的PPV薄膜，器件的陰陽極分別是Al和ITO，在＜14V電壓環(huán)境下則能夠?qū)崿F(xiàn)外量子效率0.05%黃綠光發(fā)光。PPV則屬于是難溶性共軛聚合物，在其處理過程中一定要選用前驅(qū)體方式進(jìn)行旋涂成膜，在操作過程中工藝復(fù)雜，同時薄膜質(zhì)量也比較差。在1991年美國加州大學(xué)則提出可通行的甲氧基異辛氧基對聚對苯乙烯進(jìn)行取代，能夠在ITO上旋涂MEH-PPV溶液成膜，從而實現(xiàn)發(fā)光層，即將金屬Ca作為陰極則能夠得到1%橘紅色發(fā)光二極管，這一工藝在操作中簡單，同時具有高發(fā)光率聚合物電致發(fā)光二極管。1992年則進(jìn)一步采用柔性塑料基底則可彎曲聚合物電致發(fā)光二極管，從而呈現(xiàn)出聚合物電致發(fā)光二極管最為迷人一面。在近些年來，世界對聚合物電致發(fā)光材料及期間的研究一直都比較重視，并取得顯著進(jìn)步，但是就目前而言不管是聚合物電致發(fā)光器件穩(wěn)定性還是效率上均還有進(jìn)步空間，因此還需要進(jìn)一步加大研究。
3納米材料在化學(xué)發(fā)光免疫分析中的應(yīng)用
化學(xué)發(fā)光免疫分析則是化學(xué)發(fā)光法和免疫分析法兩者的結(jié)合產(chǎn)物，在納米技術(shù)迅速發(fā)展進(jìn)程中，納米材料的無機(jī)有機(jī)自組裝復(fù)合研究也發(fā)展迅速。其中在研究過程中將納米材料作為新型免疫標(biāo)記物，和高效液相色譜分析法、分子印跡法以及毛細(xì)管電泳分析法等一系列現(xiàn)代分離技術(shù)及分析方法相結(jié)合，則能夠有效構(gòu)建具有良好靈敏度及特異度的納米材料化學(xué)發(fā)光免疫分析法，不但能夠廣泛應(yīng)用在藥物檢測中，同時也能夠應(yīng)用在蛋白質(zhì)、DNA以及疾病病原體等一系列檢驗中。同時在研究過程中納米標(biāo)記探針的出現(xiàn)，則進(jìn)一步讓人們在納米尺度上分析及檢測生命機(jī)體痕量物質(zhì)，在生命活動機(jī)理以及疾病早期診斷預(yù)防中均具有重要應(yīng)用價值。和納米材料在魯米諾體系化學(xué)發(fā)光免疫反應(yīng)中的參與作用具有差異，其應(yīng)用則可以將其分成：催化增敏型、標(biāo)記溶出型、能量受體型以及負(fù)載平臺型四種，不同類型均具有不同作用。
4結(jié)語
具有發(fā)光功能化的納米材料的研究越來越全面深入，在此過程中我們能夠發(fā)現(xiàn)在納米材料及其技術(shù)發(fā)展進(jìn)程中，不管是藥物、醫(yī)學(xué)，還是食品以及環(huán)境等領(lǐng)域，化學(xué)發(fā)光免疫分析法已經(jīng)廣泛應(yīng)用在有機(jī)物和無機(jī)物微量及痕量分析工作中。在化學(xué)發(fā)光免疫分析法中，納米材料的參與作用則是高效催化劑，不管是納米生物探針還是量子點熒光劑等方面均具有廣闊應(yīng)用前景。同時在其發(fā)展進(jìn)程中和一系列現(xiàn)代分析技術(shù)結(jié)合應(yīng)用之后，則能夠?qū)瘜W(xué)發(fā)光分析方法的靈敏度、穩(wěn)定性以及選擇性顯著提升，同時還能夠進(jìn)一步擴(kuò)大其檢測方法的應(yīng)用范圍。同時在采用以上一系列方法制成的化學(xué)發(fā)光分析儀，具有良好的自動化水平，同時操作簡單，能夠有效實現(xiàn)實時監(jiān)測，特別是在環(huán)境監(jiān)測、醫(yī)學(xué)監(jiān)測以及食品安全監(jiān)測等方面具有良好的應(yīng)用前景，也有助于進(jìn)一步促進(jìn)化學(xué)發(fā)光免疫分析法的研究及發(fā)展。以上本文關(guān)于發(fā)光功能性納米材料的應(yīng)用有簡要分析，以能夠為同行工作研究者提供一定的參考資料，
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關(guān)鍵詞：全自動化學(xué)發(fā)光儀 灰塵 污垢
化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)基于放射免疫分析的基本原理，化學(xué)發(fā)光免疫分析是將發(fā)光物標(biāo)記在抗原或抗體上，免疫反應(yīng)結(jié)束后，在電能的作用下發(fā)光，通過測量發(fā)射光強(qiáng)度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測定待測物的濃度[1]。全自動化學(xué)發(fā)光免疫具有操作簡便、速度快、結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好的特點。但全自動儀器要求的環(huán)境高，灰塵、污垢直接影響儀器性能。除塵、除垢是儀器維護(hù)的重要環(huán)節(jié)，如處理不當(dāng)儀器就會出現(xiàn)故障，影響儀器的使用與壽命，同時直接影響實驗結(jié)果準(zhǔn)確性。
1.除塵
