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開篇：寫作不僅是一種記錄，更是一種創造，它讓我們能夠捕捉那些稍縱即逝的靈感，將它們永久地定格在紙上。下面是小編精心整理的12篇對實驗動物的認識，希望這些內容能成為您創作過程中的良師益友，陪伴您不斷探索和進步。
關鍵詞：實驗動物學；教學；學習興趣
為了探究生命現象、生命活動的本質，提高人們的生活水平和質量，實驗動物在醫學、藥學、農林學、化學、生物材料科學、醫療器械、國防軍事科學等許多科學研究中起到了非常重要的作用。歷史上人類的許多疾病研究均是通過動物實驗獲得突破的。據統計，在生命科學研究中，動物實驗的課題占到60%以上。100多年來，諾貝爾生理學或醫學獎研究成果有67.5%是使用實驗動物獲得的[1]。因此，上世紀五十年代，在現代科學技術的快速發展下誕生了實驗動物學這門學科。實驗動物學是以實驗動物為對象，對其進行質量控制，并將培育的實驗動物應用于生命科學研究的一門綜合性學科[2]。
生物（醫學）工程專業是生物科學、醫學和工程學交叉融合的一個專業，具有理、工、醫交叉學科特色。本專業要求學生具有較全面的知識結構，因此，在本科生教學環節開設了實驗動物學這門課程。實驗動物學是生物（醫學）工程專業的一門專業基礎課。簡單說，實驗動物學是專門研究實驗動物的標準化和動物實驗的，它涉及到生物學和醫學的各個領域。一方面，隨著實驗動物學的發展，實驗動物品種逐漸標準化和多樣化；另一方面，生物醫學的發展對實驗動物提出更高的要求，促使實驗動物學不斷發展和提高。目前，實驗動物被稱為“最精密的科學儀器”，在生物（醫學）和臨床醫學領域發揮了重要的作用。為了能夠讓學生們更加深入的認識實驗動物的重要性，需要實時思考實驗動物學課程教學方式，建立符合自身條件和要求的教學體系。
1. 教學過程中引入“3R”原則
在實驗動物學課程中，動物福利和實驗設計中，為了保護實驗動物，《動物福利法》提出了“3R”原則，3R是指Replacement（替代）、Reduction（減少）和Refinement（優化），“3R”原則的主要目的是采用其他手段代替實驗動物，盡量減少實驗動物用量，用其它實驗材料如生物醫用材料、細胞等代替實驗動物進行科學研究或教學，設法改良實驗方法減少動物疼痛和不安。
國際上普遍認同將“3R”原則引入到“實驗動物學”教學中[3]。因此，在講課的過程中可以采用下列幾種方式：1）替代。利用多種教學方式代替單一模式教學。課堂上，可以通過展示圖片、播放錄像或影片、展示科研論文、互動討論等方式與理論講解相結合讓學生們認識實驗動物的不同飼養環境、實驗動物操作的技術要點、如何進行實驗動物認知實驗等。這樣就可以代替實驗動物，同時減少了實驗動物使用數量。2）減少。在理論課和實驗課教授時，可以適當的減少理論課的學時，把理論知識進行整合、調整，有重點的針對本學科的特點進行講授。3）優化。在考核方面，減少筆試在考核中的比重，加大學生們平時的實際操作能力訓練和考核比重，優化實驗動物學課程設計和教學評價體系。
2. 擴充實驗課課時安排
由于本課程是我院新安排的課程，目前對本課程安排的課時相對較少，僅有理論課時，而缺少一些動物實驗課時。實驗動物學是一門應用性較強的課程。教學的主要目的是通過實際動手操作，讓學生們認識實驗動物，懂得如何才能培養出標準的實驗動物，怎樣利用他們進行科學研究，通過動物實驗為人類的健康帶來福音。因此，需要在教學的同時進行相應的實驗課或實踐課，讓學生們在實驗課上認識不同的實驗動物，與理論課相呼應，通過實際觀察驗證理論課上的科學理論。另外，讓同學們能夠進行相應的實際動手操作，如實驗動物抓握、固定、標記等簡單的操作，必要的時候可以安排動物解剖、測定分析相應的生物學指標，使學生們切身感受到動物實驗的重要性，真正學到一些實驗技術，達到教學目的。
3. 將科學研究過程融入教學過程之中
王生存等[4]通過問卷調查發現對實驗動物學實驗課感興趣的學生能達到82.5%，無謂心理的學生只有10.8%，其他的學生是因為害怕、恐懼實驗動物而產生畏懼心理，并不是沒有興趣，只要幫助他們克服了心理障礙，他們同樣會對實驗動物產生興趣。
基于此，我們可以把動物實驗科學研究融入到實驗動物學教學中，在教學過程中，可以把老師平時進行的科學研究過程和成果與同學們一起分享，同時在實驗條件允許、經費充足的情況下可以安排設計實驗動物的行為學研究，如大鼠迷宮實驗、位置偏愛實驗、條件反射實驗等等一系列有趣的實驗方法和測定技術，提高學生們對實驗動物的認識。加強動物實驗的實驗設計課程，讓本課程教學實踐與大學生科研訓練計劃（SRTP）相結合，確定不同的實驗目的，由學生們自行選擇合適的實驗動物，進行分組、材料和試劑的準備、實驗期間對動物的觀察、記錄等相關注意事項、實驗結束時實驗動物的處死、生物樣本的采集、保存，結果的測定和分析，書寫實驗報告等。這樣，學生們在實驗和科研過程中就會更加意識到實驗動物和人類一樣也是一種具有行為、認知和神經反應能力的一種動物，具有寵物的一些共性，我們應該倍加的保護、愛護他們，讓他們更好的為人類服務。
4. 結合課程內容使教學過程系統化
實驗動物學是一門系統的課程，包括與實驗動物相關的遺傳學、營養學、生態學、環境學、微生物學和寄生蟲學、人類疾病、法律法規等多方面的知識，近年發展的轉基因動物和克隆動物將分子生物學知識也引入了實驗動物學教學過程中，使得實驗動物學涉及的知識面更寬、更全。其實，不論是環境學、營養學，還是生態學、微生物學和寄生蟲學等等都是緊緊圍繞著實驗動物的生產和動物實驗的需求展開的[5]。教師在教學過程中需要將這些內容聯系貫穿起來，以使學生們在上課期間不覺得本門課程知識點多、散、亂，讓學生們充分認識到這門課程的重要性，激發他們對這門課程的學習興趣和對實驗動物的愛心，使他們愛上實驗動物，愛上這門課程。
在講授理論內容時，課程設計緊緊圍繞實驗動物的標準化為主線，緊緊圍繞著生產和繁殖出合格的實驗動物，分別講授如何控制實驗動物的環境設施、營養、遺傳等方面，實施動物質量控制，并據此制定的相應的法規和標準。在進行實驗課教學時，課程設計圍繞保護動物福利的原則，實行實驗動物的抓取、固定、給藥方法、麻醉及處死等方面的技術操作時，要從內心真正關愛實驗動物，保護實驗動物，盡量減少和減輕他們的疼痛感和痛苦感。
總之，教師在教學過程中需要結合學科特點深入分析教學過程中存在的問題和不足，為滿足學科需求進行相應的調整和改革，創建一攬子計劃來適應現代教學的要求。教學過程中，以學生為本，調動學生的學習積極性，引導他們的學習興趣，以使學生們能夠更好的掌握相關知識。
[參考文獻]
[1]中國實驗動物學會. 加快我國實驗動物科學發展迫在眉睫. 2010中國科協科技工作者建議匯編[C]. 2010.
[2]鄒移海， 徐志偉，蘇鋼強. 實驗動物學[M]. 科學出版社. 北京
[3]梅志強， 王瓊， 鄧莉. 動物福利在研究生實驗動物學教學中的應用初探[J]. 中國比較醫學雜志. 2012，22（3）：76-78.
[4]王生存， 邵義祥. 實驗動物學課程實驗課教學法初探[J]. 實驗動物與比較醫學. 2008，28（1）：49-50.
[5]葉明霞， 孔利佳. 關于我校開展醫學實驗動物學教學現狀的思考[J]. 實驗動物與比較醫學. 2012，32（1）：25-27.
【摘要】
對實驗動物學教學進行了大膽的改革，提出了該課程應注重理論與實踐并重的指導思想。通過改進教學方法，探索適合本學科的教學模式；通過加強實踐操作技能的教育，提高了學生的動手操作能力；通過加強考試考核的改革，培養“高分高能型”的人才。
【關鍵詞】 實驗動物學 中醫藥院校 教學改革
實驗動物學是一門研究實驗動物及動物實驗的綜合性新興學科，它融合了生物學、醫學、獸醫學、遺傳學等諸多學科的知識，具有很強的綜合性和交叉性，同時它的發展又推動了基礎醫學、臨床醫學、預防醫學和中醫藥學的發展，對科學研究尤其是生命科學研究起著越來越重要的作用，因而受到了相關部門的高度重視，也逐步步入了高等醫學院校的課堂，是中醫藥院校多數專業研究生必修的一門基礎課，也是部分中醫、中藥、藥學、生物工程、中西醫結合專業本科生的選修課程［1］。我院在研究生和本科生中開設這門課程也有近十年的歷史，這對于我院普及實驗動物學的有關知識和提高學生的動手能力起到了一定的推動作用。但由于教師隊伍的不專業（多為實驗動物中心的工作人員或病理、生理教研室的教師），加之教學大綱及教學內容的不統一、考核辦法的過時以及該課程是選修課的緣故，使得教學效果不好，流于形式化，達不到預期的目的，對學生動手能力的培養也就無從談起［2］。為此，筆者在實驗動物教學實踐中大膽進行教學改革，更新教學觀念，改革教學模式，改進教學方法與考試考核辦法，在我院中西醫結合專業研究生及中醫、中藥、藥學等本科班教學中取得了較好的效果。
1 更新教育觀念，確立了理論與實踐并重的指導思想
在以前的實驗動物學教學過程中，我們基本上以講授實驗動物學的基本理論為主，忽視了實驗操作和動手能力的培養，學完后即進行理論考試，與當時開設這門課程主要為提高學生綜合素質和科研能力的初衷不符。因為實驗動物學是一門實踐性較強的學科，單純講授理論對于以往很少接觸實驗動物的學生來說，往往非常抽象，效果也不好。因此，在實驗動物學教學過程中，有必要更新教學觀念，確立以理論與實踐并重的指導思想，改過去的以理論學習為主為現在的以理論與實踐相結合為重點，改過去僅重視課堂學習為現在還重視實踐操作，采用更加行之有效的教學方法逐步提高實驗動物學的教學水平和教學質量，為學生進入實驗室和走上社會工作崗位打下良好的基礎。在具體實施過程中，要緊緊圍繞提高學生動手能力為目的這個中心，制訂切實可行的教學計劃，適當減少理論課時數，增加實驗課時數，使實驗課時占到總課時的40%左右。同時豐富教學內容，使實驗教學不單純停留在實驗動物的捉拿、保定、麻醉、采血、給藥等基本操作上，而是把科學設計實驗、選擇合適動物復制中醫證候動物模型進行相關的中醫藥實驗等綜合項目放在學生的實驗課上，確保學生動手能力的提高。
2 豐富教學內容和改革教學方法，探索適合本學科特點的新的教學模式
實驗動物學的主要內容包括如何培養出高質量的符合各種實驗要求的實驗動物以及如何利用這些符合要求的實驗動物合理地設計、開展動物實驗并獲得準確可靠的實驗結果。對于中醫藥院校的畢業生，他們未來大多是實驗動物的使用者。因此，對如何培養標準的實驗動物的內容可略講，而對如何利用實驗動物進行科學實驗的內容要詳講。在教學內容的選擇上根據學生的具體情況要有所側重。對研究生來說，重點要講授實驗動物的選擇和應用、動物模型的復制技術、影響動物實驗效果的因素及其控制、相關的動物實驗方法、最新的法規和動物實驗的進展，增加學生實驗動手的機會，提高實驗課程的深度和難度；對本科生來說，重點要提高學生的學習興趣，著重講述實驗動物學的新技術、新進展（轉基因技術、克隆技術、基因敲除技術）、實驗動物的一般操作技術等。堅持以基礎知識為根本，側重相關知識、前沿知識的原則，通過對實驗動物學知識的學習，使學生對實驗動物的教學內容和方法，對其歷史、現狀、前沿等方面的知識有整體的了解。在教學過程中根據不同的教學內容采用不同的教學方法。除傳統的教學方法以外，還采用演示法、參觀法、實驗法等［3］，以提高教學效果。
2.1 演示法實驗動物學的內容十分豐富，在信息化的今天，實驗動物學課堂教學就不能再停留在單純的黑板加粉筆上，而應該充分利用現代化的教學輔助手段，不然的話會造成教師努力講，學生認真聽，但收效不大的現象，為此，教師在講授這門課程時，不能一味地采用講授、描述等傳統方法幫助學生理解和記憶，還應靈活運用各種現代化的教學輔助手段，如投影、幻燈、多媒體課件等，把要講的內容形象化，視、聽并用，以增強學生的感性認識，同時又有助于調動學生的學習積極性。如介紹實驗小鼠的常用品種、品系時，可以將KM小鼠、DBA小鼠、C57BL/6小鼠、615小鼠的圖片通過多媒體展示出來，并結合圖片介紹它們的生物學特性及在生物醫學中的應用，使學生能形象、直觀地理解和記憶，加深對不同品種、品系小鼠的認識，改變過去認為實驗小鼠就只有單純白色，而沒有黑色、野生色、灰色等的錯誤觀念；再如介紹該學科較前沿的轉基因和克隆技術時，也可以通過多媒體向學生展示嵌合體小鼠、綠色熒光小鼠、移植技術使身上能長出人耳朵的裸鼠及動物無性繁殖（即克隆）的動物，激發學生學習本課程的興趣。
2.2 參觀法實驗動物的環境控制是實驗動物學一個十分重要的內容，但在講授屏障環境時，涉及到屏障環境的溫、濕度調節系統、通風凈化系統、消毒隔離系統以及屏障環境系統內要做到人流、物流、動物流“三流”分開時，在課堂上講，教師往往難以講清楚，學生也難以聽懂。如能根據教學目的，組織學生到實地參觀并講解，那么效果將十分好。屏障系統除感染性實驗室以外，一般多為正壓，學生通過實地參觀進入實驗室時開啟每一扇門迎面吹來的氣流就可以切身感受到屏障環境內不同區域存在著的壓差；通過實地參觀，可以更好地理解屏障環境要進行人、物及動物分流的重要性，了解消毒隔離系統的操作規程。為今后走上工作崗位，進入實驗室工作掌握第一手感性資料。
2.3 實驗法在實驗動物學的實驗教學中，教師應盡量以學生為主體，自己僅充當指導與協作者，讓學生多動手、動腦，以激發學生的興趣，培養其知難而進的勇氣。讓其獨立完成實驗的各個步驟，從而提高學生學習這門課程的積極性和動手能力。對于諸如捉拿、保定、麻醉、采血、給藥等基本操作技術，在進行示范之后，要讓學生親手操作，對于學生因將動物抓得太緊引起動物窒息死亡和灌胃灌到氣管里導致動物死亡等的錯誤操作要及時予以糾正；對于不同動物為何要采取某種采血和給藥的方式。如小鼠采血為什么多采用尾靜脈和摘眼球采血而不用心臟采血，主要原因是因為動物小，心率太快，無法進行心臟采血，讓學生在實踐中找答案。這樣在教師指導下，既能讓學生熟練掌握實驗技術，培養實際操作技能，又能對一些實驗方法有更深的了解。
當然，實驗動物學教學除了以上方法以外，還可以采用討論或問題式教學方法。倡導以教師為主導、學生為主體、形式多樣、生動活潑的師生雙向交流、教學相長的教學模式，積極營造“平等、和諧、求知、創新”的課堂教學氛圍，充分調動教與學的積極性［4］。如對某抗腫瘤藥物的實驗研究可以同學生一起討論為什么要選擇這種動物（如裸鼠）而不選擇別的動物，同時還可以對造模接種的部位、給藥的方式及藥效的評價等進行探討，讓學生對抗腫瘤實驗研究從實驗設計開始到實驗結束全過程有一個全面的認識，為全面提高學生素質打下堅實的基礎。
3 加強考試考核改革，培養“高分高能型”的科技人才
多年來，在我國人才培養中經常會出現學習成績很好，畢業后工作能力一般的所謂“高分低能型”人才現象，造成這種“高分低能”現象的主要原因是考試考核重理論輕實踐、重分數輕能力的結果。對于實驗動物學教學同樣存在這種情況，學生通過該課程的學習是否對實驗動物學的基本知識有比較系統的了解，能否應用實驗動物學的基本知識去分析和解決問題，能否熟練地開展有關動物實驗，能否對動物實驗的各個環節進行嚴格的控制和科學的處理，既能反映學生“學”的效果，也能反映教師“教”的水平。以前多是通過理論考試，根據學生的分數來評定學生“學”的效果和教師“教”的水平。不可否認，這樣的評價方法有一定的科學性、合理性和可操作性，但對像實驗動物學這樣一門實踐性較強的學科就有一定的局限性。為了避免出現“高分低能”現象，培養“高分高能”人才，在本學科的教學改革過程中，加強了考核辦法的改革，對理論考試的基本概念部分可通過問答、思考、判斷題等形式考查；對綜合應用部分可提出某個科研設想，由學生自行設計，并根據其設計方案評分，同時加強實踐基本操作考核，將實驗成績單列，并將實踐動手能力考核成績提高到該門課程總成績的40%。綜合評定學生的學習效果。
盡管在實驗動物學教學改革方面做了一些工作，但仍存在許多亟待探索和解決的課題，如本課程內容及相關基礎課（生理、病理、藥理實驗課）合并的改革；編寫全國中醫藥院校統一的教科書；建立專業化的實驗動物學教學隊伍；開設教師進修培訓基地，加強實驗動物學科建設等。我們期望中醫藥實驗動物教學工作能夠得到教育行政管理部門及廣大實驗動物科技工作者的高度關注。
參考文獻
［1］鄒移海，黃 翔，連至誠，等.中醫實驗動物學［M］.廣州：暨南大學出版社，1999：11.
［2］黃文華，張燈成.與大學生探討實驗動物學在醫學研究中的重要性［J］.西北醫學教育，2002，10（4）：243.
［3］邵義祥，米順星.淺談實驗動物學教學［J］.上海實驗動物科學，2002，22（2）：121.
1醫院注重生物醫學研究與實驗動物福利協調發展的具體措施
歐美一些發達國家非常重視實驗動物的福利和保護,制定了一系列相關的政策、法規和措施,并有專門的組織機構監督并強制執行。在我國,由于實驗動物科學發展起步較晚,對實驗動物的關愛和福利才剛剛引起人們的關注[1]。我院是一所國內外著名的現代化大型綜合性醫院,“醫、教、研”發展水平在全國同類醫院中處于領先地位,醫學研究中實驗動物應用面廣,使用量大。長期以來,醫院黨委十分重視醫學科研人員人文素養的培養和提高,重視實驗動物科學知識的普及和倫理教育,重視保障實驗動物的福利,注重生物醫學研究與實驗動物福利的協調發展。
體現在:①投資新建和改建了多種符合國家標準的實驗動物生產和使用設施,購置了適合不同種類實驗動物使用的標準化籠具和動物實驗設備;②在屏障環境內為實驗動物專門設置了背景音樂,周期性定時自動播放,一定程度上滿足了實驗動物的心理需要。另外還設置了緩控動物照明系統,降低了照度變化對實驗動物正常生理活動的影響程度[2];③自行設計研制了國內第一臺內環境符合國家標準的、最多可同時容納8人同時操作的、內裝無影燈的多功能大型SPF級大、小鼠實驗(手術)臺,自行設計研制了國內第一臺可移動、升降、前后傾翻、設置有可拆卸式輸液架、固定螺桿、手術器械擺放臺、雙向體液導出口和更適合動物躺臥的U型臺面的大動物手術臺。此手術臺設計科學、合理,符合動物體型及解剖特性,使用方便;④建立和完善了詳細的實驗動物生產、防(檢)疫、質控及使用標準化操作規程(SOP)。詳細規定了實驗動物環境、營養、管理、運輸、保定、麻醉、實驗操作、保護動物隱私及尊嚴、術中術后護理、安樂死、尸體焚燒、防疫滅病、重復使用等福利內容,并嚴格執行。在國內首先提出建立實驗動物體系突發事件的各項應急預案,確保實驗動物質量、生命及可持續性。⑤大力加強科技人員有關科學知識普及和技術培訓,對每項實驗項目從實驗動物選擇、數量確定、實驗方案、實驗步驟均由動物實驗科與實驗人員進行討論。到目前為止,全院有400余名科技干部參加了實驗動物科學知識培訓,并取得了由江蘇省科學技術廳統一頒發的江蘇省實驗動物從業人員上崗證書,是江蘇省參加培訓并取得上崗證最多的單位。⑥積極開展動物實驗“3R”研究,在國內首先建立了一項用細胞學方法替代實驗動物進行細菌致病性試驗的方法;⑦建造了實驗動物紀念碑,主碑為青灰色大理石,碑文為雕刻的綠色“實驗動物紀念碑”;副碑為米黃色大理石,碑文為紅色的“紀念為生命科學研究而獻身的實驗動物”。紀念碑掩映在綠草、鮮花、翠竹叢中,既具有濃郁的人文氣息,又飽含深刻的警示及教育意義;⑧在國內首創設計制作了實驗動物對人類貢獻的大型噴繪展板并在科室展出。
展板以實驗動物對生物醫學發展所作貢獻為主線,以人類與動物共同擁有這個地球,實驗動物是人類健康的階梯,關愛動物就是關愛我們自己為主題,選取了從1628年哈維(WilliamHarvey)利用動物發現血液循環,從而把生理學確定為一門科學開始,到19世紀認識糖尿病的本質,20世紀抗生素及磺胺藥物的發明,單克隆抗體的發現及體細胞克隆成功,再到目前正在進行的生命科學研究前沿領域“功能基因組學”的研究等若干醫學發展史上具有“里程碑”式的飛躍都離不開實驗動物為內容,從成果介紹、科學家本人圖片到利用實驗動物種類及實驗過程,圖文并茂,栩栩如生,通俗易懂。豐富多彩的畫面配以具有層次變化的草綠色背景,與周圍綠化帶及相關建筑協調配合,交相輝映,給人以全新的視覺感受,設計新穎,創意獨特。不僅美化了環境,而且還具有重要的科普及倫理教育意義,充分體現了實驗動物對生命科學發展的重要性以及關愛實驗動物、重視實驗動物福利的重要意義。
2醫院注重生物醫學研究與實驗動物福利協調發展取得成效
實驗動物福利工作的好壞,不僅反映了實驗動物學科建設的成就,而且影響著生物醫學研究成果的準確性、社會性及公眾的認可程度,將動物福利融入生物醫學研究中,不僅是知識工程的構建,也是對人才工程的貢獻[3]。在醫院各級領導的關心支持下,我院實驗動物學科建設和保障服務穩步發展,形成了從本學科工作人員到醫學研究人員人人關愛實驗動物的良好氛圍,科室內設備先進,環境優美,設施建設及實驗動物質量符合國家標準,順利通過了軍地雙方歷次組織的檢查驗收,是“江蘇省實驗動物(清潔級大、小鼠)供應基地”(1998)、“中國人民醫學動物實驗中心”(1994)及國內首家“實驗動物倫理及科普教育基地”(2004)。在實驗動物學科領域以第一完成單位獲國家科技進步三等獎、江蘇省科技進步二等獎、軍隊科技進步二等獎各一項、軍隊科技進步三、四等獎四項的科研成果,配合醫院及其他單位完成或正在承擔國家“863”、“973”、國家自然科學基金項目、軍隊及省部級重大科研項目多項,已成為醫院全面可持續科學發展的重要支撐條件之一,促進了我國生物醫學研究事業的發展。
關鍵詞：醫學實驗動物學；教學內容；教學方法；考核評價機制
中圖分類號：G424文獻標識碼：A文章編號：1674-9324（2018）02-0272-02
高等醫學院校《醫學實驗動物學》是碩士研究生必修課程之一，它是進行基礎醫學研究的基本課程。據相關調查顯示，生物學和醫學中60—70%的課題要選用合適的實驗動物進行相關研究；而藥理學、生理學、病理學實驗和外科學實驗等超過70%科研研究領域需要實驗動物參與實驗[1-2]；此外，實驗動物廣泛應用于教學培訓、醫學研究、藥品、生物制品、食品等功能及安全性評價領域[3-4]。實驗動物學作為一門獨特的學科對生命科學領域研究起著越來越重要的作用。
《醫學實驗動物學》課程如此重要，因此，如何做好這門課程的教學工作給授課教師提出了更高的要求。結合近年來實驗動物在使用過程中出現的一些問題，我們對動物實驗課教學從調整教學內容、改進教學方法、改革考核方式等方面做出相應的改革。經過兩輪的教學改革取得了良好的教學效果，充分調動了學生學習的積極性和求知欲，培養了學生嚴謹、科學的學習態度，切實提高了學生的基本操作技能，激發了學生學習的主動性，培養了從發現問題、分析問題到解決問題的科學研究思路，增強了團隊協作意識及能力，全面調高了研究生教學質量。在此，我們結合近2年對碩士研究生《醫學實驗動物學》的教學改革情況，對我校遵義醫學院珠海校區本門課程的教學進行相關教學總結，希望進一步促進醫學實驗動物學教學改革。
一、優化教學內容，理論與實驗整合優化
摒棄“灌輸式”教育模式，將20學時的理論教學降至16學時。我們充分利用學校研究生網絡教學平臺、理論課程其他相關教學內容課件以“學習筆記”形式進行網絡教學。我們將教材中所列10個章節理論教學分為五大專題進行教學：專題一，實驗動物在生命科學領域重要作用；專題二，動物福利與動物倫理；專題三，實驗動物基本操作技術；專題四，人類疾病動物模型；專題五，基因工程動物與轉基因動物的建立。這五大模塊從不同的角度展示了作為醫學生應具備的基本知識。而實驗教學內容，則由16學時增為32學時，實驗教學將分為基礎性實驗、綜合性實驗和設計性實驗這種“三步法”教學來與理論相呼應，進一步將理論融入到實踐中，在嚴格遵循“3R”原則的前提下提高學生的動手操作能力。我們本著“不放棄教材，但不局限于教材”的原則，根據專題實驗的需要，精選教材中相關的章節進行講述；對于教材中沒有及時更新或沒有詳細闡述的部分，借助互聯網資源進行適當補充，做到有的放矢。
二、采用多元化教學方法
我們采用視頻教學、PBL教學和網絡教學平臺相結合的多元教學方法。首先，在實驗教學過程中貫徹實驗動物福利“3R”原則和動物倫理觀，規范實驗操作。實驗課中倡導和強化實驗動物福利倫理觀念是實驗動物學教學改革必不可少的環節之一，將動物福利觀落實到具體實驗操作如抓取、保定、給藥、采血、處死等各環節中，善待動物，及時制止并糾正學生不規范操作，對于虐待動物者給予批評警告并納入期末成績考核。
其次，我們在教學中部分專題還引入“PBL”教學模式，以學生為主體，以問題為中心，在教師的整體把握和指導下，強調學生的主動參與[5-6]。比如，在動物福利這個專題中，我們引入“如何理解動物福利”、“動物解放表現在哪些方面”、“道德進步與動物福利的關系”、“我們在實驗中應該如何合理對待動物”以及“動物應激反應與實驗結果關系”等問題，通過實驗操作及實驗體會分組進行相關討論，并寫出相關匯報，以加深對動物福利的理解與認識，通過“問題式探討”激發學生學習興趣，增強其自主查閱文獻、收集資料等能力。學生是教學中的主體，是教學最終成果的體現者，只有保證學生成為這樣的角色，才能實現最終的教學目的。教師角色也發生了轉變，由知識的傳授者、灌輸者、知識權威、教學中心，轉變為教學活動的組織者、引導者、參與者和研究者，這樣，在教與學的矛盾中，才能促使教師成為創新教學的主要方面，使其正確地把握創新教學的方向。
此外，我們還利用網絡資源及購買的實驗教學視頻進行直觀教學，參考資料有武漢大學實驗動物中心錄制的“實驗動物”；國外動物福利組織提供的“共享世界”；國家衛生部錄制的“動物基本操作技術”、“動物模型基本病理過程”、“顯微注射法建立轉基因動物”；錢永祥與梁文道關于“動物倫理與道德進步”的學習視頻等。多元化教學方法的應用使教學過程形象化、直觀化，達到了文字語言描述難以達到的效果，便于學生進行觀察和思考，利于學生分析問題和解決問題。
三、構建合理的考核評價機制
我們根據學生實際情況，制定評價考核表，從規范操作動手能力評價、創新能力評價、團隊合作能力評價、科研寫作能力評價等方面進行考核[7]（參考表1）。通過實驗考核評價體系綜合評定學生學習能力，符合大部分學生的意愿，同時培養了學生獨立思考問題的能力。其次，請專家組老師深入課堂進行教學評估。最后在課程結束后進行相關問卷調查（表2）。調查結果顯示：98%的同學認為教學改革有助于提高其實驗操作技能和科研能力，能提高其分析問題和解決問題的能力；95%的同學認為可以激發其興趣和主動性，增強其團隊協作能力；94%的同學認為教學改革拓寬了他們的知識面；100%的同學對教學方法滿意，認可教學改革。改革也仍有需要改進的方面，比如，鍛煉學生的表達能力和寫作能力，以及增強師生間互動這三方面體現得不是很好。今后將尋求可行的方法提高以上幾個方面的效果。
四、結語
通過對《醫學實驗動物學》課程中理論與實驗學時的整合優化，使理論知識與實驗內容更加緊密地結合，有助于學生對知識理解的融會貫通，學生也更能從動物的角度考慮它們應享有的權益，從心里油然而生一種敬畏之情；通過對實驗內容的適當擴充，形成相對完整的專題，增加了動手操作機會，培養學生整體的科研思維觀和全面的實驗操作協調能力，掌握基本科研思路從發現問題、提出問題到設計實驗、解決問題四步法著手去構建科研課題研究框架；通過多元化教學方法激發學生學習興趣和提高其自主學習能力，興趣和主動性是科研的開始；通過完善的考核方式更合理地從學習態度、創新思維、動手操作、團隊協作及自主學習5大方面衡量學生的綜合能力，促進學生個性化發展，同時有利于充分提高該課程研究生教學效果。另外，通過解決和應對專題實驗教學中出現的新問題，提高任課教師的整體素質，促進實驗動物學課程的建設和完善。我們也希望能在不斷進行教學革新基礎上，申請教改項目來引入更多實踐教學，構建合理的課程體系，在更大程度上促進實驗動物學的課程建設和發展，進一步推進產學研一體化，培養出真正合格的研究生。
作者：張青峰
參考文獻：
[1]崔淑芳，陳學進等，實驗動物學[M].上海：第二軍醫大學出版社，2013.