現(xiàn)在國內(nèi)常用的貝克曼、雅培、羅氏等幾種化學(xué)發(fā)光儀在結(jié)構(gòu)上有一定的共性，主要分為樣本系統(tǒng)、試劑系統(tǒng)、清洗系統(tǒng)、孵育系統(tǒng)和檢測系統(tǒng)。這些系統(tǒng)是集光學(xué)、機(jī)械、電路控制于一體，加樣有精確的定量、移動有精準(zhǔn)的定位?；覊m多為帶有微量靜電的微小塵粒，飄浮于空氣中，隨氣流而動，幾乎無處不在、無孔不入?；覊m附著在加樣定位器上影響加樣準(zhǔn)確性；附著在移動定位器上不能準(zhǔn)確移位，造成卡管、卡機(jī)現(xiàn)象；附著在移動部件上會增大磨損；附著在電路控制板，嚴(yán)重者會造成短路、漏電，使儀器出現(xiàn)故障。儀器吸附較多灰塵，不僅影響儀器的性能，縮短使用壽命，還直接影響實驗效果。
1.1干燥的灰塵 主要附著在儀器的表面、定位感應(yīng)器、電路板及散熱器等。清除干燥的灰塵的方法很多，主要看灰塵附著表面的狀況及其灰塵附著的程度而定。儀器表面的灰塵可用干布擦拭，儀器表面的散熱孔用軟毛刷掃除；對儀器內(nèi)部如電路板、散熱器及風(fēng)扇等的灰塵可用洗耳球、打氣筒吹氣，也可用軟毛刷掃除；不過位置感應(yīng)器、發(fā)光檢測器等光學(xué)部件，用上述方法除塵可能會損壞儀器，此時應(yīng)采用特殊除塵方法除塵，如用沾有無水酒精的棉球擦拭。
1.2潮濕的灰塵 主要附著在儀器的溫育槽、樣本移動推進(jìn)器及反應(yīng)杯移動的部位，由于此處物件經(jīng)常平行移動或旋轉(zhuǎn)，可能有液體流出，使空氣灰塵受潮結(jié)成垢塊，容易造成卡管或移動錯誤，造成故障。清除這些部位的灰塵應(yīng)采用沾有無水酒精或乙醚的棉球進(jìn)行拭擦。
2.清洗
化學(xué)發(fā)光儀基本上可分為電路、液路兩大部分，電路部分可采用除塵的辦法清除灰塵，而液路部分基本上是采用清洗的方法。儀器在長期使用中導(dǎo)液管會出現(xiàn)水垢沉積、漏液等現(xiàn)象；吸液及給液針頭由于長期與酸堿及蛋白質(zhì)接觸，清洗不及時會產(chǎn)生銹蝕、蛋白沉淀，這些污垢對儀器的壽命、性能會產(chǎn)生極其不良的影響。清洗的目的就在于除去儀器上的污垢，保持儀器的潔凈，從而保證其準(zhǔn)確性。通常儀器的清洗有兩種方法，一是機(jī)械清洗方法，即用鏟、刮、刷等方法清洗；二是化學(xué)清洗方法，即用各種化學(xué)去污溶劑清洗。具體的清洗方法要依污垢附著表面的狀況以及污垢的性質(zhì)決定。
2.1液路導(dǎo)管的清洗
化學(xué)發(fā)光儀器中液路很多，有樣本、試劑、發(fā)光底物、清洗液等液路，這些管路基本是由橡膠和塑料組成導(dǎo)管系統(tǒng)。橡膠和塑料作為一種高分子有機(jī)物，酸堿、蛋白質(zhì)和有機(jī)溶劑在其內(nèi)壁流動，會出現(xiàn)蛋白及污垢沉積現(xiàn)象，使液體流動不暢或吸液量不足，影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。清洗這些管路一般先用“84”消毒液或次氯酸鈉等堿性液體浸泡管內(nèi)壁，除掉管壁上的沉積物，后用清水沖洗（發(fā)光底物管道只能用水沖洗）。
2.2金屬表面銹蝕的清洗
給儀器眾多液路提供動力的系統(tǒng)，是由無數(shù)個電動機(jī)組成。它們都是分布在各液路的接口處，接口由橡膠和塑料組成，由于長期的酸堿及有機(jī)物的浸泡，橡膠和塑料會出現(xiàn)老化，液體漏出腐蝕金屬表面，輕微的影響儀器正常運(yùn)行，嚴(yán)重的使儀器癱瘓、報廢。這類銹蝕的清除若操作稍有不當(dāng)，反會損壞零部件，特別是傳感器接頭等精密零部件。因此在實驗室，除銹不宜用化學(xué)方法，而應(yīng)采用機(jī)械除銹方法，即先用鏟、剔、刮等方式將零部件上的銹蝕層塊除去，再用砂紙砂磨、打光，最后用無水酒精擦拭，如有可能涂上保護(hù)層。
2.3吸液及給液針頭清洗
吸液及給液針頭一般由合金構(gòu)成，它們耐酸堿、抗腐蝕，但由于其內(nèi)壁細(xì)小同時又要求吸液和給液精確，因此對它們的完好性要求很高。吸液針頭主要是吸標(biāo)本和試劑，標(biāo)本中含大量的蛋白質(zhì)，會產(chǎn)生蛋白沉積厚化管壁，影響吸量的準(zhǔn)確；由于離心不當(dāng)標(biāo)本有絮狀物時會堵塞針管，直接影響檢測。試劑含酸堿，特別是含鐵微粒會吸附在針管內(nèi)，長期沉積影響檢測準(zhǔn)確性。吸液針頭的清洗，主要采用儀器所配置的針?biāo)ⅲ浜蠠o水酒精沖刷，最后用蒸餾水清洗。給液針頭主要是提供沖洗液和發(fā)光底物，相對吸液針頭要好些，但由于長期使用，會產(chǎn)生濃積現(xiàn)象而影響檢測，它們的清洗主要用蒸餾水清洗就行了。
儀器維護(hù)工作的目的是減少或避免偶然性故障的發(fā)生，延緩必然性故障的發(fā)生，并確保其性能的穩(wěn)定性和可靠性。全自動免疫發(fā)光檢測系統(tǒng)，集電路與液路于一體，在使用中，正確及時的保養(yǎng)和維護(hù)，定期對儀器進(jìn)行除塵除垢，是非常必要的。對儀器的正常運(yùn)行，保證結(jié)果準(zhǔn)確可靠，杜絕因保養(yǎng)不到位引發(fā)的故障，都是有意義的。
【關(guān)鍵詞】發(fā)光免疫法；甲狀旁腺素；慢性腎衰