[2]師長宏，張海，王四旺等.三維醫學實驗動物學教學體系的建立[J].基礎醫學教育，2012，14（4）：289-291.
[3]王芳.醫學實驗動物學實驗教學與科研的有機結合[J].基礎醫學教育.2013.（11）：1016-1018.
[4]宋國華，劉田福，陳朝陽，王春芳等.醫學實驗動物學教學內容與方法的探討與改進[J].基礎醫學教育，2012，（10）：781-783.
[5]王蕭，郭學軍，張永斌.中醫院校研究生實驗動物學教學的體會與思考[J].西北醫學教育，2013，21（1）：76-78.
關鍵詞：醫學檢驗 實驗教學 生物安全
在醫學領域的安全問題，包括物理安全、化學安全、生物安全三個方面的問題。在醫學檢驗學科中，在實驗室里，主要易發生的安全問題是生物安全問題，本文著重就生物安全做如下探討。
一、提高自身意識，堅持管理嚴格
實驗室生物安全的管理，是指在操作具有潛在致病因子的微生物時，為防止操作人員感染，采取適當的實驗室操作，使用實驗室安全防護裝備，對實驗室的設施、結構提出特定安全要求的一個過程。
在常規的實驗教學中，盡最大努力做到生物安全的防護，保證教學活動正常進行。要積極預防，對進行每次實驗時做到嚴格生物安全管理。在實驗過程中若出現問題，一切要以生物安全為重，杜絕一切違背生物安全的活動。在實驗過程中若出現可能導致感染的意外發生時，必須要在第一時間進行處理，以防止病原微生物進一步擴散。嚴格按照規章制度執行，做到安全衛生的規定上墻。
二、落實責任，明確制度
在實驗過程當中要應堅決執行實驗室操作規程。參與人員在實驗過程中都要接觸各種微生物及致病因子，有些還具有易燃易爆的性質。因此，作為實驗人員，必須遵守實驗室安全守則。如在接觸血液樣本時，所有的樣本要均視為污染性樣本，在檢驗的過程中，如出現針頭損傷或皮膚沾血，應馬上利用肥皂水清洗并擠出傷口余血，再用大量清水沖洗傷口，如需包扎，再根據傷口情況進行包扎。在接觸菌種時，所有菌株的使用均要在生物安全柜及特定的設備內進行操作。試驗結束時，要使用紫外線燈對操作空間進行消毒，并用消毒液對地板及操作臺進行消毒。操作人員在實驗結束后均應根據要求洗手。
在學校的學生、醫院里的實習生有的還不能夠自覺遵守規章制度，作為教師應盡職盡責，規范學生的行為，對其違規的操作應及時制止，給予糾正。如對學生進行分組管理，進行輔導，不但要進行對學生的實驗技術輔導，更應對學生在實驗過程中的生物安全進行督導。
三、加強設備應用，明確設備范圍
在檢驗學中，常規用到得設備由超凈工作臺、生物安全柜、高壓滅菌器、等生物安全設備，使用這些設備要嚴格按照操作規則使用。
超凈工作臺是為了保護試驗品而設計的，通過吹入工作臺內的垂直、水平氣流防止試驗品受到工作區的污染。一旦微生物樣品放置于工作區域，空氣經預過濾器初濾，再經空氣高效過濾，從空氣高效過濾器出風面吹出的潔凈氣流具有一定的和均勻的斷面風速，可以排除工作區原來的空氣，將塵埃顆粒和生物顆粒帶走，以形成無菌的高潔凈的工作環境。從而達到潔凈的目的，減少實驗結果的誤差。此設備在實驗教學中一般用于培養基的制備。
生物安全柜是指：為操作原代培養物、菌毒株以及診斷性標本等具有感染性的實驗品時，用來保護人、實驗室環境以及實驗材料的，使其避免暴露于在上述操作過程中，可能產生的感染性氣溶膠或濺出物而設計的。世界衛生組織出版的《實驗室生物安全手冊》中提出到：“生物安全柜可以有效減少由于氣溶膠暴露所造成的實驗室感染以及培養物交叉污染，生物安全柜同時也能保護工作環境。”
在微生物檢驗實驗時，所有操作均應在該設備中完成。現在一些單位條件不具備使用這些設備時，很多單位仍是使用創痛方法，如用酒精燈創造無菌環境等。這些方法本身對操作者自身的保護能力是比較弱的。
以上兩種設備是檢驗實驗室常用并不可缺少的設備。應合理使用，嚴格按照操作規程操作，以免發生事故。
四、規范實驗動物的使用，重視動物福利
實驗動物是指過經人工飼養，對攜帶的微生物實行控制，遺傳背景明確、來源清楚，用于科研、鑒定、生產、及其他科學實驗用的動物。它是實驗教學中生物安全重要的防范環節。如近幾年所發生的一些特殊傳染病中，大多數都是由于野生動物所致。對于實驗室來講，我們所使用的實驗動物的安全使用也是不可小覷的。在平時的實驗時，應注意不要使用非實驗動物做實驗，否則導致實驗結果的偏差，甚至會產生意外等。在操作實驗動物時，我們也要注意操作方法，要嚴格按照實驗動物操作規程執行，如在抓取實驗動物時應戴手套，并要合理利用動物固定裝置，避免抓傷、咬傷。
在使用實驗動物做實驗時，我們應當重視動物福利，實驗動物是為了科學研究目的而存在的，它的整個生命過程完全受到人為的控制，但它們都是一個鮮活的生命體，應享有生命權。我們要做到的就是在實際工作中，在情感、道義和實踐上尊重、善待實驗動物。
五、加強生物安全管理
【關鍵詞】“互聯網+”；機能實驗；實驗設計
在高職護理專業人才培養中，醫學基礎課程的實驗教學是專業教學的重要手段，是評估理論教學質量、考核學生素質的必要條件。而機能實驗教學作為醫學基礎課程的重要組成部分，在培養護士的實踐能力和團隊精神中發揮了重要作用[1]。伴隨著互聯網絡的普及與發展，教育也和其他行業一樣，一同進入了“互聯網+”的大時代。如何順應學生認知發展的變化，建設高效課堂在高職護理專業機能實驗的課堂中引入“互聯網+”教育理念，將是我們思考的重要課題。
1機能實驗教學現狀
1.1機能實驗已成為一門獨立的實驗課程
自20世紀80—90年代，為了更好的培養高素質人才，國內大多數醫學院校將生理學、藥理學、病理生理學3門學科的實驗教學合并成為一門獨立的實驗學科并成立相關的機能實驗中心。以期加強學科間的聯系，同時培養學生的綜合性科研思維能力和分析問題解決問題的能力。我校也建立基礎醫學實驗教學中心機能實驗室，開設包含機能實驗、形態實驗、微生物實驗在內的《基礎醫學實驗技術》課程，并編寫了適合我校高職醫學生應用的《基礎醫學實驗技術》教材，內容包含動物實驗的基本操作技術、常用實驗器材的識別與使用方法、經典實驗方案和綜合性試驗方案等。
1.2教學內容
現在國內各院校的機能實驗教學多以基礎知識教學和基本技能訓練以及驗證性實驗為主。這種傳統的機能實驗課程也只是簡單的驗證生理學、病理學、病理生理學的某一知識理論和鞏固，缺少課程之間的聯系與系統的疏導。而課上學生根據實驗要求按步驟完成就可以看到預期的實驗結果，按照書本和老師的要求進行實驗課程內容，在實驗過程中學生缺少自主思考的意識和行為。
2存在問題
2.1學生對實驗課程本身的不重視
學生對實驗課程本身缺少重視程度，因為較多的實驗課程不進行考核，并多數情況是以小組為單位完成，因此增加了部分同學的懶惰性。而高職院校中基礎醫學實驗技術在今后的工作中應用性較差，這同樣也增加了學生對實驗課的疏忽。
2.2重結果輕過程，實驗結果缺少真實性
機能實驗主要用到實驗動物及部分危化藥品等，很多同學（特別是高職院校護理專業的學生中女生較多）怕臟、怕動物、怕手術見血，實驗課基本處于旁觀狀態，很多時候不是做實驗而是看實驗，或者當上“小記者”時時朋友圈更新其他同學的實驗進度，這樣的結果可想而知[2]。
2.3章程對實驗動物的保護
在我國《實驗動物管理條例》動物福利章節規定：“實驗人員要愛護動物，不得虐待、傷害動物；再符合科學原則的情況下，開展動物替代方法研究；在不影響實驗結果的情況下，采取有效措施避免給動物造成不必要的不安、痛苦和傷害……”[3]。因此，提高學生實驗課程教學質量、減少實驗動物使用、改善現行的實驗課程教育教學方式是刻不容緩的。
3如何利用“互聯網+”機能實驗高效課堂設計
最近幾年，隨著網絡技術的迅速發展，互聯網已經深入到教育教學的每個角落中，同時也帶給了各門學科無限的發展契機，但如何將互聯網帶入實驗課堂是需要思考的重要問題。而虛擬仿真實驗教學系統就是將計算機虛擬仿真技術與互聯網結合，無需實驗動物和實驗儀器，利用計算機模擬醫學實驗的操作過程，是伴隨科技發展應運而生的先進教學手段[4]。而在教學應用過程中，教師還是充當著主角，學生還是被動接受的模式。
3.1網絡課堂先行，扎實理論學習
基礎醫學實驗技術包括機能實驗、形態實驗以及微生物實驗，而機能實驗中多以動物實驗為主。而實驗動物的操作，學生是很難通過書本文字和教師講解抽象復雜的操作理解到位的。因此，我們先將動手操作移到網上模擬，讓學生們更多的去關注實驗的原理和理論課的聯系，而不是反復停留在實驗操作失敗上的打擊。實驗課堂上，為學生講解實驗需要解決的問題，提供參考資料、對應理論知識，利用問題式學習（problem-basedlearning，PBL）教學法讓學生逐步成為實驗課程的主導者[5]。
3.2課前討論充分，確定實驗方案
對于新的實驗內容，學生單純的通過看書很難理解抽象的實驗內容。教師通過上一次課程布置下次實驗內容，學生可以通過學校網絡平臺進入虛擬教學系統使得學生對實驗課程的內容有初步的了解和認識，提前做好預習和準備工作。以小組為單位做好實驗課程流程、分工及步驟等設計方案，反復通過虛擬操作對實驗過程做深刻了解，根據上節課教師布置的實驗要求，按照PBL經典教學法：提出問題建立假設假設論證歸納總結的要求初步完成實驗報告[6]。也可將實驗設計方案提前與實驗教師進行溝通討論。
3.3課上真實操作，保障教學效果
學生通過課前的討論和預習以及實驗思路的整理，同時按照虛擬教學系統的訓練，在課上進行真實的操作。教師在學生實驗過程中充當觀摩者，適時的對操作過程進行稍許指點和建議。在操作結束后，整理總結實驗經驗，提出需要改進的問題和操作過程中可避免的失誤點，為今后的實驗操作設計總結經驗和教訓。
3.4課后作業提交，批改討論結果
根據課程安排，按照實驗報告要求，以組為單位上交團隊實驗結果，在下節課時反饋信息，小組成員進行整改反饋。綜上所述，在機能實驗課程中利用互聯網開設實驗教育與教學是適應現代基礎醫學教育迅猛發展、培養高素質醫學人才的重要方式，無論是學生在學習中的體驗、教師在過程中的指導以及學校在整體上對學生的培養，其中的重要性不言而喻。“互聯網+”與機能實驗的有機融合，將無可置疑的給基礎醫學實驗技術的進一步發展提供了更有力的支持。因此，把握這個機會，做好實驗課程與時俱進的改變，使得實驗教學跨進豐富的“互聯網+”時代，讓其發展的更遠。
參考文獻
[1]王瑾瑜，徐海，王程，等.自主實驗設計與學生創新能力的培養——醫學機能實驗改革十年回顧與展望[J].中國高等醫學教育，2012（4）：36-37.