慢性腎功能衰竭（CRF）發(fā)展到一定階段時，腎功能嚴(yán)重不足，最終會導(dǎo)致尿毒癥。尿毒癥最常見的并發(fā)癥是繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)。目前國內(nèi)有多種檢測方法，但比較起來，甲狀旁腺素的全段測定準(zhǔn)確性最高。本文采用化學(xué)發(fā)光免疫法檢測170例CRF患者及305例健康人的血清PTH以及其他生化指標(biāo)，并努力探討其在慢性腎衰治療中的臨床意義。
1資料與方法
1.1一般資料正常對照組：均來自本院體檢科，正常健康人305例，（男172例，女133例），年齡（28-65）歲，平均年齡（41±18.5）歲。
腎功能不全失代償期組：65例（男45例，女20例），年齡（32-71）歲，平均（42.5±5.5）歲。
腎功能衰竭期組：59例（男33例，女26例），年齡（35-75）歲，平均（45.5±5.8）歲。
尿毒癥期組：46例（男27例，女19例），年齡（36-7）歲，平均（48.5±5.5）歲。
1.2方法
1.2.1標(biāo)本采集清晨7：00-8：00，采病人空腹靜脈血3ml，在兩小時內(nèi)分離血清，24小時內(nèi)完成檢測。
1.2.2試劑和方法美國貝克曼ACCESS 2全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀測定甲狀旁腺素（PTH），試劑由貝克曼公司提供；血尿素氮和血肌酐的測定在貝克曼DX-600全自動生化分析儀上完成，試劑采用北京九強(qiáng)公司生化試劑。
1.3統(tǒng)計學(xué)方法實驗數(shù)據(jù)以χ±s表示，組間比較采用單因素方差分析，兩組比較采用q檢驗，用SPSS12.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。
2結(jié)果
腎功能不全失代償期組、腎衰竭期組、尿毒癥組CR、Urea、PTH與正常對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異（p均
3討論
3.1PTH的臨床意義PTH是甲狀旁腺主細(xì)胞合成及分泌的含84個氨基酸單鏈多肽，相對分子質(zhì)量9500。主要是通過對骨和腎臟的作用來調(diào)節(jié)體內(nèi)鈣磷代謝，總的效應(yīng)是升高血鈣和降低血磷，是調(diào)節(jié)血鈣和血磷的重要激素[1-2]。正常人血清PTH隨血鈣水平調(diào)節(jié)而釋放，呈日節(jié)律波動，濃度范圍為12-88pg/ml。
PTH釋放入血后稱全段PTH 1-84，有生物活性但極不穩(wěn)定，主要裂解為C端PTH53-84（C-PTH）和中段PTH18-48或28-48（M-PTH），N端PTH1-34（N-PTH），PTH的生物活性取決于N端的1-27個氨基酸殘基。所i-PTH和N-PTH、18-48M-PTH有生物活性，但由于N-PTH、M-PTH與PTH受體的結(jié)合能力遠(yuǎn)不如i-PTH[3]，所以真正起作用的是i-PTH。
腎功能衰竭患者PTH升高的原因，在CRF早期就可以觀察到血清PTH明顯上升，腎功能衰竭者PTH升高的主要機(jī)制有腎功能不全，以及由腎功能不全引發(fā)的磷潴留、低血清鈣和活性維生素D3分泌減少等因素，刺激PTH分泌增加以及腎功能不全本身導(dǎo)致的PTH的排泄減少。
3.2分泌增加CRF初期時腎磷排出減少導(dǎo)致血磷升高，又引起血鈣降低，研究證實，血磷升高、血鈣降低是引起甲狀旁腺功能亢進(jìn)及高PTH血癥的獨立及重要因素[4-5]。故磷潴留對于腎衰者PTH的升高其關(guān)鍵作用。CRF隨著透析時間的延長，PTH分泌增加，導(dǎo)致血鈣上升，引起降鈣素（CT）分泌增加，使血鈣慢性降低，進(jìn)一步使PTH增高。
3.3排泄減少在CRF尤其是ESRD時腎代謝功能減弱，導(dǎo)致PTH代謝走低，隨病情加劇PTH的濾過率和排泄均減少，形成高PTH血癥。
3.4PTH升高對機(jī)體的影響PTH升高會引起腎性骨病，即甲狀旁腺功能亢進(jìn)性骨病，也稱之為高轉(zhuǎn)化型骨病。PTH可以直接或間接地刺激破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞，使其數(shù)量增加，活性加強(qiáng)。
3.5PTH與Urea、CR的關(guān)系腎功能不全失代償期組、腎衰竭期組、尿毒癥組CR、Urea、PTH與正常對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異（p均
4結(jié)論
慢性腎衰竭患者的主要原因是甲狀旁腺素過度分泌PTH，引起腎性骨病等多種并發(fā)癥的發(fā)生。隨著腎功能的下降，血中PTH也隨著增高，降低甲狀旁腺對多種代謝物的降解，提高其對毒素的敏感性，刺激甲狀旁腺大量分泌PTH，導(dǎo)致PTH分泌亢進(jìn)。通過對上述討論，化學(xué)發(fā)光免疫法測定血清PTH準(zhǔn)確，有價值。
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【關(guān)鍵詞】化學(xué)發(fā)光免疫；應(yīng)用；發(fā)展
中圖分類號：C911文獻(xiàn)標(biāo)識碼： A
一、前言