[2]劉會芳，劉新霞，趙燕燕，等.機能實驗教學過程中學生存在的問題與改革措施[J].醫學研究與教育，2010，27（1）：110-112.
[3]吳瑞生，張健.現代實驗動物學技術[M].北京：化學工業出版社，2007：21.
[4]鄒丹，吳敏范，符文雙，等.PBL教學法在醫學機能實驗學設計性實驗中的應用[J].醫學研究與教育，2013，30（1）：95-98.
[5]陳麟東.淺析醫學機能虛擬實驗中仿真技術和網絡技術的應用[J].計算機光盤軟件與應用，2013（8）：83-84.
【關鍵詞】
病理生理實驗教學;改革;能力隨著科學技術的飛速發展,社會對人才的需求越來越迫切,對于人才質量的要求也越來越高,為培養適應社會需要的高素質醫學人才,必須把能力培養作為醫學教育目標。病理生理學是醫學教育的一門主干課程,在醫學教學中起著承前啟后的重要作用。它以疾病為研究對象,主要從機能和代謝的角度來闡述疾病的發生發展規律和發病機制,為臨床實踐提供理論依據,越來越受到臨床各科醫師的重視。病理生理學實驗是病理生理學教學的一個重要組成部分,在加強和鞏固本學科理論課程知識的理解和掌握,提高學生的分析問題、解決問題的能力,提高學生的綜合素質,培養出合格的醫學人才等方面發揮著重要作用。本課程以動物實驗為主,通過在動物身上復制人類疾病和病理過程的模型,探討其發生機理。作為普通高等醫學院校的實驗教學,對于培養具有扎實的基礎知識,嚴謹的科學作風,創造性思維及開拓型的復合人才具有得天獨厚的優勢和不可推卸的責任。因此,如何形成更合理、更實用的實驗教學體系,完善病理生理實驗教學改革,提高實驗教學質量是我們一直在積極實踐與探索的問題。為使學生能更好的適應社會發展需求,培養全面發展的高素質跨世紀醫學人才,對病理生理學實驗教學從實驗內容、實驗教學方法、實驗考核方法等方面實施了改革,從而培養醫學生綜合能力。
1 普通高等專科醫學院校病理生理學實驗教學現狀
1.1 對實驗課的重視不夠
1.1.1 實驗課時不足 對病理生理學實驗教學的重要性認識不足,這一點體現在教學的安排上。很多人把實驗教學看作是理論教學的附屬,把實驗教學放在從屬地位。目前,普通高等專科醫學教育學制為三年,一般在第三學期開設病理生理課,臨床醫學、醫學檢驗技術專業總學時31,實驗6學時,占總學時19.34%,護理、助產、中西醫結合專業總學時19,實驗學時0學時,未開設病理生理學實驗。可見,實驗課所占的比例嚴重不足。
1.1.2 實驗經費投入有限 隨著高校的擴招,醫學生人數明顯增加,原有的實驗設備已不能滿足需要,再加上多數醫學院校的實驗教學由于經費投入有限,實驗設備沒有得到及時的更新、加強。這樣的實驗教學一方面不利于培養學生解決實際問題的能力和思維方法的訓練,另一方面不能調動學生的學習積極性,激發學生主動深入考察現象背后的實驗設計思想。
1.1.3 缺乏自己的實驗動物房 在我國本科及以上的醫學院校,都有屬于自己的實驗動物房,為教學、科研提供了便利條件。而對于專科醫學院校大多都是從其他本科院校購買實驗動物,這樣不但不利于教學,而且增加了教學成本。例如:我校要開展病理生理學實驗,就需要從蘭州、天水等地購買實驗用的小白鼠、蟾蜍等,路途遙遠,并且有時也會受到天氣影響,不能按照開學初制定的教學進度開展實驗,影響教學進度,給教學帶來了不便。
1.2 實驗教學方法單一 傳統的實驗教學以知識的記憶和復現為基本目標,把掌握知識本身作為教學目的,教學內容依附于理論教學,以驗證書本理論為主。目前,病理生理學實驗教學采用首先由教師講解實驗目的、使用實驗動物、器材、步驟、方法、注意事項,然后學生分組開始實驗,教師在實驗過程中進行相應的輔導,是以書本知識為本位、教員為中心,以傳授理論知識和實驗技能為主要特征。
1.3 實驗報告質量偏低
通過對學生實驗報告的批閱發現:實驗報告的質量偏低,內容僵化,對出現的實驗現象沒有很好的觀察,深入的思考;如果和實驗結果不符,也沒有進行透徹的分析原因,并沒有充分發揮實驗課的作用。
2 實驗教學改革
2.1 不斷創新,改革實驗內容
從目前病理生理學實驗課時來看,實驗課時不足,所占的比例不到20%。應加強課程改革,適當增加學時。實踐是檢驗真理的標準,也是發現、創造的根本途徑,實驗教學能夠培養學生的實踐能力、思考能力和創新能力,所以適當地考慮增加實驗教學比例,改進實驗教學題目和設計,多開設綜合性、設計性、應用性強的實驗,能夠與時俱進,最大限度發揮實驗教學的預期效果,提高實驗教學題目質量。同時,也可以對已開設的實驗進行改革。例如:我校開展“條件在疾病發生發展中的作用”和“缺氧”這兩個實驗,對于第一個實驗需要使用小白鼠復制缺氧模型,通過改變外部環境和機體狀態來觀察對缺氧耐受性影響;第二個實驗則是使用小白鼠復制不同缺氧類型,觀察不同缺氧類型機體皮膚的變化;對于這兩個實驗都要復制缺氧模型,可以通過改變教學安排,將兩個實驗安排在一起,這樣不但使同學們對缺氧加深認識,觀察不同條件對缺氧影響、各種缺氧類型皮膚變化,加強知識之間的滲透、聯系,并且可以節省一部分實驗動物。
2.2 積極探索,改革教學方法
2.2.1 開設一次實驗設計課,營造主動參與的氛圍
創新能力的培養需要一個思維不受限制的寬松環境,同時也需要積極參與的主動性。針對這一點,實驗教學應著重結合實踐,進行科研作風和思想方法的培養。在常規實驗的基礎上,開展設計性實驗和探索性實驗。由學生作為主體,設計實驗、查找資料、準備器材、配制部分試劑等全過程都讓學生參加。讓學生體會實驗的完整性、連續性和探索性,主動參與,提出問題并設計解決問題方案,并實行具體的實驗操作。使學生能夠充分發揮主觀能動性和創造力,能夠激發學生的學習熱情,促進學生主動思考,既訓練了學生的基本操作技能又增強了動手能力的培養和訓練。
2.2.2 強化教學環節,提高教學成效
在上實驗課之前,對同學們進行實驗做好預先的安排。第一,做好實驗前的預習工作,以免在實驗時對實驗過程不熟悉,邊看書邊做,影響實驗效果,浪費時間。第二,提前分好實驗小組,分配好每個人所擔當的角色,實驗就可以有條不紊進行。對于每個角色,在做不同的實驗時可以變換,使每個同學都能熟悉各種角色。第三,課中加強示教,加強輔導。在實驗過程中對學生嚴格要求,按照實驗步驟認真完成實驗,教師隨時給予指導,對不正確的操作糾正。通過以上幾個環節加強,可以順利完成實驗。
2.2.3 采用現代化教學輔助設備,提高教學質量
隨著現代教育技術的發展,在病理生理學實驗教學中,可以采用多媒體幻燈片、教學錄像等手段,應用多種教學輔助設施,提高實驗教學質量。例如:在實驗前可以觀看相應視頻錄像,熟悉實驗步驟;實驗過程中可以將實驗步驟在幻燈上顯示,幫助同學們熟悉整個實驗過程。
2.3 加強實驗結果討論,注重實驗小結
通過學生親自動手做的實驗,在實驗結束后,組織同學們以討論的方式分析、總結自己的實驗結果并分析原因。例如:在做水腫實驗時,蟾蜍的灌流標本制作完成后,首先灌流任氏液,通過同學們觀察發現,蟾蜍下肢變腫了,重了;再灌流20%葡萄糖時,又變輕了,變皺縮了。對此實驗結果和同學們進行分析、討論、總結。如果和實驗結果不符,要分析原因。每次實驗都能非常認真的思考、分析、總結,可以加深對實習內容的理解,鞏固理論知識。
2.4 仔細、嚴格批閱實驗報告
實驗課后,要求同學們認真完成實驗報告。實驗報告的書寫是一項重要的基本技能訓練,是科學研究論文寫作的基礎,應當實事求是、認真準確地書寫。實驗報告內容包括:一般項目、實驗名稱、實驗目的、實驗動物、實驗步驟和方法、實驗結果。重要的是分析討論,根據所記錄下的實驗結果,聯系所學過理論知識,進行分析。通過學生的實習報告,教師仔細批閱,指出相應問題,從而提高同學們實驗以及書寫實驗報告的能力。
2.5 建立學校自己的實驗動物房及相應等級的實驗室
為了便于學生上課,教師做科研,可以建立學校自己的實驗動物房及相應等級的實驗室,設專人管理,繁殖、飼養教學及科研相關動物,既能滿足教學及科研需要,又可為其他兄弟院校及科研單位提供相應的實驗動物及實驗場地并獲得一部分利潤以進一步改善實驗條件。
【關鍵詞】 骨關節炎；動物模型；文獻綜述
骨關節炎（osteoarthritis，OA）是一種由多種因素相互作用導致的以關節軟骨損害為主的進行性骨關節疾病[1]。致病因素包括炎癥、創傷、老齡化、肥胖、軟骨細胞分化或遺傳易感性等[2-3]。臨床表現為關節痛、僵硬、肥大、活動受限。本病有一定的致殘率，也是中年以上人群喪失勞動力、生活不能自理的主要原因。如今，我國老年化日趨嚴重，但還沒有有效的方法治愈OA，只能控制癥狀和延緩疾病發展，不僅給患者帶來巨大的痛苦，也給國家帶來了社會負擔。為解決這一問題，科研工作者們利用動物模型探討OA的發病機制及治療方法。OA動物模型主要有自l性動物模型、誘發性動物模型、轉基因動物模型3種，所選實驗動物主要有鼠、兔、大型哺乳動物等。本文對常用的動物模型和實驗動物的選擇進行具體分析對比，以便科研工作者選擇更合適的造模方法。
1 實驗動物的選擇
實驗動物的選擇是醫學科研工作者首先要考慮的問題。動物實驗為現代醫學的發展起到了不可磨滅的作用，臨床上每一種新藥物的產生和診療方法的突破，都離不開動物實驗。選擇實驗動物要綜合考慮動物疾病的發病機制、基因與人類的相似性、動物是否容易控制、費用、倫理等很多因素。
目前，常用的實驗動物有小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、大型哺乳動物等[4]。小鼠飼養方便、易于獲取、費用合理、造模周期短；但小鼠跟人類的基因譜差異較大，因而不能完全模擬人OA。大鼠在實驗研究中不僅具有小鼠的優勢，還具有生存能力強、實驗成功率高的特點，目前廣泛用于實驗研究。豚鼠是自發性OA模型最常用的動物，因為其發病率與人OA相似，且性格溫順、體型較小易于飼養、觀察，花費較低。家兔性格溫順，被廣泛用于實驗室研究，家兔因膝關節較大，可行關節內操作，更適合OA動物模型的選擇。大型哺乳動物所需費用比較昂貴，飼養成本大，由于OA實驗研究需要大量動物，因而不合適；但是相對于小動物而言更適宜手術操作。有實驗用刀在狗的膝關節軟骨上造成軟骨劃痕，
2周后出現OA病理變化，該動物模型實驗數據準確，實驗中可根據情況選擇[5]。
2 實驗動物模型
2.1 自發性動物模型 自發性動物模型是指實驗動物沒有任何人為因素參與的在自然狀態下形成的OA。Moskowitz等[6]記錄了30多個天然自發OA模型，其中對Hartly豚鼠的研究最多。Wei等[7]研究證明，Hartly豚鼠軟骨降解過程與人OA退行性變化相似。Hartly豚鼠達到約3月齡時，其膝關節軟骨組織主要表現關節面粗糙不平，軟骨細胞數異常，軟骨中糖胺聚糖異常分布，這與人OA形成的機制相似。肖萍等[8]在對2月齡Hartly豚鼠做實驗時，發現空白對照組1個月后即可自發出現軟骨組織病理性改變。Yamamoto等[9]對C57黑鼠關節軟骨組織分析研究發現，隨著年齡的增加，OA的發病率和嚴重程度逐漸增加，且退化過程十分類似人OA。人類在自然狀態下形成的OA與自發性動物模型形成的OA有很多的相似之處，主要發病機制是關節受累過重，比如體質量大、關節受力不均衡等。Bendele等[10]發現，減輕豚鼠體質量后，可降低豚鼠膝OA的發生率及減輕OA的嚴重程度。這為臨床提供了思考，減輕體質量，避免肥胖，少負重可以預防、減輕OA癥狀。該類動物性格溫順，容易飼養，自然狀態下病理機制穩定，是研究人OA形成機制的重要動物模型。但是該類動物自發形成的OA與人OA存在差異，而且形成時間長，不易掌握數據，費用高，導致該模型一般不作為實驗研究的首選。
2.2 誘發性動物模型 誘發性動物模型是通過實驗措施誘導OA的產生。科研人員可以通過人工干涉的方法更好地控制實驗的發展趨勢以及收集數據，相比自發性OA模型更加穩定，發病過程相對較短，是常選用的動物模型。一般將誘發性模型分為手術方法和非手術方法兩大類，每類方法又具體分為很多種，以下是對實驗中常用的幾種誘發動物模型介紹。
2.2.1 手術方法 手術方法誘導OA，主要是通過造成關節正常受力改變，導致關節應力長時間處于失衡狀態使關節變形產生的動物模型，也有部分手術方法是通過破壞相關組織影響軟骨細胞的正常生長而產生的OA模型。目前常用的造模方法主要有Hulth模型、半月板切除法、前交叉韌帶切斷法、卵巢切除法、臀肌切斷法等。
2.2.1.1 Hulth模型 Hulth模型是最經典的手術造模方法[11]，分為Hulth法和改良Hulth法。其中Hulth法是直接全部切除動物膝關節內側半月板，并切斷內側副韌帶及前后交叉韌帶，使關節破壞，應力失衡，造成關節腔狹窄，關節面摩擦增大，術后任其活動，不固定傷肢，形成類似人OA的病理性改變。王婧等[12]在SD大鼠膝關節行Hulth法造模術后4周，出現關節軟骨表面粗糙不平等OA病理特征。方銳等[13]發現在兔膝關節行Hulth法造模后12周出現類似OA表現。Hulth模型破壞動物維持關節穩定的幾條主要韌帶，使關節受力失衡，局部關節軟骨負重增加，加快關節軟骨變形，該類模型適合研究因韌帶損害導致的OA的治療及關節置換等方面的研究。但Hulth法對關節損傷比較大，很難避免關節感染和創傷對模型動物生理破壞。因而王云峰等[14]對Hulth法進行改良，將家兔右膝內側半月板以及前交叉韌帶切斷，但不切斷后交叉韌帶，分別于造模后2，6，10，14周時觀察膝關節的組織學變化，結果在14周內成功復制出不同時期的膝OA，證實了此種改良方法的可行性。改良Hulth法相對于Hulth法操作較為簡單，手術創傷較小，實驗模型較穩定，實驗數據較可靠，有利于動物模型造模成功，為OA的深入研究打下了基礎。
2.2.1.2 半月板切除法 半月板是維持膝關節穩定的重要結構，可傳布膝關節負荷力，能最大限度地增大關節間的接觸面和減少磨損，從而保證了膝關節長期負重運動不受損傷[15]。Welch等[16]發現，切除大鼠膝關節內側半月板模型中，4周時即發現關節評分顯著增加，證明半月板切除法可以制備膝OA模型。宋濤等[17]對膝關節半月板切除的患者進行隨訪，發現基本出現OA樣病理改變，得出結論：半月板切除后最終會導致膝OA。半月板切除法比Hulth法操作簡單，手術創傷小，動物模型穩定，容易控制實驗方向，可在較短時間內完成造模，是手術方法造模比較可靠的方法之一。但這種造模方法對實驗動物本身仍有不小的損傷，容易造成創傷性感染，因而該模型多用于研究因創傷引起的關節炎的發病機制，不適于探討藥物對OA生化代謝影響方面的研究[18]。
2.2.1.3 前交叉韌帶切斷法 前交叉韌帶切斷法是將實驗動物膝關節前交叉韌帶切除造成局部關節應力發生改變，導致軟骨細胞發生病理改變而引起OA。王婧等[12]SD大鼠麻醉后剪斷其膝前交叉韌帶，不固定傷肢，任其自由活動，術后
6周觀察到嚴重軟骨缺損，軟骨下骨開始硬化，說明前交叉韌帶切除法可造成OA改變。孫先潤等[19]切斷SD大鼠右側膝關節前交叉韌帶，于術后28 d
見全膝形態明顯改變，膝關節骨密度增高及滑膜纖維化增生等OA病理變化。前交叉韌帶切斷法較Hulth法有了較大的改進，本模型手術創傷小，模型穩定，成功率高，操作簡便，是實驗中常用的OA模型。但本法和半月板切除法一樣易出現創傷性關節炎、滑膜炎癥和術后感染，該模型也是研究創傷性關節炎較好的模型之一，因此實驗方法應根據實驗自身需求選擇[20]。因而在臨床上對于創傷性關節炎應避免負重，臥床為主，盡早修復創傷對OA的預防和緩解有很大幫助。
2.2.1.4 卵巢切除法 卵巢切除法是將實驗動物卵巢切除致使雌激素缺乏而間接影響軟骨細胞改變引起OA的方法。李楠等[21]對SD大鼠行卵巢切除法，術后3個月大鼠出現不同程度關節軟骨層變薄，排列紊亂等OA病變表現，證明單純卵巢切除術可以成功建立OA動物模型。李釗等[22]經背部切口切除大鼠雙側卵巢，術后12周可見軟骨表面粗糙，表淺層軟骨細胞減少，軟骨細胞排列紊亂。該模型因其特殊的致病機制，適用于研究雌激素及其類似物對關節的保護作用和絕經期婦女關節損害，因而臨床上對于女性OA患者，應檢查體內雌激素水平，并使之維持正常水平。但是其應用面比較窄，操作復雜，造模時間長，手術條件要求嚴格，很難實際應用。
2.2.2 非手術方法 非手術方法是指通過外界壓力致使關節應力失衡和機體系統循環障礙使實驗動物發生OA樣改變而建立動物模型的方法。目前主要有關節固定法、關節腔內注射法、骨內高壓法等。該類方法操作簡便、經濟適用，不受手術創傷影響。
2.2.2.1 關節固定法 關節固定法又叫關節制動，根據制動部位可分為屈曲位和伸直位制動，屈曲位制動因限制關節運動，減少關節附近肌肉和韌帶收縮運動而導致關節軟骨的萎縮性變化，伸直位制動是使關節應力發生改變而產生關節軟骨退變，因而臨床上多使用伸直位制動法。唐進等[23]用管型石膏將兔左后膝關節伸直位固定6周后，軟骨組織可見細胞減少，排列不規則，部分軟骨表面有破壞，說明伸直位關節制動可導致關節炎病變。田世坤等[24]
將兔膝關節伸直位固定，4周后出現軟骨退行性改變的OA癥狀。該方法直接在關節外操作，無手術創傷影響，操作簡單，材料易于獲取，適合于外界因素導致的關節炎的研究。其缺點是動物會在固定過程中感覺不適而撕咬扯壞固定的材料，影響實驗結果和進程，甚至吞服固定材料感到不適，有些材料如石膏等容易導致動物死亡，因而模型制備的成功率不高，甚至導致實驗失敗[25]。所以在選擇該動物模型時要考慮到各種因素，并且在實驗過程中盡可能一次性固定完美，避免耗材耗時。關節固定造模成功提示我們，對于OA的預防和緩解癥狀，應適當運動，避免運動限制以減輕軟骨
退變。
2.2.2.2 關節腔內注射法 關節腔內注射藥物可分為化學類、酶類、激素類等，化學因子刺激軟骨能快速形成類似人OA的終末期軟骨病理改變，常見的注射藥物有膠原酶、碘醋酸鹽、碘乙酸鹽、木瓜蛋白酶、菲律賓素等。其中最常用的是木瓜蛋白酶，關節腔內注射能較快誘導OA，較其他注射藥物具有造模成功率高、造模時間短等優點[26]。
嵇波等[27]分別在造模第1，4，7 d將木瓜蛋白酶溶液與半胱氨酸溶液的混合液注射入兔膝關節腔內，造模4周后均出現OA病理改變。王平樂等[28]
將質量分數為1.6%的木瓜蛋白酶生理鹽水溶液注射入兔膝關節腔內，造模2周后可觀察到關節軟骨變薄，表面粗糙甚至有纖維樣改變等關節炎病理改變。王婧等[12]在鼠膝關節腔內注入100 μL碘乙酸溶液，造模4周后，軟骨出現明顯損傷；6周后，關節面軟骨層腐蝕殆盡。該模型造模時間短，能在短期內形成類似人OA的軟骨終末病理改變，是最快形成的OA動物模型，其創傷較小，模型穩定，容易產生，適用于OA終末期軟骨病理、治療藥物及方法療效研究。臨床上應避免此類藥物進入關節腔內。但不同動物、不同部位所需的藥物劑量不同，實驗中很難掌控，容易給實驗帶來一定
誤差。
2.2.2.3 骨內高壓法 骨內高壓法是骨內靜脈受阻導致靜脈淤滯、骨內壓升高形成的早中期膝OA。戴七一等[29]結扎并切斷兔的右側臀下靜脈，右下腹部的股靜脈和大隱靜脈，造模8周后關節面可出現明顯缺損和骨贅形成，達到OA初中期的變化。黃等[30]分別在股靜脈遠、近端雙重結扎造模，造模8周后出現軟骨細胞排列紊亂，各層細胞數明顯減少等OA病理表現。賀文楠等[31]行結扎股靜脈并切斷腓腸肌內外側頭造模，造模8周后出現滑膜增厚，軟骨纖維化，12周后出現軟骨面剝脫，有骨贅形成，證實了結扎股靜脈可誘發OA樣病變。該方法打破了骨內和骨外軟組織血液循環之間的動態平衡，導致機體經絡氣血阻滯不通，符合不通則痛的中醫理論。該模型對實驗動物的整體傷害較小，有利于后續實驗研究；但是對結扎靜脈的肢體傷害較大，可能會導致傷肢供血不足而壞死，引起動物不適甚至死亡，使實驗成功率低，因此該模型對實驗水平要求較高。臨床上對于靜脈淤阻形成的OA應活血化瘀通絡，使血液暢行，對于OA預防應避免血管阻塞。
3 轉基因動物模型
轉基因動物模型是應用基因技術把外源基因用實驗方法導入動物基因組中，并使之在動物體內表達或通過生物學技術敲除動物基因組中的某些基因造成基因缺陷建立起來的。隨著科學技術的進步，生物學基因技術也迅速飛猛發展，作為科學技術的前沿，轉基因技術也為OA研究提供了新的選擇。目前OA轉基因動物模型最常選用小鼠，小鼠標記基因已得到很好翻譯，而且小鼠又容易成批獲取，費用不高，可做大規模的實驗研究。有研究對OA患者關節軟骨進行細胞組織學分析，在細胞中發現了細胞凋亡現象，而且與OA的病變程度相符，繼而深入研究發現可以通過控制OA退變基因調控軟骨細胞的凋亡[32-33]。于斐等[34]將小鼠膝關節前交叉韌帶橫斷加內側半月板切除進行造模，其中一組小鼠敲除沉默信息調節因子1（SIRT1）基因，12周后發現敲除SIRT1基因的模型組比對照組膝OA軟骨破壞更加明顯。這也為我們提供了思考，可以通過激活SIRT1基因降低軟骨細胞凋亡。Liu等[35]發現，白蘆藜醇還可以通過激活SIRT1顯著降低一氧化氮合酶及基質金屬蛋白酶的表達，而抑制基質金屬蛋白酶后可以減輕對Ⅱ型膠原的降解，顯著降低因一氧化氮和放射線導致的軟骨細胞
凋亡。
人類與動物的基因基本相似，所以利用實驗動物建立模型研究基因對人OA的調控具有可行性。OA轉基因動物模型避免了手術創傷性和直接對動物的損傷，減少了對實驗結果的干擾。但是每種動物基因還是有區別的，而且目前基因技術不夠成熟，還不能達到對OA具體研究的技術水平，且成功率不高，實驗成本高，致使轉基因動物模型還不能廣泛運用于實驗研究中，所以研究基因對OA的影響還有待于基因技術的提高[36]。
目前，尚需要解決的技術問題有：①選擇合適的目的基因。②治療基因的表達量有待進一步提高。③如何調節治療基因的長期表達。④基因安全：基因突變、基因污染等。因而實驗中基因對OA調控的研究很少，臨床上尚沒有通過基因技術診療OA，因此基因對OA的預防、延緩和逆D還是非常有研究前景的。特別是隨著轉基因技術的發展，轉基因動物模型的研究將會更加深入，因此OA的基因研究必將成為科學工作者的研究熱點。
4 小 結
隨著人類生活水平的提高，人口老年化的加劇，OA發病率也逐漸增加，嚴重影響人類的健康[37]。目前OA發病率、致殘率較高，而且臨床上還沒有一種有效的方法可以治愈，因此OA的研究已經刻不容緩。動物模型是重現疾病發病過程的重要方法，良好的動物模型是研究的基礎，更是實驗結論可靠性的保證。在選擇動物模型的同時，要關注最新的相關研究進展，結合實際情況選擇更快、更廉便、更有效的造模方法，以便能夠在實驗研究中獲得新的突破，為廣大OA患者減輕痛苦[38]。
總的來說，誘發性動物模型是目前最常用的OA動物模型，手術方法因其穩定性好，可較短時間完成造模，目前應用最為廣泛。但由于手術對關節引起的創傷較大，因而不適用于觀察OA早期炎癥介質的表達；而非手術方法則避免了手術創傷對關節軟骨的影響，更符合OA病理過程，在研究藥物及其療效等方面具有優勢。自發性動物模型與人OA的發病機制很相似，模型穩定，干擾因素少；但該模型很難控制實驗方向和數據，對實驗要求較高，所以應用較少。轉基因動物模型是一個很有前景的動物模型，其更加模仿了人OA，也避免了對動物的損傷；但因技術不成熟、實驗要求高，暫時沒有廣泛運用，但未來是研究OA最佳的動物模型。
OA是臨床研究中的一個難點，需要科研工作者的不斷研究和突破來認識OA。研究OA的動物模型有很多種，每一種都有其優缺點。在實驗研究中首先應以人為本，然后綜合考慮選擇最適合的動物模型，為臨床對OA的預防和治療提供更好的理論基礎。
5 參考文獻
[1] 中華中醫藥學會.骨性關節炎[J].風濕病與關節炎，2013，2（2）：71-72.
[2] Goldring MB，Otero M.Inflimmation in osteoarthritis[J].Curr Opin Rheumatol，2011，23（5）：471-478.
[3] Adatia A，Rainsford KD，Kean WF.Osteoarthritis of the knee and hip.Part I：aetuology and pathogenesis as a basis for pharmacotherapy[J].J Pharm Pharmacol，2012，64（5）：617-625.
[4] 陳志達，林瀚洋，余志毅，等.膝骨關節炎動物模型研究進展[J].風濕病與關節炎，2016，5（1）：67-70.