化學(xué)發(fā)光免疫分析方法靈敏度高、適用范圍廣泛受到了人們的認(rèn)可，在醫(yī)學(xué)、食品、藥品等眾多領(lǐng)域廣泛使用。傳統(tǒng)的免疫分析需要的培育時間長，因此，提高分析的時間和效率是當(dāng)前研究人員重點解決的問題。
二、化學(xué)發(fā)光免疫分析法
化學(xué)發(fā)光分析是根據(jù)化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的輻射光的強(qiáng)度來確定物質(zhì)含量的分析方法。化學(xué)發(fā)光免疫分析是將化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)與免疫反應(yīng)相結(jié)合，用化學(xué)發(fā)光相關(guān)的物質(zhì)標(biāo)記抗體或抗原，與待測的抗原或抗體反應(yīng)后，經(jīng)過分離游離態(tài)的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物，加入化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)的其它相關(guān)物產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，進(jìn)行抗原或抗體的定量或定性檢測?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析中使用最多的4類標(biāo)記物為魯米諾、異魯米諾及其衍生物，吖啶酯衍生物，過氧化物酶和堿性磷酸酶。
以酶為標(biāo)記物的化學(xué)發(fā)光仍然是化學(xué)發(fā)光免疫分析的主流，辣根過氧化物酶(HRP)與堿性磷酸酶(ALP)是兩種常見的標(biāo)記酶，均有其相應(yīng)的化學(xué)發(fā)光底物，在臨床檢驗中有廣泛應(yīng)用，開發(fā)催化活性更高、穩(wěn)定性更好、發(fā)光動力學(xué)曲線更符合免疫分析的酶和底物是化學(xué)發(fā)光免疫分析的研究熱點之一。
三、PEC免疫分析的基本裝置
PEC分析需要在光電檢測系統(tǒng)中實現(xiàn).該系統(tǒng)主要包括激發(fā)光源、吸收池以及三電極體系的電化學(xué)裝置.在光激發(fā)條件下,電解質(zhì)溶液中光電活性材料的表面將發(fā)生電荷的分離與躍遷,電極表面發(fā)生一定的氧化還原反應(yīng)從而在外電路產(chǎn)生電流,這一過程由電化學(xué)裝置所記錄并用于特定檢測對象的測定.
PEC免疫分析的基本原理是基于免疫反應(yīng)前后光電流信號的變化。在一個簡單典型的PEC免疫系統(tǒng)中,免疫探針分子(通常是特異性的抗體或抗原)首先被固定在光電換能器(transducer)表面作為識別元件(recognitionelement),抗原(或抗體)作為待測物與探針分子在電極表面形成免疫復(fù)合物,導(dǎo)致光電流信號的增強(qiáng)或降低.本節(jié)將介紹PEC免疫傳感界面的基本構(gòu)建過程,主要包括光電極的選擇與制備、免疫探針分子的固定等重要步驟。
1、電極材料的選擇與制備
PEC檢測的基本模式?jīng)Q定了其在免疫傳感中必須使用特定的光電活性電極.而免疫探針分子則在這種電極表面固定,隨后的免疫識別反應(yīng)也在該表面發(fā)生,所以光電活性材料的選擇和制備與免疫傳感的檢測性能密切相關(guān).理想的光電活性電極應(yīng)該具有較低的電子空穴復(fù)合率,以便獲得穩(wěn)定的光電流密度.一般而言,在PEC免疫傳感中,光電活性電極的選擇主要取決于所設(shè)計的檢測路徑與傳感過程.常用的電極有整體電極和氧化銦錫(ITO)修飾電極.整體電極如二氧化鈦納米管陣列電極(TiO2NTs),ITO修飾電極則由ITO基底和光電修飾材料兩部分構(gòu)成.
2、免疫探針分子的固定
電極制備好后,免疫探針分子的固定是傳感器制備中重要的一步,直接決定著傳感器性能的優(yōu)劣.原則上,電化學(xué)免疫傳感器中可以使用的固定方法都可以用于PEC傳感.但因后者使用的電極材料有所不同,所以具體采用的固定方法往往和電極材料的種類以及實驗的設(shè)計有關(guān).另外,為了保證探針分子的準(zhǔn)確定位與吸附以使探針分子在固定后保持較高的活性和穩(wěn)定性并形成具有適宜厚度、密度、多孔性的敏感膜,同時為了避免非特異性吸附和結(jié)合的干擾,在固定這一步驟中需對電極的表面化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行嚴(yán)格控制,因此需要對實驗條件進(jìn)行多重優(yōu)化以便確定最佳條件.具體來講,考慮到免疫探針生物分子具有不穩(wěn)定性,其固定需要滿足以下兩個條件:
(1)固定過程條件溫和,防止生物分子變性,而且固定在電極表面后也能保持良好的活性;
(2)固定后,敏感層與電極表面接觸緊密,同時具有良好的穩(wěn)定性和耐用性。
四、光電免疫檢測的分類與傳感機(jī)理
和其他的免疫分析方法一樣,PEC免疫分析也可以簡單地分為非標(biāo)記型和標(biāo)記型兩大類.結(jié)合不同的實驗設(shè)計,相應(yīng)的傳感機(jī)理也有所區(qū)別.
1、非標(biāo)記型光電免疫傳感器
非標(biāo)記型光電免疫傳感器通過直接測定抗原抗體免疫復(fù)合物形成時的光電流信號的變化來確定待測物的濃度.在非標(biāo)記型光電免疫傳感中,由于省去了對待測物的標(biāo)記過程,且樣品前處理過程簡單,極大地簡化了制備和操作步驟,因此該類型的相關(guān)研究工作在免疫傳感器領(lǐng)域一直具有不可取代的優(yōu)勢.但是,由于其檢測原理大多基于免疫復(fù)合物形成前后所產(chǎn)生的位阻效應(yīng)變化,因此檢測信號的變化幅度往往非常有限,在檢測靈敏度方面尚有待提高.目前對非標(biāo)記型光電免疫傳感器的研究工作主要側(cè)重在對新型光電基底的利用和目檢測物的多樣化.Cosnier的非標(biāo)記型PEC免疫工作中,釕聯(lián)吡啶配合物上被衍生連接了吡咯和生物素,然后利用吡咯的電聚合作用實現(xiàn)了光電物質(zhì)在電極表面的固定.然后通過生物素-親和素的連接作用,將標(biāo)記有生物素的霍亂毒素固定到光電物質(zhì)表面.當(dāng)向溶液中加入待測的霍亂毒素抗體(anti-choleratoxinantibody)時,形成的免疫復(fù)合物在光電物質(zhì)表面產(chǎn)生更強(qiáng)的位阻效應(yīng),阻礙電子受體向電極擴(kuò)散,從而導(dǎo)致光電流降低.該方法很好地實現(xiàn)了霍亂毒素抗體的免疫測定,檢測限可以達(dá)到0.5μg/mL。
2、標(biāo)記型光電免疫傳感器
非標(biāo)記型免疫分析法雖然有著很好的簡易性,但是由于其負(fù)載量低以及無法實現(xiàn)信號放大,它在檢測靈敏度方面仍然需要改進(jìn).在此情況下,標(biāo)記型免疫傳感分析應(yīng)運(yùn)而生.在不同的檢測系統(tǒng)中,可以通過標(biāo)記引入信號分子或?qū)崿F(xiàn)信號放大.具有催化活性的酶分子因為易于與抗體或抗原結(jié)合,且可在短時間內(nèi)將大量底物分子轉(zhuǎn)化為具有電化學(xué)活性的產(chǎn)物,因此常被用做標(biāo)記物.常用的標(biāo)記酶有葡萄糖氧化酶(GOx)、辣根過氧化物酶(HRP)與堿性磷酸酶(ALP)。
最近,基于光電化學(xué)、酶聯(lián)免疫方法和生物催化沉積的協(xié)同作用,本課題組報道了用HRP標(biāo)記的放大型PEC免疫分析方法.在CdSQDs修飾的ITO電極表面,通過免疫反應(yīng)形成夾心結(jié)構(gòu)Ab1-Ag-Ab2-HRP免疫復(fù)合物,然后利用BCP反應(yīng)在電極表面形成不溶物覆蓋層.此外,因為HRP在410nm的實驗條件下有很強(qiáng)的光吸收性質(zhì),所以在該體系中HRP除了引發(fā)BCP反應(yīng),還能夠競爭性的吸收入射光,協(xié)同提高了檢測靈敏度.該工作以小鼠IgG為模型分子,實驗結(jié)果表明可以實現(xiàn)對待測物的高靈敏檢測.因為很多種酶都可以被引入該系統(tǒng)并且引發(fā)相關(guān)BCP反應(yīng),所以本工作為發(fā)展高靈敏性的PEC免疫分析方法提供了一種新思路.基于該工作結(jié)合納米金標(biāo)記放大技術(shù),我們進(jìn)而實現(xiàn)了對前列腺腫瘤標(biāo)記物(prostate-specificantigen)的高靈敏檢測。
五、發(fā)展與展望
化學(xué)發(fā)光免疫分析法具有選擇性好、靈敏度高、分析速度快、設(shè)備簡單等優(yōu)點，近年來在環(huán)境、臨床、食品、藥物檢測中得到了廣泛運(yùn)用。實際檢測常常需要對大量、復(fù)雜、低豐度的樣品進(jìn)行測定，因而化學(xué)發(fā)光免疫分析法逐漸向快速、高通量、高靈敏檢測的方向發(fā)展。本文總結(jié)了近幾年化學(xué)發(fā)光免疫分析法的應(yīng)用進(jìn)展，涉及到降低溫育時間，多組分檢測，以及信號放大技術(shù)。這些例子都證明了化學(xué)發(fā)光免疫分析法具有廣泛的應(yīng)用前景和可操作性。為了更好地適應(yīng)臨床、環(huán)境等領(lǐng)域的實際應(yīng)用，需要大力發(fā)展微型化、集成化和自動化的化學(xué)發(fā)光免疫分析儀器。隨著分子生物學(xué)及納米與傳感技術(shù)的進(jìn)步，新的化學(xué)發(fā)光免疫分析原理與高靈敏的免疫分析方法將得到不斷發(fā)展，開發(fā)催化活性更高、穩(wěn)定性更好、發(fā)光動力學(xué)曲線更符合免疫分析的酶和底物并推廣到臨床檢測，發(fā)展新型標(biāo)記技術(shù)用于信號放大，建立化學(xué)發(fā)光免疫分析新方法，都將是未來的發(fā)展方向及研究重點。
六、結(jié)束語
隨著科技水平的發(fā)展和進(jìn)步，化學(xué)光電免疫分析方法也將進(jìn)一步完善，并發(fā)揮更大作用，推動相關(guān)行業(yè)的快速發(fā)展和進(jìn)步。
參考文獻(xiàn)
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關(guān)鍵詞：時間分辨熒光免疫法；酶聯(lián)免疫吸附法；放射免疫法；化學(xué)發(fā)光法