[5] 詹楚寧，付拴虎，程俊，等.骨關節炎實驗動物模型研究進展[J].大眾科技，2013，15（12）：121-123.
[6] Roland W，Roy D，Mare C.骨關節炎診斷與治療[M].4版.謝利民，譯.北京：人民衛生出版社，2008：327.
[7] Wei L，Hjerpe A，Brismar BH，et al.Effect of load an articular cartilage matrix and the development of guinea-pig osteoarthritis[J].Osteoarthritis Cartilage，2001，9（5）：447-453.
[8] 肖萍，董妙珠，洪新宇，等.軟骨保護劑對Halrtey豚鼠軟骨組織和血清蛋白多糖的影響[J].衛生研究，2008，37（2）：171-174.
[9] Yamamoto K，Shishido T，Masaoka T，et al.Morphological studies on the ageing and osteoarthritis of the articular cartilage in C57 black mice[J].J Orthop Surg（Hong Kong），2005，13（1）：8-18.
[10] Bendele AM.Animal models of osteoarthritis in an era ofmolecular biology[J].J Musculoskel Neuron Interact，2002，2（6）：501-503.
[11] Marijnissen AC，van Roemund PM，Verzijl N，et al.Steady progression of osteoarthritic features in the canine groove model[J].Osteoarthritis Cartilage，2002，10（4）：282-289.
[12] 王婧，張忠輝，孫夢嬌，等.大鼠骨關節炎三種動物模型的建立及比較[J].中國細胞生物學學報，2010，32（3）：456-460.
[13] 方銳，艾力江?阿斯拉，盧勇，等.兔骨性關節炎模型構建及早中晚期的特點[J].中國組織工程研究與臨床康復，2010，14（7）：1218-1222.
[14] 王云峰，白人驍.骨關節炎改良Hulth模型的實驗研究[C].全國第八屆中西醫結合風濕病學術會議論文匯編，2010：330-331.
[15]包呼日查.內、外側半月板后根部完全撕裂對膝關節生物力學影響的有限元分析[D].長春：吉林大學，2013.
[16] Welch ID，Cowan MF，Beier F，et al.The retinoic acid binding protein CRABP2 is increased in murine models of degenerative joint disease[J].Arthritis Res Ther，2009，11（1）：R14.
[17] 宋濤，鄭凱，孫新宏，等.外側半月板切除術對膝關節影響的長期隨訪[J].中國矯形外科雜志，2012，20（10）：943-944.
[18] 何名江，張洪美，荊琳，等.骨關節炎動物模型：誰最適宜你的研究？[J].中組織工程研究，2013，17（46）：8069-8074.
[19] 孫先潤，唐濤，李躍瓊，等.SD大鼠膝前交叉韌帶切斷后骨關節的變化[J].中國矯形外科雜志，2013，21（22）：2294-2298.
[20] 翟吉良，翁習生，邱貴興.骨關節炎動物模型的建立及選擇[J].中國矯形外科雜志，2007，15（11）：843-845.
[21] 李楠，王猛，劉永明，等.卵巢切除術構建大鼠骨關節炎合并骨質疏松模型的可行性[J].現代生物醫學進展，2015，15（3）：2413-2416.
[22] 李釗，梁祖建，張百擋，等.微骨折技術保護實驗大鼠骨關節炎關節軟骨的組織學研究[J].中國骨質疏松雜志，2010，16（7）：487-489.
[23] 唐進，黃良庫，彭李華，等.低頻脈沖超聲干預膝骨關節炎模型免關節軟骨及滑膜水通道蛋白3的表達[J].中國組織工程研究與臨床康復，2011，15（11）：1941-1944.
[24] 田世坤，張尚普，王維山，等.強力霉素對制動兔骨關節炎模型對側膝關節早期退變的影響[J].農墾醫學，2009，31（2）：97-100.
[25] 魏苗，胥方元.骨性關節炎動物模型的建立與比較[J].
中國康復醫學雜志，2012，27（8）：777-781.
[26] 馬玉峰，祁應澤，王慶甫，等.關節內注射藥物建立骨性關節炎動物模型研究進展[J].中國骨傷，2015，28（1）：90-95.
[27] 嵇波，郭長青，金燕，等.針刀和電針對膝骨關節炎大鼠痛閾和中樞單胺類神經遞質的影響[J].中國病理生理雜志，2010，26（6）：1091-1095.
[28] 王平樂，郝華，馮丈進，等.補腎活血“對藥”對兔膝骨關節炎模型基質金屬蛋白酶-3及其組織抑制劑-1的影響[J].中國中醫藥信息雜志，2011，18（7）：41-42.
[29]戴七一，覃學流，袁經陽，等.兔骨內高壓型膝關節骨性關節炎模型的建立[J].中國組織工程研究與
（下轉第75頁）
（上接第67頁）
臨床康復，2011，15（20）：3645-3648.
[30] 黃，段戳，袁長深，等.結扎股靜脈對兔膝關節軟骨組織形態學的影響[J].中醫正骨，2010，22（8）：16-18.
[31] 賀文楠，蔣振剛，左新成.疊加造模后膝關節骨密度改變及軟骨基質金屬蛋白酶-13的表達[J].醫學研究生學報，2010，23（6）：605-608.
[32] 陳穎娟，黃慈波，牛素平，等.骨關節炎患者關節軟骨細胞合成和分解基因的表達研究[J].風濕病與關節炎，2016，5（5）：5-8，31.
[33] 杜國慶，丁道芳，李玲慧，等.骨關節炎軟骨退變基因調控的研究進展[J].中國矯形外科雜志，2013，21（11）：1089-1093.
[34] 于斐，雷鳴，曾暉，等.高齡小鼠沉默信息調節因子1基因敲除后膝骨關節炎模型的建立[J].中國組織工程研究，2015，19（49）：7895-7901.
[35] Liu FC，Hung LF，Wu WL，et al.Chondroprotective effects and mechanisms of resveratrol in advanced glycation end products-stimulated chondrocytes[J].Arthritis Res Ther，2010，12（5）：R167.
[36] 曹斌，李彥林，李曉林，等.骨關節炎的轉基因動物模型[J].中國組織工程研究與臨床康復，2011，15（7）：1269-1272.
[37] 阮麗萍，劉健，葉文芳，等.中醫健脾單元療法對膝骨關節炎患者的生活質量、心肺功能的影響及免疫學機制研究[J].風濕病與關節炎，2015，4（3）：5-11.
人文素質教育是通過人文知識傳授、環境熏陶以及自身實踐等方式，培養學生高尚的道德情操、高品位的人格修養以及創造性思維能力和多維知識視野。醫學是研究人的健康和疾病的科學，本身就承載著關愛生命、救死扶傷的崇高責任，因此醫學教育離不開人文素質教育。隨著醫學模式的轉變以及現代醫學教育的要求和社會發展的需求，新世紀培養的合格醫護人員也絕不僅僅只是要求掌握牢固的醫學專業知識，還必須具備良好的醫學人文素質。醫學人文素質教育是對醫學生進行素質和品格的教育，從而更好的培養醫學生熱愛生命、尊重病人、救死扶傷的內在品質。作為醫學院校教師，如何在各學科的教學過程中適時、適當的融入人文素質教育，使醫學專業知識與人文精神相互滲透，更好的提高和培養師生的綜合素質，值得每個教師去探索與實踐。生理學作為一門醫學基礎課，在新生入學的第一學期就將開課。作為生理學教師應當抓住這一重要時期，在醫學教育的早期，就及早有效的在教學過程中多方面來貫穿和滲入醫學人文素質教育。通過該研究者在多年教學活動中的探索與實踐，認為可從以下幾個方面來著手進行。
1 努力提高教師自身素質是根本
“本立而道生，加強人文教育，關鍵在于提高教師的素質[1]。”素質教育必須依靠高素質的教師來完成，只有高素質的教師才可能培養出高素質的學生。正所謂“榜樣的力量是無窮的”，教師的榜樣示范作用對學生的影響不可小覷。就一堂課而言，教師可通過以下幾個方面潛移默化的培養學生的人文素質。首先，教師必須嚴格遵守教學紀律，為人師表，不遲到早退曠工。不難想象，一個經常不遵守教學紀律的老師如何能培養出高素質的學生。其次，始終以飽滿的教學熱情和嚴肅認真的教學態度上好每一節課。教師在講臺上飽滿的教學熱情，可以體現出對本職工作的熱愛，可以感染學生，有助于培養學生對職業的熱愛。教師嚴肅認真的教學態度，可讓學生感受到醫學知識的科學與嚴謹，有助于培養學生科學嚴謹的工作態度。再次，注意維持課堂紀律，及時制止課堂上的不良現象。這樣既有利于順利的進行生理學教學，又可幫助學生樹立遵守紀律的基本素質，還可以于潛移默化之中培養學生勇于同不良現象作斗爭的道德品質。最后，一定要真誠、耐心、細致的對待和解答課堂上學生提出的每一個問題，潛移默化的培養學生真誠、耐心與人溝通交流的醫學人文素質。教師應清楚認識到，課堂教學不僅僅是傳授醫學知識的場所，更應作為育人的渠道，將人文精神教育融匯于醫學課程教學之中，有效地促進醫學生人文精神的培養。教師對學生的人文素質培養絕不僅限于課堂，課后教師還應多與學生交流、溝通。教師在與學生的相處中不可因其身份而高高在上，要平等真誠的對待學生，真情實意的關愛學生。深入學生中，了解他們的學習、生活及面臨的困難，并予以力所能及的幫助。教師通過自身的修養、真誠關愛會潛移默化地影響學生并內化到學生的心靈中去，這對培養醫學生關心人、尊重人、理解人和服務人思想觀念的形成具有重要的作用。因此，要在教學中融入人文素質教育，努力提高教師自身素質是的根本。
2 充分發掘生理學中所蘊含的人文精神，適時與教學內容相結合
（1）講授生理學發展史進行人文素質教育。生理學是研究機體及其各組成部分正常功能活動規律的一門學科，其發展歷程中蘊含著豐富的人文內涵。教師在講授生理學專業知識同時，也要注意相關研究背景的講授。例如，在介紹第四章血液循環時，可介紹英國的Harvey醫生如何通過鍥而不舍的反復實驗研究血液循環。在介紹第六章消化吸收時，可介紹2005年諾貝爾生理學和醫學獎獲得者，澳大利亞科學家羅賓?沃倫和巴里?馬歇爾發現幽門螺旋桿菌的故事；還可介紹林可勝等人對胃運動和分泌機制進行的系統研究，以及他們取得的成就。在介紹第十一章內分泌時，可介紹1965年我國科學家首次合成了結晶牛胰島素等。教師在課堂上講解專業知識同時，給學生講述這些真實的事例，介紹杰出的科學家為生理學發展，為人類健康所做出的杰出貢獻，將人文教育適當、適時地融入到生理學教學過程中，可以于無形中培養學生高度的責任感和使命感，以及無私奉獻的職業精神。同時還能創造生動活潑的學習氛圍，提高學生的學習興趣。
（2）結合生理學相應知識點進行人文素質教育。例如，在血液一章中將介紹血量占體重的7%～8%，即每公斤體重有70～80mL血液，正常人體一次失血不超過總血量的10%，由于機體的代償功能，可以很快恢復，不會對身體造成影響[2]。針對社會上流傳的獻血有害健康的種種傳言，給學生們介紹獻血的條件、要求、標準及獻血的意義。告訴學生無償獻血對正常人體是沒有危害的，是一種無私奉獻、救死扶傷的崇高行為，是愛心奉獻的體現。在介紹血型及輸血時，可給學生介紹臨床工作中的“三查七對”及其重要性。在介紹心輸出量的影響因素時，應當給學生強調在臨床上給病人輸液過程中，控制補液速度補液量，嚴密觀察病人反應的重要性。通過介紹相關知識，一方面可讓學生對今后將從事的職業有一定認識，同時還可以教育學生在工作中應樹立一絲不茍、認真負責的工作作風，真正做到“關愛生命”和“以人為本”。
3 充分利用生理學實驗進行人文素質教育
（1）尊重生命，善待實驗動物。生理學是一門實驗性科學，必然離不開實驗動物。哲學家們注意到“對動物的殘酷行為會使人變得殘暴，而對動物的關愛也會使人變得崇高而更富人性”[3]。因此，在對待實驗動物的態度問題上，教師從一開始就要向學生傳遞“敬畏生命”、“善待和科學使用實驗動物”的理念。并將這些理念貫穿到實驗的每一個步驟中。例如用家兔來進行實驗時，一開始就要告知正確的捕捉方法，而不是簡單粗暴的的揪住雙耳，增加兔子的疼痛和不適。在計算麻醉劑量時，一定要核算清楚，避免因麻醉過量而導致動物死亡，或因麻醉不足而加重動物的疼痛。在手術操作過程中要則應盡量做到細心、謹慎，避免因操作不慎而導致動物死亡。試驗結束后，要求學生克服害怕心理，妥善處理動物尸體。在生理學實驗課程中注意不斷滲透人文關懷精神，可以使學生獲得醫學人文精神的熏陶，從而培養學生對生命的敬畏和尊重；深刻體會將來所從事的是“健康所系、性命相托”的神圣職業。
（2）分工協作，培養團隊精神。臨床工作的協作性和整體性都很強要完成對患者生理、心理、精神及社會文化等全方位的整體護理，團隊精神顯得十分重要[4]。現在的學生大多數是獨生子女，在家里大多是唯我獨尊，缺乏與人合作的團隊意識，對于今后的臨床工作是不利的。以往還曾有過個別同學實驗課不愿動手，不愿參與到實驗中的不良現象。因此在生理學實驗的過程中，應想法培養學生與他人合作完成實驗任務的團隊意識和參與意識。首先在實驗之前將一個班級的同學分為幾個實驗組并指定該組負責人，并告知一個組就是一個團隊，該組的實驗成功與否需要大家的通力合作。然后在講解實驗步驟時，具體說明該如何正確分工，如何操作，依靠團隊的力量去獲得最后實驗的成功。最后還可在小組之間進行比賽，看哪組的實驗做得好，實驗結論分析正確。這樣可讓團隊里的每一個人都積極參與到實驗的環節中，并且人人都有事做，最后一起去分享試驗成功帶來的愉悅和成功感。如此可讓學生體會團隊合作的重要性和培養參與意識。