作為傳染科臨床較為常見的傳染病之一，乙型肝炎的發(fā)病率近年來逐漸升高，目前為止，全球大概有20億左右的人口感染乙肝病毒，因陰性肝炎病毒感染導(dǎo)致死亡的人次大概100萬，所以，及時、準(zhǔn)確的診斷對于乙型肝炎患者有著非常重要的臨床意義[1]。
1資料與方法
1.1一般資料 選取我院傳染科2014年1月～12月來我院門診體檢的1343例乙型肝炎患者，其中男性患者709例，女性患者634例，年齡在26～76歲，平均年齡（45.3±8.3）歲，病程（6.3±1.3）年。乙型肝炎患者乙肝五項指標(biāo)的診斷標(biāo)準(zhǔn)以標(biāo)準(zhǔn)的Abbot藥盒的檢驗結(jié)果作為"金標(biāo)準(zhǔn)"，4種不同的乙肝五項指標(biāo)檢測法的檢驗結(jié)果分別和標(biāo)準(zhǔn)的Abbot藥盒的檢驗方法相比較，對照其靈敏度、符合率和特異度。
1.2檢測方法 對1343例乙型肝炎患者于清晨進(jìn)行空腹采血，采取5ml靜脈血液，自然存放2h后，應(yīng)用300r/s離心15min，分離血清，放置于零下20℃的環(huán)境進(jìn)行保存。分別應(yīng)用時間分辨熒光免疫法（SYM-B10型時間分辨熒光儀由上海新波生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，試劑由上海新波生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)）、酶聯(lián)免疫吸附法（酶免儀由北京普朗新技術(shù)公司生產(chǎn)，試劑盒由上海科華生物工程實業(yè)有限公司生產(chǎn)）、放射免疫法（FJ-2001型Y-免疫計數(shù)器由西安262工廠生產(chǎn)，檢驗試劑由濰坊3V生物有限公司生產(chǎn)）、化學(xué)發(fā)光法（Axspm化學(xué)發(fā)光分析儀和檢測試劑均由美國雅培公司生產(chǎn)）對血清進(jìn)行檢測，檢測過程中應(yīng)嚴(yán)格根據(jù)試劑盒的說明書執(zhí)行操作。Abbot標(biāo)準(zhǔn)藥盒由美國sigma公司生產(chǎn)。
1.3統(tǒng)計學(xué)分析 采用IBM SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料用x±s表示，觀察組和對照組組內(nèi)、組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用χ2檢驗，P
2結(jié)果
檢驗結(jié)果如表1所示，將4種乙型肝炎乙肝五項指標(biāo)的檢測方法的檢測結(jié)果分別與Abbot標(biāo)準(zhǔn)藥盒法檢驗結(jié)果相對比，放射免疫檢測法與標(biāo)準(zhǔn)藥盒的符合率為97.3%，靈敏度為97.3%，特異度為99.1%；酶標(biāo)檢測法與標(biāo)準(zhǔn)藥盒的符合率為93.5%，靈敏度為93.5%，特異度為99.1%；時間分辨熒光免疫檢測法與標(biāo)準(zhǔn)藥盒的符合率為99.6%，靈敏度為99.6%，特異度為99.3%；化學(xué)發(fā)光檢測法與標(biāo)準(zhǔn)藥盒的符合率為98.8%，靈敏度為98.8%，特異度為99.2%。
3討論
相關(guān)文獻(xiàn)顯示，臨床對于乙型肝炎患者的診斷通常應(yīng)用乙肝五項的檢測結(jié)果進(jìn)行判定，作為乙肝病毒核心抗原的一部分，e抗原具備可溶性，和乙型肝炎病毒感染的相關(guān)性良好，可以作為判定乙型肝炎患者乙肝病毒傳染性強(qiáng)弱的標(biāo)準(zhǔn)[2]。乙肝表面抗體對于乙型肝炎病毒感染的患者具備保護(hù)的作用，具有定量價值，可以反應(yīng)患者病情的變化；核心抗體在乙型肝炎患者感染乙肝病毒后最早出現(xiàn)，可以作為乙肝早期檢測的特征性抗體[3]。放射免疫檢測的精度可以達(dá)到10～12mol/L，相對于其他檢測方式更為精確，但是由于該檢測方式所使用的放射劑會對患者的身體健康造成危害，且操作較為復(fù)雜，出檢驗報告的時間較長，因此難以在臨床廣泛應(yīng)用[4]。酶聯(lián)免疫吸附法可以有效避免對患者的身體健康危害及對環(huán)境的污染，而且操作更為簡單，在臨床應(yīng)用較為廣泛，但酶聯(lián)免疫吸附法的靈敏度和放射免疫檢測法相比較低，容易發(fā)生假陽性或漏檢[5]?；瘜W(xué)發(fā)光檢測法對于單個血清樣本的檢測速度較快，比較適合做急診檢驗，靈敏度較高，精確度和自動化程度也較高，但化學(xué)發(fā)光檢測法儀器發(fā)光的過程比較短，不能對血清樣品進(jìn)行重復(fù)檢驗，所需要的成本較高，不適合在臨床廣泛應(yīng)用。時間分辨熒光免疫技術(shù)相對于其他三種檢測方式特異性最高，可以對樣本進(jìn)行重復(fù)檢測且穩(wěn)定性較好，精度更高，雖然時間分辨熒光免疫技術(shù)目前為止在臨床沒有得到廣泛應(yīng)用，但相對于其他三種檢測方式，該檢測方式對于乙肝五項指標(biāo)的檢測更具有臨床意義。本次研究顯示，時間分辨熒光免疫檢測方法相對于其他三種檢測方法對于乙肝五項指標(biāo)的檢驗符合率、敏感度和特異度更高，和相關(guān)文獻(xiàn)研究相似，具有更高的臨床應(yīng)用價值。
參考文獻(xiàn)：
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1.武漢市普愛醫(yī)院檢驗科，湖北武漢 430033；2.武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，湖北武漢 430071
[摘要] 目的 分析化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法在丙肝病毒抗體檢測中的應(yīng)用價值。方法 同時應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫吸附法檢測60例丙肝確診感染者和100例健康體檢者的抗丙型肝炎病毒抗體，計算其陰性符合率、陽性符合率以及總符合率，用Kappa檢驗計算待評價診斷一致性。選取化學(xué)發(fā)光法初檢驗結(jié)果為陽性的標(biāo)本100例，按照S/CO.值分為低值組（1<S/CO.<8）和高值組（S/CO.≥8），經(jīng)抗HCV經(jīng)重組免疫印跡試驗（RIBA）對化學(xué)發(fā)光法試劑的檢測界限值進(jìn)行評估。 結(jié)果 ELISA法與化學(xué)發(fā)光法檢測HCV抗體結(jié)果陽性符合率：87.7%，陰性符合率：91.3%，總符合率：90.0%，Kappa 系數(shù)為0.760，兩者具有高度的一致性，兩種方法在常規(guī)臨床檢測中并無明顯差異。陽性低值組中12份標(biāo)本經(jīng)RIBA試劑確證為陽性，而高值組中44份標(biāo)本確證為陽性。結(jié)論 ELISA是目前HCV抗體篩查中較為常用的方法，其試劑盒多為第三代試劑，特異性較好，化學(xué)發(fā)光法近期在HCV抗體篩查中逐漸得到重視，其試劑的靈敏度較高， 兩種試劑均可用于丙型肝炎抗體檢測?；瘜W(xué)發(fā)光法的陽性判定標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)進(jìn)行評估，以提高特異性。
關(guān)鍵詞 丙型肝炎；抗體；化學(xué)發(fā)光；ELISA
[中圖分類號] R446.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742（2014）07（b）－0193-02
[作者簡介] 萬大朋（1982.4-），男，湖北武漢人，學(xué)士，技師，研究方向：檢驗的臨床研究。
[通訊作者] 劉勝武。
丙型肝炎(簡稱丙肝)是嚴(yán)重威脅人類健康的傳染病之一，主要通過血液傳染，我國平均感染率為3.2%，由此估算感染人數(shù)約3 700萬。輸血是丙型肝炎病毒（HCV）的主要傳播途徑，目前研究發(fā)現(xiàn)，除丙型肝炎病毒（HCV）急、慢性期患者外，輸血后許多無癥狀的受血者中也可發(fā)現(xiàn)HCV抗體[1]。當(dāng)前抗-HCV抗體檢測多采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），結(jié)果受抗原、抗體的變異影響較大，且國內(nèi)各類抗-HCV檢測試劑的檢測性能存在較大差異。近期采用化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)檢測抗-HCV抗體的試劑已進(jìn)入我國市場，為分析化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法在丙肝病毒抗體檢測中的應(yīng)用價值。現(xiàn)分析2012年1月—2013年12月間該院收治的同時應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫吸附法檢測60例丙肝確診感染者的臨床資料，報道如下。
1 資料與方法
1．1 一般資料
60例HCV確診感染者血清標(biāo)本來自該院的門診和住院患者，其診斷符合2004年中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會、中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會聯(lián)合修訂的《丙型肝炎防治指南》的有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[1]，其中男性33例，女性27例，年齡18~82歲，平均年齡（39.8±4.3）歲，病程3個月~21年，平均病程（6.5±2.1）年。所有患者均知情同意，簽署知情同意書。100例正常血清標(biāo)本來自該院自愿參與研究的健康體檢者，其中男性36例，女性24例，年齡18~81歲，平均年齡（39.4±3.9）歲。
1．2 儀器與試劑
ELISA法儀器為瑞士FAME全自動酶標(biāo)分析系統(tǒng)，采用廈門新創(chuàng)科技有限公司生產(chǎn)的抗-HCV試劑盒；CLIA法儀器為美國強(qiáng)生Vitros 3600化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，試劑盒為相配套試劑。確認(rèn)試劑（重組免疫印跡法）使用Chiton RIBA－3.0 SIA，Cop Emeryville，CA。