（3）通過實驗培養嚴謹的工作態度。醫學是一門嚴謹的科學，必須要有嚴謹的工作態度，否則可能會造成不可挽回的后果，正所謂“失之毫厘，謬之千里”。針對個別同學學習態度散漫，做事馬虎、不認真，甚至出現修改實驗數據實驗結果等不良的現象。在每一次實驗前都要求必須要先預習，了解實驗內容、步驟，做到心中有數。在實驗開始之前，務必一步步詳細講解實驗步驟及實驗的注意事項。在實驗過程中，提醒同學認真謹慎進行進行每一步操作，如使用藥物前一定要看清標簽，盡量把失誤降到最低。在實驗過程中認真觀察實驗現象，認真讀取各項數值時，一定要先看清單位和數量級，數值一定要讀準。總而言之，在實驗中嚴格要求，力求培養學生認真嚴謹細致的工作態度。
外科手術學是聯系基礎醫學與臨床醫學的重要橋梁課，是一門實踐性和操作性很強的學科。提高手術學的教學質量，更好地適應新形式下培養高素質人才的要求，對教與學提出了更高的要求，對提高教與學的時效性、實用性，具有積極意義。
1增強學生對外科實驗動物的認識醫學動物實驗是外科學教學中不可缺少的重要環節，而由于手術實驗課的時間長、次數多、學生技能不熟練等因素，常導致學生在動物身上的劣性行為。因此將人文理念融入教學之中，讓學生充分認識到實驗動物的偉大，手術過程動作要輕柔細心，避免造成不必要的損傷。對于科學嚴謹的工作態度的樹立，良好的職業行為和習慣的培養大有裨益［1］。
2強調無菌技術和手術基本操作技術
2.1無菌觀念的培養在無菌技術的教學過程中，要求要非常嚴格，并貫穿整個教學過程中，以便培養學生養成良好的習慣。我們注重強調以下幾點：①老師必須以身作則，比如：必須戴口罩、帽子才能進手術室，親自示范外科洗手法，穿手術衣，戴手套，無菌器械或用品的取用與傳遞等，并指出常見的錯誤；②發現學生的錯誤必須立即指出和糾正，督促學生養成良好的習慣，且在每節課完后進行相應的總結；③將無菌技術納入操作考試內容，并向學生指出每一項的得失分要點。
2.2基本操作能力的培養切開、止血、結扎、縫合四項是最主要的基本操作技術，也是手術學基礎教學中學生能力培養的重點。手術基本操作的熟練程度主要體現在“穩、準、輕、快”四個方面：①穩，即平穩，包括術者情緒上的穩和操作上的穩，使每一個手術步驟扎扎實實，整個手術過程有條不紊；②準，即準確，每一個操作步驟都要準確無誤，特別是解剖血管神經不能有半點差錯；③輕，指輕柔和靈巧，是在穩的基礎上的輕，要與靈巧密切配合，避免手術中用力猛、動作粗暴而引起嚴重的組織損傷；④快，即反應靈敏和手術進程快。反應靈敏指手術中出現意外情況時，必須當機立斷、迅速做出決策。手術進程快指手術操作中每一個具體動作在穩的基礎上要有一定速度，但這種速度一定要建立在高質量的基礎之上，不要盲目追求［1］。
3傳統教學與多媒體教學
有機結合多媒體教學可克服傳統教學視野小等的局限，通過圖形、動畫及聲音等，還可以提高學生的學習興趣。同時，多媒體教學還具有傳統教學所不可比擬的優勢，如可隨時返回重看等，有助于提高課堂教學效果。傳統教學方式可提高學生的直觀感受，對于以后的動物實驗有更深刻的印象。兩者相結合，側重多媒體的應用，更能促進教學質量的提高。
4注重設計性實驗的應用
在進行教學過程中，在學生已經掌握一些基本操作和無菌觀念的基礎上，加強設計性試驗的應用，不僅可以培養學生嚴謹的態度，加深知識的記憶，促進對于臨床的認識，而且對于學生整體觀念和團隊精神的樹立也是非常重要的。具體方式為：將學生分成實驗小組，在實驗前一周，將有關病歷資料和需解決的問題打印成文，分發給學生，說明將要實施的教學程序，小組自學、討論。需解決的問題有：①陳述診斷、診斷依據、鑒別診斷、診療計劃；②將洗手、消毒、鋪單、切開、止血、分離、暴露、結扎、縫合等外科手術學基礎內容貫穿在實驗實施過程中；③書術記錄單，組織學生觀看手術錄像，要求以組為單位寫出實施操作步驟；并確定組內成員在實驗實施過程中扮演的角色，然后老師啟發指導，糾正不足之處，最后進行動物實驗［2］。
5考核方式改革
考試成績由三部分組成：平時成績(10%)，操作考試成績(20%)，理論考試成績(70%)。結合學生存在的問題，如：遲到、時操作中不嚴格要求自己等情況可扣平時成績或者操作考試成績，平時成績針對學生的組織紀律性進行考核。操作考試內容可分為兩組，考前由學生隨機抽簽決定考試內容。考試的目的是為了讓學生能盡可能地掌握教學的內容，因此對打結、穿衣、消毒鋪巾、器械認識等內容的要點要為學生進行復習，并在操作考試結束后，進行總結點評［3］。在實驗教學中，教師要嚴格要求學生把實驗室當成臨床手術室，在實驗過程中要不斷地巡回指導學生，及時發現學生操作中存在的問題并加以糾正。全面提高手術學教學質量，對于優秀的醫學生的培養具有舉足輕重的作用，需要在不斷的實踐中總結提高。
參考文獻
1］ 張集建，左艷芳.淺談手術學教學中的互動作用［J］.局解手術學雜志，2006，15（1）：46.
【關鍵詞】 洋參御唐丸；血脂；高密度脂蛋白；低密度脂蛋白；大鼠
隨著我國人民生活水平的提高，生活方式的改變，糖尿病的發病率呈居高趨勢，通過糖尿病病因病機的分析和臨床新藥的研發，對提高人口素質、解決糖尿病患者的痛苦，有著極為重要的意義。
1 材料與方法
1.1 實驗動物 健康Wistar大鼠120只，雌雄各半。體重(200±20)g，由遼寧雙益實驗動物中心提供。
1.2 藥物與試劑［1］ 洋參御唐丸(西洋參、龜板、山藥、鹿茸、玉竹、葛根、烏梅、黃芪、麥冬、山茱萸等)由黑龍江省中西醫結合研究所制劑室生產)；西藥對照藥：二甲雙胍，由河北文成藥物有限公司提供；中藥對照藥：糖尿樂膠囊，由廣東萬基藥業有限公司提供；鏈脲佐菌素(STZ)由AIGMA CHEMICALCO USA提供；低密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒(PVS沉淀法)；由浙江東鷗生物工程有限公司提供；高密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒(PTA-Mg)：由浙江東鷗生物工程有限公司提供。
1.3 飼料配方 基礎飼料：按AOAC標準配制(豆餅25%、小麥粉19%、玉米粉15%、大米粉20%、麩皮15%、魚粉5%、骨粉3%、酵母1%、食鹽1%、魚肝油1%)由黑龍江中醫藥大學實驗動物中心提供。高糖高脂飼料(膽固醇2.5%、蛋黃粉5%、豬油10%、蔗糖20%、基礎飼料62.5%)：由黑龍江中醫藥大學實驗動物中心提供。
1.4 實驗儀器 TGL-16G臺式離心機，上海安亭科學儀器廠制造；臺式離心機5417C型，德國ERPENDORF公司；722型光柵可見分光光度計，美國PHAMEACIA公司；紫外分光光度計，美國Phamacia公司；AL204型電子天平：梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；TD型電子天平：沈陽龍騰電子稱量儀器有限公司；強生穩毫血糖儀：美國強生公司生產；DZG-6020型真空干燥箱：上海森信實驗儀器有限公司；超低溫冰箱：SANYO ULTRALOW(Japan)。
1.5 實驗方法
1.5.1 分組 120只Wistar大鼠，雌雄各半。分為空白對照組15只予基礎飼料飼養，余105只為造模給予高糖高脂飼料(4周)，4周后禁食、禁水12 h。1次性腹腔注射STZ溶液(STZ溶液為STZ干粉和0.1 mmol/L，pH4.5的檸檬酸鈉—檸檬酸緩沖液在冰浴中新鮮配置，濃度為1%的溶液20 mg/L，調pH值至4.21)每只大鼠按25 mg/kg注射，72 h后測得空腹血糖。以空腹血糖大于16.7 mmol/L為造模成功共造模成功90只，隨機分為6組(洋參御唐丸高、中、低劑量組、西藥對照組、中藥對照組、模型對照組)此后繼續給予高脂飲食。
1.5.2 給藥 洋參御唐丸按5.4 g/kg、2.7 g/kg、1.35 g/kg高、中、低劑量給藥，西藥對照組按0.1125 g/kg給藥，中藥對照組按2.43 g/kg給藥，模型對照組與空白對照組灌胃同體積生理鹽水。連續給藥4周。結束后禁食12 h，以摘取眼球的方法取血，分裝試管。4℃以下3000 min離心10 min。取血清在-20℃冷凍保存。血清按試劑盒操作方法處理后測得高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇數值。
1.6 統計學分析 計量數據以均數±標準差(x±s)表示，數據處理用統計軟件SPSS 13.0進行成組設計t檢驗，以P＜0.05為差異具有統計學意義。
2 結果
實驗結果見表1。
表1 洋參御唐丸對糖尿病大鼠血脂的影響（略）
注：與空白對照組比較 P＜0.05；與模型對照組比較#P＜0.05；##P＜0.01
3 結論
近年來對脂肪細胞內分泌學特性的新發現及對2型糖尿病脂代謝異常的新認識，使血脂異常與2型糖尿病的關系由既往的相關關系上升為病因發病學關系。根據NCEP標準，有40%的2型糖尿病患者有血脂異常，其血脂異常的特點是TG和LDL增高，HDL-C降低的三聯癥。英國前瞻性糖尿病研究(UKPDS)證實，只有控制血壓、血脂，同時控制血糖，才能綜合控制糖尿病及心血管病的發生和發展［1］。本研究表明，洋參御唐丸能降低STZ-DM大鼠LDL-C的血脂濃度，升高STZ-DM大鼠HDL-C的血脂濃度，并且療效與中西藥對照組相當。
洋參御唐丸中西洋參補氣養陰而不生火，黃芪補氣升陽健脾促進運化共為君藥；龜板滋陰潛陽，玉竹滋陰潤肺，女貞子滋陰補腎，山藥滋補脾陰，麥冬養肺胃之陰共為臣藥；山茱萸補肝腎養精血，白芍、烏梅酸甘化陰，葛根生津止渴，鹿茸壯腎益精，配伍精當，全面調節糖尿病人的內分泌代謝障礙，從而減輕脂類代謝的紊亂，延緩并減輕并發癥的發生。
參考文獻
［1］UKPDS Group:Tight blood pressure control and risk of macro-micro-vascular complications in type 2 diabetes［J］.BMJ，1998，317:731-720.
［2］范冠杰.專科專病名醫臨證經驗叢書之糖尿病［M］.北京:人民衛生出版社，2002:65.
[關鍵詞] 卵巢早衰；卵巢低反應；慢性應激；小鼠
[中圖分類號] R285.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）06（b）-0019-04
Study on establishment of premature ovarian function and poor ovarian response mice model through chronic stress
SHEN Kejia SHEN Zouqinxuan LIU Biyuan FU Lingmei XIONG Jie
TCM University of Hu'nan， Hu'nan Province， Changsha 410208， China
[Abstract] Objective To explore the method of chronic immobilization stress which can establish the mice model of premature ovarian function （POF） and poor ovarian response （POR）. Methods Self-made brakes were used to make chronic stress stateon SPFICR female mice， during the general situation， body weight and estrous cycle of these mice were observed. The microstimulated super ovulation was used on the mice after immobilization， and the follicles of the mice were counted respectively on the third day of superovulation and 24 h after HCG injection. Results Compared with those in the non-immobilization mice， the general situation such as eating， hair color and so on were worse， the body weight significantly reduced （P < 0.05）， and the number of abnormal estrous cycle distinct increased （P < 0.05） in the immobilization mice during the braking period. But there was no obvious difference of the follicle number between the immobilization mice and the non-immobilization mice at various levels on the third day of superovulation and 24 h after HCG injection （P > 0.05）. Conclusion Chronic immobilization stress can causethe disorder or degradation of ovarian function，and further study is needed to find whetherit can cause premature ovarian function and poor ovarian response.