1．3 檢測結(jié)果判斷
ELISA法:以（0.1×陽性對照平均A 值+陰性對照平均A值）確定Cut-off值，以檢測值≥Cut-off值為陽性。CLIA法: S/CO.值≥1為陽性。確認(rèn)試驗：出現(xiàn)2條以上HCV蛋白條帶為陽性。
1．4 方法
同時用ELISA法和CLIA法對160份樣本進(jìn)行抗HCV抗體檢測，按說明書進(jìn)行操作。另選取100份化學(xué)發(fā)光法初檢結(jié)果陽性的標(biāo)本，分為兩組：低值組（1＜S/CO.＜8）和高值組（S/CO.≥8）。對兩者結(jié)果不符的樣本用免疫印記法試劑（HCV RIBA）再次進(jìn)行確認(rèn)，以再確認(rèn)結(jié)果為正確。
1．5 統(tǒng)計方法
用四格表統(tǒng)計臨床數(shù)據(jù)，并計算陰性、陽性以及總符合率，所得數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計學(xué)軟件spss17.0處理，樣本率以χ2檢驗。用Kappa檢驗計算發(fā)光法試劑與ELISA試劑的診斷一致性，按照Kappa系數(shù)大小以極差、微弱、弱、中度、高度和極強(qiáng)對診斷一致性強(qiáng)度進(jìn)行判斷，極差：Kappa系數(shù)＜0；微弱：Kappa系數(shù)0～0.2；弱：Kappa系數(shù)0.21～0.4；中度：Kappa系數(shù)0.41～0.6；高度：Kappa系數(shù)0.61～0.8；極強(qiáng)：Kappa系數(shù)0.81～1.0[2]。
2 結(jié)果
2．1 ELISA和CLIA方法檢測丙型肝炎病毒抗體結(jié)果的符合性
結(jié)果顯示使用傳統(tǒng)ELISA試劑與化學(xué)發(fā)光方法試劑檢測抗HCV抗體的診斷一致性較高，臨床檢測中差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）。見表1。
2．2 化學(xué)發(fā)光法抗-HCV初檢陽性標(biāo)本的RIBA確認(rèn)試驗結(jié)果見表2。
3 討論
目前廣泛使用的第三代HCV抗體ELISA試劑增加了HCV Ns5區(qū)表達(dá)的蛋白作為抗原，大增加了靈敏度和特異性。但臨床使用該類試劑篩檢HCV感染者，仍存在一定數(shù)量的假陽性和假陰性結(jié)果[3]，特別是在HCV低流行率人群中，如無償獻(xiàn)血者，假陽性問題一直比較突出。此外，國內(nèi)常用的HCV抗體酶免試劑皆沒有灰區(qū)的設(shè)定，試劑盒cutoff值計算方法各廠家也都不一致，導(dǎo)致國產(chǎn)試劑盒之間的檢測性能存在較大的異質(zhì)性，亦是假陽性比較多的原因 [4-5]。
在臨床實驗室中檢驗中，需先對使用的方法和程程序進(jìn)行評估，確定其符合要求后才可正式使用。Kappa檢驗是用于分析計數(shù)資料和等級分組資料一致性檢驗中的一種方法，在肝炎病毒血清標(biāo)志物等二分變量（陰性、陽性）檢測中，一般選擇使用使用檢驗法，以判斷不同方法學(xué)是否存在一致性及相關(guān)程度。該文結(jié)果顯示化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫法在丙型肝炎病毒抗體檢測中的Kappa系數(shù)達(dá)到0.76，具有高度一致性，與同類研究報道結(jié)果基本一致[4]，結(jié)果表明兩種試劑均可用于血源篩查、臨床術(shù)前初篩。ELISA試劑的特異性較好，發(fā)光試劑的靈敏度較高，兩種試劑均存在漏檢現(xiàn)象，實際工作中如能聯(lián)合應(yīng)用可提高檢出率[6]。
另外該研究參照美國CDC丙型肝炎實驗導(dǎo)則[7]，使用S/CO.≥8可判斷為陽性作為分組依據(jù)，對發(fā)光法初篩陽性的標(biāo)本再進(jìn)行RIBA確認(rèn)試驗，發(fā)現(xiàn)低值組的陽性率為24%，而高值組的陽性率為88%，提示中國人群的抗HCV陽性預(yù)測值與美國有一定的差異，目前的抗-HCV 診斷試劑盒均采用基因工程或合成多肽抗原，而由于HCV基因易發(fā)生變異，其基因呈現(xiàn)高度異質(zhì)性，編碼氨基酸序列明顯改變，可引起抗原性的改變，現(xiàn)階段試劑的檢測抗原多為2型抗原，而以往的研究發(fā)現(xiàn)，我國HCV患者多為1型，因此當(dāng)前的試劑并不適用于中國所有地區(qū)[4]。提示實驗室應(yīng)對抗HCV試劑的S/CO.比值設(shè)定進(jìn)行評估，使用在所有人群中經(jīng)過驗證的能夠預(yù)測確認(rèn)試驗≥95%陽性率的S/CO.比值作為是否進(jìn)行確認(rèn)試驗的依據(jù)，并設(shè)立一定范圍內(nèi)的灰區(qū)，以達(dá)到靈敏度和特異性的最佳平衡[8]，該研究還提示對初檢呈弱反應(yīng)者有必要進(jìn)行確認(rèn)試驗，跟蹤觀察。
參考文獻(xiàn)
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