[Key words] Premature ovarian function； Poor ovarian response； Chronic stress； Mice
o助生殖超排卵過程中卵巢對促性腺激素的刺激反應低下稱為卵巢低反應（POR），病因與年齡、遺傳和免疫、手術和感染、環境等因素相關，還有一類無明確病因可循，可能是因長期壓力應激導致卵巢功能衰退（特發性POF）而引起的POR在臨床也越發多見[1-4]。目前基礎研究大多為化療藥物、免疫及半乳糖等所致POF動物模型，少見特發性POF/POR動物模型[5-9]。本實驗擬在模擬人類特發性POF的發病經過，用重復制動造成小鼠慢性應激狀態，并在制動結束后進行超排卵，探討是否能建立POF/POR小鼠模型。
1 材料與方法
1.1 實驗材料
1.1.1 實驗動物
6周齡健康SPF級ICR雌性小鼠80只和成年雄性小鼠20只，體重為22～25 g，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，動物合格證號：SCXK（湘）2011-0003。實驗遵循湖南省實驗動物保護和使用指南，并經湖南中醫藥大學實驗動物倫理委員會批準。
1.1.2 超排卵藥物
來曲唑片（LE）：江蘇恒瑞醫藥股份有限公司生產，批號H19991001。注射用尿促性腺激素（Gn）：麗珠集團麗珠制藥廠生產，批號H10940097；注射用絨毛膜促性腺激素（HCG）：麗珠集團麗珠制藥廠生產，批號H44020673。
1.1.3 儀器
自制制動器：用50 mL塑料注射器改造而成，管壁上每隔5 mm左右用燒紅的探針戳穿，形成直徑約2 mm的小孔。TP-5000游锍浦仄鰨合嬉翹炱揭瞧鞒В還庋顯微鏡：日本Olympus。
1.1.4 試劑
二甲苯，100%、95%、80%、70%乙醇，蘇木素，1%的鹽酸乙醇，1%的稀氨水，伊紅，中性樹膠，瑞氏染液。
1.2 方法
1.2.1 分組及制動
6周齡ICR雌性小鼠80只，正常喂養1周后隨機分為四組，分別為模型組、西藥組、中藥組、正常對照組。稱量并記錄體重。模型組、西藥組、中藥組小鼠每上午放入制動器內制動，共制動14 d；每天制動時間從3 h開始，每天延長0.5 h，至最長制動時間為每天6 h，造成小鼠應激狀態；正常對照組不制動。制動第10天開始至制動第14天結束，每天陰道涂片并用瑞氏染色觀察小鼠動情周期。正常的小鼠動情周期為4～5 d，有四期規律的變化，分別為動情前期（17～21 h）、動情期（9～15 h）、動情后期（10～14 h）和動情間期（60～70 h）。若發現動情周期紊亂無規律交替，或在某期明顯延長或持續停留在間期記為動情周期異常，提示小鼠卵巢功能紊亂和/或減退[10-11]。第14天制動結束后再次稱量所有小鼠體重。
1.2.2 給藥
1.2.2.1 各組小鼠均在第15天啟動微刺激超排卵，具體方案為LE+Gn+HCG，即先用LE 0.013 mg/d每日灌胃1次，共5 d；接下來用Gn 0.39 U/d每日腹腔注射1次共7 d，使用Gn最后1天傍晚雌雄鼠合籠，次日晨檢查陰栓，有陰栓者腹腔注射1次HCG（25.71 U/次）。
1.2.2.2 西藥組和中藥組在制動期間分別使用干預卵巢低反應的西藥和中藥（西藥組：第8～19天，每天1次生長激素0.01 U/d腹腔注射，第15天開始至處死日每天1次阿司匹林0.2 mg/d灌胃；中藥組第1天開始至處死日每天1次護卵湯0.597 g/d灌胃，護卵湯組配方參考文獻[12]。模型組和正常對照組未使用干預治療藥物。
1.2.2.3 各組小鼠每天在相同時間段進行相應的藥物灌胃及腹腔注射，不使用藥物的小鼠用生理鹽水代替藥物，保證組間灌胃及腹腔注射操作一致。
1.2.3 標本采集
每組小鼠在超排卵啟動第3天上午脫頸椎處死10只，開腹取出卵巢。每組余下雌鼠在注射HCG前1 d晚上與雄鼠以2∶1比例合籠過夜，次日早晨7：00檢查雌鼠，將有陰栓的雌鼠注射HCG，24 h后脫頸椎處死，開腹取出卵巢。沒有陰栓的雌鼠繼續與雄鼠以2∶1比例合籠過夜，直至發現陰栓后，再按上述方法處理獲取卵巢。
1.2.4 卵泡計數
每組隨機8只小鼠的一側卵巢組織（左右隨機）用10%甲醛固定，常規脫水，石蠟包埋，切片后HE染色，高倍鏡下觀察。每組隨機選擇8張切片（不含連續切片），每張切片選取3個不同區域計數，將每組各張切片3個區域計數的各級卵泡數累積為每組原始卵泡、初級卵泡、次級卵泡、竇卵泡的總個數。
1.3 統計學方法
采用統計軟件SPSS 19.0對數據進行分析，正態分布的計量資料以均數±標準差（x±s）表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗。計數資料以率表示，采用χ2檢驗。以P < 0.05為差異有統計學意義。
2 結果
2.1 一般情況觀察
正常對照組從實驗開始到實驗結束外觀及活動狀態均無異常，體重適度增加。其他組小鼠造模開始后逐漸出現進食減少，二便減少，行動遲緩，四肢無力，毛色晦暗無光并出現不同程度的脫落，制動結束后明顯較正常對照組瘦弱；制動結束后到實驗結束這段時間這些小鼠逐漸恢復進食及二便，行動變活潑，毛色恢復光澤，體重增加。
2.2 各組小鼠體重變化
在各組小鼠開始制動前、完全結束制動后、HCG 24 h后3個時間點稱量各組小鼠的體重。組間比較結果顯示：完全結束制動后模型組、西藥組、中藥組小鼠體重均低于正常對照組小鼠，差異有統計學意義（P < 0.05），提示制動應激對小鼠體重造成不良影響；HCG 24 h后西藥組和中藥組小鼠體重低于模型組，差異有統計學意義（P < 0.01或P < 0.05）。組內比較結果顯示：各組小鼠隨時間推移在制動前、完全結束制動后、HCG 24 h后3個時間點體重逐步增加，差異均有高度統計學意義（P < 0.01）。見表1。
2.3各組小鼠動情周期變化
至制動結束，模型組、西藥組、中藥組發生動情周期異常的小鼠明顯多于正常組，差異有統計學意義（P < 0.01或P < 0.05），提示制動實驗使小鼠處于應激狀態對卵巢功能有不良影響。見表2。
2.4 各組小鼠卵巢組織內各級卵泡數量及比例
分別在超排卵第3天和HCG 24 h后獲取小鼠卵巢組織，結果顯示：四組小鼠卵巢組織內各級卵泡所占比例差異無統計學意義（P > 0.05）。見表3～4。
3 討論
現代社會女性身兼家庭工作多重角色，承受的壓力越來越大，長期焦慮、憂郁、憤怒等負面情緒作為應激，不斷刺激下丘腦-垂體-卵巢軸，引起神經內分泌及卵巢功能紊亂，卵巢功能的受損引起女性生殖功能退化，出現月經失調、閉經、不孕等等系列疾病，嚴重影響女性的生活質量并加速機體衰老進程。即使在輔助生殖技術如此發達的今天，仍有部分患者因卵巢功能衰退無法獲得足夠的高質量卵子而失去生育的機會，給患者身心及社會經濟帶來巨大的壓力。對于卵巢功能障礙，西醫多用激素替代治療及誘導排卵等方法，但療效不確切，副作用大且費用昂貴，中醫藥的優勢越來越受關注[12-20]。所以本研究中，希望通過應激模擬人類特發性POF發病經過，建立相關的動物模型，用以探討西醫和中醫在此方面的療效。
制動（束縛）是最常用的身心應激模型，本實驗將50 mL注射器改造成制動器，與實驗小鼠的體型大小匹配，用燒紅的探針將針筒的前壁及側壁布滿小孔，以減少塑料管內溫度升高，小鼠放入制動器后堵住活塞使其活動受限，但可進食。實驗采用重復制動的方法，每天制動時間從3 h開始，以后每天延長0.5 h，至最長制動時間為每天6 h，使小鼠處于慢性應激狀態。實驗結果顯示，與未制動小鼠相比，經過14 d慢性重復制動處理的小鼠，無論是單純制動的模型組，還是使用西藥或中藥干預的制動西藥組、中藥組，在制動期間進食、活動、精神、毛色等一般情況明顯變差，體重明顯減輕（P < 0.05），憂櫓芷諼陜壹把映/停滯的例數明顯增多（P < 0.05）。重復制動作為慢性應激，刺激下丘腦-垂體-腎上腺皮質軸異常活化，使糖皮質激素持續升高導致海馬神經元受損；同時在應激中發揮調節作用的去甲腎上腺素不斷耗竭，導致抑郁樣癥狀的發生[21]。故本研究觀察到慢性應激后小鼠活動和進食明顯減少、體重減輕、反應遲鈍、皮毛枯燥，與各種抑郁癥狀相一致。高水平的糖皮質激素會直接抑制性腺軸，導致促性腺激素釋放激素及促性腺激素分泌減少，同時卵巢對促性腺激素的反應降低，最終影響卵巢的分泌功能[22-23]。卵巢分泌的雌激素減少導致血清中雌激素水平降低，雌激素的應激性降低與動情周期的應激性變化高度相關。有報道慢性應激導致動物血漿雌激素不同程度降低，部分動物周期未受影響或性周期延長但仍有規律，部分動物血漿雌二醇在動情前期的生理峰值進一步降低或消失，陰道涂片結果表現為無規律或持續處于間期，與更年期大鼠一致[11]。本實驗結果發現慢性制動應激能導致大部分小鼠動情周期異常，可建立卵巢功能紊亂或減退模型，與文獻報道一致[24]。
制動完全結束后對各組小鼠進行微刺激超排卵，于超排卵第3天和HCG 24 h對小鼠卵巢內原始卵泡、初級卵泡、次級卵泡、竇卵泡進行計數，結果顯示制動小鼠與未制動小鼠之間各級卵泡數差異無統計學意義（P > 0.05），各制動組小鼠之間也沒有明顯區別（P > 0.05）。小鼠各級卵泡中，原始卵泡數代表卵巢的儲備功能，與POF直接相關，竇卵泡數代表能發育為成熟卵泡的數量，與POF和POR直接相關。本實驗中各組小鼠間各級卵泡數目沒有顯著差別，說明未建立POF/POR小鼠模型。是否需要延長應激天數或改變應激方式才能建立POF/POR動物模型，據研究報道[11，25]，制動前期小鼠對應激的反應最明顯，一般不超過25 d，隨著應激天數的增加，制動14 d后小鼠逐漸對應激產生適應，動情周期恢復正常，故本實驗選擇實施制動14 d而沒有繼續更長時間。還有研究報道[11，22]通過束縛、冷熱刺激、被動吸煙等多種慢性應激的方法或重復制動可導致大鼠卵巢功能紊亂，但只有部分大鼠出現POF，這些結果均與本實驗結果方向一致，提示應激方法不能得到穩定的POF動物模型，但是能得到穩定的卵巢功能紊亂動物模型。經本實驗驗證，這種動物模型在超排卵刺激后沒有發生卵巢低反應，故今后若研究卵巢低反應相關疾病，選擇化療藥物或免疫因素造成POF或許更能成功建立POR動物模型。
[參考文獻]
[1] 武學清，孔蕊，田莉，等.卵巢低反應專家共識[J].生殖與避孕，2015，35（2）：71-79.
[2] 龔斐，李元.卵巢低反應輔助治療策略[J].生殖醫學雜志，2016，25（10）：901-903.
[3] 王肖，尤昭玲，劉文娥.尤昭玲教授對卵巢低反應的認識及中醫輔助治療特色[J].中國中西醫結合雜志，2016，36（8）： 1008-1009.
[4] 馮桂玲.護卵安胎方對IVF-ET短方案治療POR干預效應的臨床研究[D].長沙：湖南中醫藥大學，2013.
[5] 向瀾，姚廣濤，李瑞霞，等.卵巢功能早衰動物模型建立方法的研究進展[J].中國藥學雜志，2015，50（5）：386-389.
[6] 許小鳳，談勇.卵巢儲備功能下降及卵巢早衰動物模型研究進展[J].中國實驗動物學報，2008，16（4）：309-312.
[7] 張麗娟，陶仕英，趙丕文，等.順鉑建立大鼠卵巢早衰模型的實驗研究[J].世界中醫藥，2015，10（10）：1563-1565， 1569.
[8] 朱玲，羅頌平，許麗綿.左歸丸對免疫性卵巢早衰小鼠卵巢超微結構的影響[J].時珍國醫國藥，2016，27（1）：42-44.
[9] 張麗娜，鄭錦，劉特，等.卵巢早衰的動物實驗研究進展[J].遼寧中醫雜志，2015，42（3）：665-668.
[10] Kam K，Park Y，Cheon M，et a1. Effects ofimmobilization stress on estrogen-induced surges of luteinizing hormone and prolactin in ovariectomizedrats [J]. Endocrine，2000， 12：279-287.
[11] 連曉媛，丁巖，陳奇，等.重復制動應激對雌性大鼠卵巢功能的影響[J].中藥新藥與臨床藥理，2004，15（6）：373-376.
[12] 申可佳.護卵湯對GnRHa超排卵大鼠卵泡發育的影響研究[D].長沙：湖南中醫藥大學，2012.
[13] 王冰，王旭東.中醫藥對不同卵巢早衰模型治療的研究進展[J].醫學綜述，2016，22（6）：1156-1159.
[14] 翁小微，周惠芳.中醫藥干預卵巢早衰的實驗研究概況[J].河南中醫，2015，35（4）：712-714.
[15] 左亞威，王佩娟，盧燕.中藥復方對免疫性卵巢早衰的實驗研究進展[J].中國中醫基礎醫學雜志，2015，21（6）：776-778.
[16] 李冉，連方.卵巢低反應的中醫證治思路和優勢[J].吉林中醫藥，2016，36（6）：553-556.
[17] 馬.補腎活血中藥在卵巢功能障礙（排卵障礙性不孕不育）中提高卵巢對促性腺激素反應性機制的現狀、問題及展望[J].中國中藥雜志，2011，36（17）：2441-2444.
[18] 丁青，尚芬芬.中西醫結合治療卵巢早衰的Meta-分析[J].湖南中醫藥大學學報，2011，31（9）：71-74.
[19] 申可佳，尤昭玲.中醫藥改善超排卵周期卵泡發育的研究思路[J].湖南中醫藥大學學報，2012，32（4）：3-5，10.
[20] 申可佳，尤昭玲.中醫藥對卵巢TGF-β/Smad信號轉導的干預及思考[J].湖南中醫藥大學學報，2013，33（10），104-106.
[21] Osterlund MK. Underlying mechanisms mediating the antidepressant effects of estrogens [J]. Biochim Biophys Acta，2010，1800（10）：1136-1144.
[22] 王麗君.針刺和藥物防治慢性應激對雌鼠生殖內分泌影響的實驗研究[D].武漢：華中科技大學，2011.
[23] 甄玉花，宋陽，關永格.NOD/SCID雌性小鼠動情周期的觀察[J].中國實驗動物學報，2016，24（5）：526-528.
[24] 俞發榮，寧曉希，俞文，等.低頻電刺激對不同動物血內激素水平的影響[J].中國實驗動物學報，2015，23（3）：245-255.
